五灵脂与人参配伍化学成分及体外药理活性变化研究硕士博士学位论文.docx

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五灵脂与人参配伍化学成分及体外药理活性变化研究硕士博士学位论文

硕士（博士）学位论文

五灵脂与人参配伍化学成分及体外药理活性变化研究

Studyoncompatibilityoftrogopterusdungandpanaxginseng

changesinchemicalandpharmacologicalactivityinvitro

独创性声明

本人郑重声明：

所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取

得的成果。

尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。

本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。

学位论文作者签名：

签字日期：

年月日

关于论文使用授权的声明

1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：

研究

生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。

3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。

学位论文作者签名：

签字日期：

年月日

导师签名：

签字日期：

年月日

五灵脂与人参配伍化学成分及体外药理活性变化研究

摘要

五灵脂与人参，是中药十九畏中临床应用较多的一对配伍，本论文对五灵脂与人参配伍进行了实验研究，可为临床合理配伍提供科学有效的重要依据。

本论文包括化学实验研究和药理实验研究两大部分。

在化学方面主要进行了以下研究：

1.运用硅胶柱层析法分别从五灵脂的乙酸乙酯提取物中分离得到2个化合物，分别为：

β-谷甾醇和原儿茶酸；从人参中分离提取得到3个化合物，分别为：

人参皂苷Rd、Rc、Rb1。

2.本论文对五灵脂脂肪酸及其他脂溶性成分进行了GC-MS分析，鉴定出42种化合物，其中脂肪酸15种，占脂溶性成分总含量的49.162%，非脂肪酸类成分27种，占脂溶性成分总含量的44.184%。

本论文还采用水蒸气蒸馏法提取了五灵脂的挥发油。

3.本论文通过中医药数据库中五灵脂与人参配伍应用的方剂考证，选取了4个应用较广泛的配伍比例，分别为：

五灵脂与人参配伍5:

1、3:

1、1:

1、1:

3。

并分别用紫外分光光度法、高效液相法对不同比例配伍后样品中的总黄酮、原儿茶酸、总皂苷和9种单体皂苷的含量变化进行了考察，结果表明：

①对人参皂苷的含量测定表明：

二者并用后使人参皂苷类活性成分含量普遍降低，总皂苷及不同配伍比例的人参皂苷类活性成分降低程度有区别；但配伍比例变化与含量变化并不成线性关系，且经配伍后的样品中人参皂苷Rb3含量明显升高。

②对总黄酮的含量测定表明：

配伍后溶液中的总黄酮含量变化显著，但并不成线性相关，且五灵脂与人参配伍为3:

1时，溶液中总黄酮含量达到一个接近于单一五灵脂溶液中的总黄酮含量值。

③对原儿茶酸的含量测定表明：

配伍后溶液中的原儿茶酸含量变化显著，且五灵脂与人参配伍为5:

1，3:

1，1:

1时，溶液中的原儿茶酸含量都明显高于单味五灵脂中的原儿茶酸含量。

在药理实验方面主要进行了以下研究：

1.抗氧化方面，本论文采用DPPH法，对五灵脂不同溶剂提取物及其挥发油、五灵脂与人参不同比例配伍后的醇提物进行体外抗氧化活性研究，结果表明：

各组分均对·DPPH自由基有清除能力。

五灵脂的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物对·DPPH有较强的清除能力；五灵脂的清除·DPPH自由基能力比人参更好，合用后，随着五灵脂量的减少，添加人参量的增加，其清除·DPPH的能力逐渐减弱。

2.抑菌方面，本文选择了大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对五灵脂不同溶剂提取物及其挥发油、五灵脂与人参不同比例配伍后的醇提物的体外抑菌活性进行研究，结果表明：

各组分对大肠杆菌ATCC8099和金黄色葡萄球菌ATCC6538均表现出不同的抑制其生长的活性。

五灵脂不同溶剂提取物中，氯仿提取物和乙酸乙酯提取物对两种菌的抑菌效果都尤为显著，其中在氯仿提取物浓度为25mg/ml时，对两种菌的抑制率都最高，达到60.06%和57.81%，与空白对照组比较有极显著差异（P＜0.01）；五灵脂的挥发油对大肠杆菌ATCC8099和金黄色葡萄球菌ATCC6538的生长均具有抑制作用，但抑菌效果并不明显；五灵脂与人参的醇提物对两种菌的生长也都具有抑制作用，但五灵脂与人参二者醇提物比较，五灵脂醇提物的抑菌作用明显优于人参醇提物抑菌作用，随着配伍比例中五灵脂量的减少，配伍后的醇提物对两种菌生长的抑制作用也逐渐降低，以5:

