气相色谱常见问题解答.docx

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气相色谱常见问题解答

气相色谱常见问题解答

问题1:

为什么有些峰出现拖尾

答:

①这可能是由于进样口或色谱柱不干净,或色谱柱切割不正确.冷却进样口,关闭气流并更换或清洁进样口部件,包括进样口衬管和金密封垫.取出色谱柱.切掉一段色谱柱以清除不挥发性残留物,隔垫碎屑和密封圈碎片.这段色谱柱的长度可以是1英寸到1米,如果需要的话,可以更长.使用正确的切割工具来切割色谱柱.如果切割不好,则可能导致样品吸收.使用黄铜刷子或氧化铝粉末等软质研磨剂擦洗进样口钢质内壁.在重新安装其他部件前,要确保已将进样口清洗干净.对于5890,卸下分流出口管路并用溶剂清洗是比较好的方式.

②在不分流方式下进行分析时,不分流时间过长可能导致拖尾.通常时间应在0.5至1分钟范围内.

③未吹扫（死）体积也可能导致拖尾.确保在进样器和检测器中色谱柱安装正确.

④如果考虑色谱柱部分流失,则可以使用色谱柱前的保留间隙（制备色谱柱）.如果没有降低色谱柱效率,则可以将其切割掉或更换掉,并可延长色谱柱的寿命.但要注意保留间隙和分析色谱柱的连接可能引起泄漏和样品吸收.

问题2:

如何改善峰形（前伸峰,拖尾峰）

答:

前伸峰是由于色谱柱过载.当一种或多种化合物的进样量超过色谱柱固定相容量时,可能发生这种情况.液相膜越薄,色谱柱中保留的每种化合物就越少.这涉及到进样体积和进样中每个峰的化合物浓度.通过减少进样量,分流样品或进样浓度较低的样品,可减小进样体积.

问题3:

什么原因导致峰比原来大,而且出现的早

答:

过快,过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少,而更多的进入色谱柱;因此增加柱头压力,可降低分流比.检查分流出品的气体流量,如需调整分流比则对调整此流量.如果问题依然存在,可卸下并清洁分流口.这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起.

问题4:

何时需更换隔垫或衬管

答:

通常比较好的隔垫至少能保证100次进样不发生问题.当色谱特征说明衬管有问题时,需要更换衬管.影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸,进样口温度和压力,当然受压力影响的程度比较小.影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度.应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序.

问题5:

随着进样室温度升高,对分析物分解有影响吗

答:

如果化合物热稳定性差,分析物分解可能会带来一些问题.这在制药工业中比较常见.如果药物或中间体热分解温度低于进样口温度,则分析结果中将出现特殊的峰或与目标分析物发生反应.

问题6:

排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么

答:

诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子（例如DB/HP-1或5）质/荷比m/z将为207,73,281,355等,大多数为环硅氧烷.

问题7:

如何得知分流/不分流进样口的进样体积不超过进样口衬管反应室的容积

答:

如果不是多次重复进样引起精度问题,则不会经常发生这个问题.精度问题经常是由于不合适的进样体积引起.因为分流进样的进样口流速比较高,样品进出进样口比不分流快得多.同样地,由于溶剂没有时间扩散到衬管外,因此分流模式进样体积要求没有那么严格.实际上,1微升是比较合适的,由于降低分流比对增大峰面积比增加进样量更有效.然而,不分流进样要求要严格的多,建议使用蒸汽体积计算器估算最终的扩散体积.

问题8:

排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么

答:

诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子（例如DB/HP-1或5）质/荷比m/z将为207,73,281,355等,大多数为环硅氧烷.

问题9:

色谱分析运行时,标样和样品的峰均随时间加宽,这正常吗

答:

如果保留时间没有很大区别,只是加宽的峰拖尾,可能表明有活化点.如果加宽的峰是对称的,可能是由于正常的色谱柱"损耗和流失".如果峰前伸,说明色谱柱过载.

问题10:

为什么在空白运行中出现了我的样品组分峰

答:

有可能是由于样品制备或系统清洁问题.尝试在样品和空白样品制备中使用新溶剂,并在样品清洗瓶中装上新溶剂.尝试使用新的注射器和隔垫.取出并清洗分流出口管路.在未进样情况下运行以观察仅加热色谱柱有无峰出现.

问题11:

什么原因导致基线不稳和干扰

答:

1.进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.

2.色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.

3.检测器不平衡.检测器一般需要24h才能得到平衡.

4.在程序升温的时候改变载气流速（在很多情况下为正常现象）.

问题12:

什么原因导致过多的基线噪音

答:

1.进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.

2.色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.

3.检测器不平衡.清洗检测器,通常噪音不是突然增大而是逐渐产生.

4.污染或载气质量降低.使用高质量的载气或检查气体是否泄露.一般在换载气钢瓶的时候会突然发生.

5.柱子安装太过.可重新安装.

6.载气流速不合适.重新设定流速.

7.与MS,ECD,TCD联用时发生漏洞,查找并消除漏洞即可.

8.检测器的灯或电子倍增管老化.

问题13:

什么原因导致峰形改变

答:

1.检测器响应改变.检查气体流速,温度和设置.

2.样品的浓度改变.检查并检验样品的浓度,样品的蒸发或成分的改变都可能引起.

3.色谱柱受污染.

问题14:

如果分离度下降,如何处理

1.柱温不同.检查柱温.

2.不同的色谱柱的维数和相位.核实色谱柱的特性.

3.改变载气流速.

4.色谱柱受污染,应用溶媒清洗柱子.

5.进样器的改变.检查进样器的设置.

6.样品的浓度或溶解能力的改变.试用一个不同的浓度.

问题15:

如果出现分裂峰,如何处理

1.试着改变一下进样方法.

2.改变溶媒,使其成为单一的溶媒.

3.重新安装色谱柱.

4.减小进样温度.

问题16:

如果怀疑进样器或载气被污染了,应采用何种检测

1.GC在40-50℃保持8小时或8小时以上.

2.运行一个空白分析（开启GC,但不进样）.

3.收集空白分析的色谱图.

4.第一个空白分析完成以后立即开始第二次,二者间隔时间不要超过5min.

5.收集第二次空白分析的色谱图,并与第一次的图谱进行比较.

6.假如在第一次时,峰图包含了大量的色谱峰,而且基线不稳定,那就暗示了

毛细管柱被污染了（进样器或载气被污染）.

7.假如两次色谱峰图都包含少数的峰或基线的微小漂移,那就可以假定进样器

或载气是比较干净的.假如

8.假如两次色谱峰图都包含重大数量的噪音和（或）基线漂移,那通常也就表

明了进样器或载气被污染了.

问题17:

保护柱应为多长

比较有代表性的保护柱柱长为0.5-10m.虽然没有确定的长度适合所有的样品,但是以下一些建议也可以参考.假如样品相对来说比较纯净,溶质为极性,保护柱应该在0.5-1.0m之间;若样品相对来说不纯净,保护柱应该适当长些.5-10m长的主要是为了维护单一系统.长保护柱允许使用者减去大约1m而代替整个保护柱安装.

问题18.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？

如何解决？

关于漂移问题：

①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定

②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

关于快速变化问题

①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定

②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

问题19.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？

①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

③可能柱超载，减少进样量。

问题20.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

①样品量不足，解决办法为增加样品量

②样品未从柱子中流出。

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

③样品与检测器不匹配。

根据样品化学性质调整波长或改换检测器

④检测器衰减太多。

调整衰减即可。

⑤检测器时间常数太大。

解决办法为降低时间参数

⑥检测器池窗污染。

解决办法为清洗池窗。

⑦检测池中有气泡。

解决办法为排气。

⑧记录仪测压范围不当。

调整电压范围即可。

⑨流动相流量不合适。

调整流速即可。

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。

解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

问题21.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？

如何解决？

①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；

②比例阀失效，更换比例阀即可；

③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；

④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；

⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；

⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

问题22.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？

这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。

尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。

正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。

因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。

在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。

如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。

问题23.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。

其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；

②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；

③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。

这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。

④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。

若柱压还高，请与厂商联系。

一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

问题24色谱双峰产生的可能及判断和处理

HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。

但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。

下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。

色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。

我将这种情况分为四种原因。

1色谱柱

如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。

如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。

当然不反冲，正冲有时也会正常的。

如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。

2溶剂极性及进样量

许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。

目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。

样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。

最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。

当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前（相对进样量少而言），将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。

这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。

上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。

将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。

临床实验室

3样品的特性

有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。

在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如红霉素等。

有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC－MS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（吡虫清）。

4参数记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的，例如C－R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms，HPLC

为5ms，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。

问题25色谱柱中的流动相会排干吗？

不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：

不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。

如此情况是否会损坏色谱柱？

泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？

色谱柱还能使用吗？

事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。

即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。

因为泵只能输送液体，而不能输送空气。

相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。

同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。

即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。

可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。

较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。

色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

问题26.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？

如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。

PEEK管路容易连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且容易调节锥箍之外的管路长度，方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。

使用此类材料的管路需要注意的是：

PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。

虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK遇到上述溶剂会变脆。

另一个西药考虑的因素是压力限。

不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。

使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能，因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。

但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管，因而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。

问题27.为何会基线漂移

原因

①柱温波动。

（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

）

②流动相不均匀。

（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。

）

③流通池被污染或有气体

④检测器出口阻塞。

（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）

⑤流动相配比不当或流速变化

⑥柱平衡慢，特别是流动相发生变化时

⑦流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

⑧样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

⑨使用循环溶剂，不提倡。

未调整检测器。

⑩检测器没有设定在最大吸收波长处。

解决方法

①控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

②使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。

流动相在使用前进行脱气，使用中使用在线脱气或氦气脱气。

③用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。

如有需要，可以用1N的硝酸。

（不要用盐酸）

④取出阻塞物或更换管子。

参考检测器手册更换流通池窗。

⑤更改配比或流速。

为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

⑥用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱。

⑦检查流动相的组成。

使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

⑧改变分析条件。

使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

⑨重新设定基线。

使用新的流动相。

⑩将波长调整至最大吸收波长处。

重选检测波长。

问题28.规则的基线噪音是如何产生的

原因

①在流动相、检测器或泵中有空气（尖锐峰）

②漏液。

③流动相混合不完全。

④温度影响（柱温过高，检测器未加热）

⑤在同一条线上有其他电子设备（偶然噪声）

⑥泵振动。

临床实验室

解决方法

①流动相脱气。

冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

②检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。

如有必要，更换泵密封。

③用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

④减少差异或加上热交换器

⑤断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

采用精密级稳压电源。

⑥在系统中加入脉冲阻尼器

问题29.不规则的基线噪音是如何产生的

原因

①漏液。

②流动相污染、变质或由低质溶剂配成

③流动相各溶剂不相溶

④检测器/记录仪电子元件的问题

⑤系统内有气泡

⑥检测器内有气泡

⑦流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。

）

⑧检测器灯能量不足

⑨色谱柱填料流失或阻塞

⑩流动相混合不均匀或混合器工作不正常

解决方法

①检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。

如有必要，更换密封。

检查流通池是否漏液。

②检查流动相的组成。

③选择互溶的流动相

临床实验室

④断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

⑤用强极性溶液清洗系统

⑥清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

⑦用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池

⑧更换灯

⑨更换色谱柱

⑩维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置

问题30.保留时间漂移的故障排除

保留时间不重现有两种不同的情况：

既保留时间漂移和保留时间波动。

前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。

将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。

如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。

事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。

保留时间漂移的几种最常见的原因如下：

一色谱柱平衡

如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。

通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。

流动相污染也可能是原因之一。

溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。

应注意：

水是很容易污染的流动相成分。

二固定相稳定性

固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。

例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。

水解速度与流动相类型和配体有关。

双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。

经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。

其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。

三色谱柱污染

保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。

HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。

污染源可以是：

流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。

通常通过实验可判断污染的来源。

样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。

这些根源通常是样品基质。

如：

配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。

通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。

可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。

临床实验室

避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。

相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。

通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。

如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。

DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。

使用保护柱是个非常有效的方法。

反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。

四流动相组成

流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。

如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。

五疏水坍塌

当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象，这就是疏水坍塌。

此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。

挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。

色谱柱长期储存也会发生此现象。

使用内嵌极性基团的反相色谱柱（如WatersSymmetryShieldRP色谱柱）或非端基封口的色谱柱（如WatersResolve色谱柱）也可避免发生坍塌。

（一）保留时间变化

①柱温变化－－柱恒温临床实验室

②等度与梯度间未能充分平衡－－至少用10倍柱体积的流动相平衡柱

③缓冲液容量不够－－用>25mmol/L的缓冲液

④柱污染－－每天冲洗柱

⑤柱内条件变化－－稳定进样条件,调节流动相

⑥柱快达到寿命－－采用保护柱

（二）保留时间缩短

①流速增加－－检查泵,重新设定流速

②样品超载－－降低样品量

③键合相流失－－流动相PH值保持在3~7.5;检查柱的方向

④流动