1配伍的醇提物浓度为25mg/ml时，抑制率最高，达到73.55%和60.58%，与空白对照组比较有极显著差异（P＜0.01），且以5:

1比例配伍的醇提物，其抑菌效果最为显著甚至强于单一五灵脂的抑菌效果。

关键词：

五灵脂，人参，化学成分，配伍实验，抗氧化活性，抑菌活性

Studyoncompatibilityoftrogopterusdungandpanaxginseng

changesinchemicalandpharmacologicalactivityinvitro

Abstract

TrogopterusdungandPanaxginseng,isonepairofnineteenherbsofmutualantagonism.Wasprescriptionincommonuseinclinicalpractice.Experimentsoncompatibilityofthetowmedicineswerepracticedandsummarizedinthisthesis.

Chemicalandpharmacologystudiesaretowmainpartsofthethesis.

Inchemicalworks,towcompoundswereisolatedfromEtOAcfractionoftrogopterusdungabstracttheywereBetasitosterolandproto-catechuicacid.ThreecompoundswereisolatedfromGinsengabstract,theyweresaponinRd,RcandRb1.Fat-solublecompositionintrogopterusdungwasanalysedbyGC-MSmethod,42compoundswereidentifiedand15ofthemwerefat-acid,withacontentof49.162percent.Volatileoilintrogopterusdungwasextractedbysteamdistillation.Fourcommonlyusedcompatibilityproportionofthetowmedicineswerecompared,5:

1,3:

1,1:

1and1:

3.VariationofcontentoftotalflavonoidandsaponinweredeterminedbyUV,whilecontentofprotocatechuricacidandotherninesaponinsweredeterminebyHPLC.Resultsshowedunderpolypharmacycondition,saponininginsengdeclinedexceptRb3,andtherewasnolinearrelationshipbetweenproportionandthecontent.Contentofprotocatechuricacidvariedaschangeofcompatibilityproportion,underconditionof5:

1,3:

1and1:

1,protocatechuricacidinextracthadahighercontentthaninsingletrogopterusdung.

Inpharmacologystudy,antioxidationactivitywastestedbyDPPHmethod.Activityofextractsfromtrogopterusdungbydifferentsolvent,volatileoil,anddifferentcompatibilityproportionwerecompared,EtOAcandn-BuOHfractionoftrogopterusdunghadstrongeractivityineliminatingDPPHradical,andtheactivitydecreasedasgingsenggoestoahigherproportionincompatibility.Bacteriostaticstudywascarriedoncolibacillusandstaphylococcusaureus,allabovegroupsperformedinhibition,chloroformandethylacetateextractoftrogopterusdungshowedoutstandinginhibitionratio,under25mg/mlcondition,theratiocameto60.06%and57.81%.Volatileoiloftrogopterusdungalsoshowedinhibitionactivity,butwasnotsignificant.Bothgingsengandtrogopterusdungethanolextractwereabletoinhibitcolibacillusandstaphylococcusaureus,whiletrogopterusdunggroupperformedstronger.Proportion5:

1cametothehighestinhibitionratioatconcentrationof25mg/ml,theratiowas73.55%and60.58%,whichwassignificantdifferencetotheblank,thatwasevenhigherthansingletrogopterusdung.

Ourstudymanifestedthefollowingresults:

Compatibilityofthetowmedicines,affectedcontentofsomesaponininginseng,andenhancedactivitycomponentsintrogopterusdung.Asproportionofpanaxginsengwenthigher,activityofantioxidationandbacteriostasisdeclined,butsomeofthemperformedstronger.Thisindicatesthat,compatibilityoftrogopterusdungandpanaxginsengisfeasibleinclinicalusefortreatmentoftrogopterusdung-treatingdiseases.

Keyword：

Trogopterusdung，Panaxginseng，Chemicalstudies，compatibility，antioxidationactivity，Bacteriostaticstudy

目录

第一章前言8

1.1五灵脂与人参配伍研究概况8

1.2五灵脂研究概况12

1.3人参研究概况15

第二章五灵脂、人参化学成分研究18

2.1五灵脂的化学成分研究18

2.2人参的化学成分研究27

第三章五灵脂与人参配伍化学成分变化研究30

3.1五灵脂与人参配伍中总黄酮的含量变化研究30

3.2五灵脂与人参配伍的原儿茶酸含量变化研究34

3.3人参与五灵脂配伍中总皂苷的含量变化研究41

3.4人参与五灵脂配伍中9个人参皂苷单体的含量变化研究44

第四章˙DPPH法体外抗氧化活性研究52

4.1清除·DPPH自由基的原理53

4.2实验材料、仪器及试剂53

4.4结果与讨论55

第五章体外抑菌活性研究59

5.1实验材料、仪器及试剂59

5.2实验方法60

5.3实验结果62

5.4结果与讨论71

第六章结论73

参考文献76

致谢79

作者简介80

插图清单

图1-1复齿鼯鼠及五灵脂13

图2-1五灵脂提取流程图20

图2-2五灵脂脂溶性成分总离子流色谱图22

图2-3人参总皂苷提取流程图28

图3-1芦丁标准曲线示意图32

图3-2总黄酮含量变化趋势示意图33

图3-3原儿茶酸标准曲线示意图36

图3-4原儿茶酸标准品HPLC36

图3-5单味五灵脂HPLC38

图3-6五灵脂与人参配伍5:

1HPLC38

图3-7五灵脂与人参配伍3:

1HPLC39

图3-8五灵脂与人参配伍1:

1HPLC39

图3-9五灵脂与人参配伍1:

3HPLC39

图3-10原儿茶酸含量变化趋势示意图40

图3-11人参皂苷Re含量变化趋势示意图42

图3-12总皂苷含量变化趋势图示意图44

图3-13人参皂苷标准品HPLC检测结果45

图3-14单味人参HPLC46

图3-15五灵脂与人参配伍1:

3HPLC46

图3-16五灵脂与人参配伍1:

1HPLC46

图3-17五灵脂与人参配伍3:

1HPLC46

图3-18五灵脂与人参配伍5:

1HPLC46

图3-19人参皂苷Rb1、Rb2、Rf、Rg1、Rg2含量变化趋势49

图3-20人参皂苷Rb3含量变化趋势49

图3-21人参皂苷Rc、Rd含量变化趋势50

图3-22人参皂苷Re含量变化趋势50

图4-1五灵脂各层提取物清除·DPPH活性56

图4-2五灵脂与人参配伍的醇提物清除·DPPH活性57

图4-3五灵脂挥发油清除·DPPH活性58

表格清单

表2-1五灵脂脂肪酸成分组分及相对含量23

表2-2五灵脂非脂肪酸成分组分及相对含量24

表3-1样品称量32

表3-2五灵脂、五灵脂和人参配伍的总黄酮含量34

表3-3样品称量35

表3-4原儿茶酸标准曲线数据36

表3-5对照品的精密度（n=3）37

表3-6重现性实验结果37

表3-7稳定性实验结果37

表3-8加样回收率测定结果38

表3-9含量测定结果40

表3-10人参、五灵脂和人参配伍的总皂苷含量43

表3-11样品称量45

表3-12人参皂苷检测的色谱条件45

表3-13含量测定结果48

表4-1五灵脂各层提取物清除·DPPH活性55

表4-2五灵脂与人参配伍的醇提物清除·DPPH活性56

表4-3五灵脂挥发油清除·DPPH活性57

表5-1不同阳性药的抑菌圈直径（mm）62

表5-2五灵脂石油醚提取物的抑菌作用（n=3）63

表5-3五灵脂氯仿提取物的抑菌作用（n=3）63

表5-4五灵脂乙酸乙酯提取物的抑菌作用（n=3）64

表5-5五灵脂正丁醇提取物的抑菌作用（n=3）65

表5-6五灵脂挥发油的抑菌作用（n=3）66

表5-7五灵脂醇提物的抑菌作用（n=3）66

表5-8五灵脂与人参（5:

1）配伍后醇提物的抑菌作用（n=3）67

表5-9五灵脂与人参（3:

1）配伍后醇提物的抑菌作用（n=3）68

表5-10五灵脂与人参（1:

1）配伍后醇提物的抑菌作用（n=3）69

表5-11五灵脂与人参（1:

3）配伍后醇提物的抑菌作用（n=3）69

表5-12人参醇提物的抑菌作用（n=3）70

第一章前言

1.1五灵脂与人参配伍研究概况

1.1.1五灵脂与人参配伍的文献研究

中药十九畏是中药药性理论的重要组成部分，其是否为临床配伍禁忌，从古至今都颇有争议。

而本文研究的五灵脂与人参正是中药十九畏中临床应用较多的一对配伍，对其进行实验研究，可为临床合理配伍提供科学有效的重要依据。

参考李德全[1]的五灵脂与人参配伍的方剂统计分析结果，得知五灵脂与人参配伍共用的古今方剂共47首。

其中以五灵脂功效、主治为主的方剂有34首，以人参功效、主治为主的方剂有8首，以二者功效并重的有5首。

1.1.1.1以五灵脂功效、主治为主的方剂有：

1.化癥回生片：

五灵脂（醋炙）14g，人参42g。

处方来源：

《中国药典》（2000年版）。

2.七珍散：

五灵脂5钱，人参5钱。

处方来源：

《玉案》卷五。

3.人参川芎汤：

五灵脂1分，人参1分。

处方来源：

《医碥》卷六。

4.马兜铃散：

五灵脂1两，人参1两。

处方来源：

《圣惠》卷四十六。

5.乌蛇丸：

五灵脂（炒）1两，人参1两。

处方来源：

《圣济总录》卷十一。

6.五灵脂汤：

五灵脂1两，人参半两。

处方来源：

《圣济总录》卷六十五。

7.五灵脂汤：

五灵脂5分，人参8分，。

处方来源：

《女科玉尺》卷四。

8.五灵脂散：

五灵脂杏核大，人参1钱。

处方来源：

《鸡峰》卷二十。

9.全生锭：

五灵脂（水飞）2钱半，人参2钱半。

处方来源：

《诚书》卷八。

10.化癥回生丹：

五灵脂2两，人参6两。

处方来源：

《温病条辨》卷一。

11.太一神应丹：

五灵脂1分，人参2分半。

处方来源：

《秘传外科方》。

12.牛黄搜风丸：

五灵脂1两，人参3两。

处方来源：

《疡医大全》卷二十八。

13.世秘资生丹：

五灵脂（醋浸，瓦焙）5钱，人参5钱。

处方来源：

《宁坤秘籍》卷上。

14.仙传一块气丸：

五灵脂1钱1字，人参1钱1字。

处方来源：

《医学入门》卷七。

15.白虎丸：

五灵脂3两，人参3两。

处方来源：

《普济方》卷九十三。

16.产宝丸：

五灵脂（醋炒）5钱，人参（炒）5钱。

处方来源：

《奇方类编》卷下。

17.产后丸：

五灵脂5钱，人参3钱。

处方来源：

《全国中药成药处方集》（南京方）。

18.安胃散：

五灵脂（以醋和面裹，烧令香熟去面）杏核大，人参1分。

处方来源：

《普济方》卷三十六引《指南方》。

19.妇科回生丹：

五灵脂（醋炒）5钱，人参（去芦）3钱。

处方来源：

《全国中药成药处方集》（天津方）。

20.朱砂丸：

五灵脂半两，人参1分。

处方来源：

《圣惠》卷八十二。

21.返元汤：

五灵脂钱半，人参5分。

处方来源：

《简明医彀》卷七。

22.定坤丹：

五灵脂（醋炒）5钱，人参（去芦）5两，。

处方来源：

《北京市中药成方选集》。

23.狐肝丸：

五灵脂1两，人参1两半。

处方来源：

《圣济总录》卷六。

24.绎皮丸：

五灵脂2两，人参2两。

处方来源：

《朱氏集验方》卷十。

25.转治汤：

五灵脂2钱，人参5钱。

处方来源：

《辨证录》卷三。

26.保和锭子：

五灵脂5分，人参2钱半。

处方来源：

《万氏家抄方》卷五引钱氏方。

27.神仙秘宝丹：

五灵脂（炒）8钱，人参（去芦）半两。

处方来源：

《杨氏家藏方》卷一。

28.胡黄连丸：

五灵脂半两，人参半两。

处方来源：

《圣济总录》卷一七七。

29.消癖丸：

五灵脂1钱，人参3分。

处方来源：

《普济方》卷三九一。

30.琥珀人参丸：

五灵脂1两，人参1两。

处方来源：

《张氏医通》卷十三。

31.紫金锭子：

五灵脂5分，人参2钱半。

处方来源：

《古今医鉴》卷十三。

32.散血消肿汤：

五灵脂5分，人参7分。

处方来源《医学入门》卷七。

33.集圣丸：

五灵脂（炒）2钱，人参3钱。

处方来源：

《幼幼集成》卷三。

1.1.1.2以人参功效、主治为主的方剂有：

1.乌附苁蓉丸：

人参半两，五灵脂半两。

处方来源：

《普济方》卷二四三。

2.长生聚宝丹：

人参（去芦）2两，五灵脂1两。

处方来源：

《医方类聚》卷一五三引《经验秘方》。

3.回生丹：

人参9g，五灵脂15g。

处方来源：

《金鉴》卷四十八。

4.补阳固代长生延寿丹：

人参7钱，五灵脂5钱。

处方来源：

《中国医学大辞典》引彭祖方。

5.豆蔻藿香汤：

人参1两，五灵脂1两半。

处方来源：

《医方类聚》卷八十九引《施圆端效方》。

6.固本暖脐膏药：

人参5钱，五灵脂5钱。

处方来源：

《活人方》卷二。

7.彭祖固阳固蒂长生延寿丹：

人参7钱，五灵脂5钱。

处方来源：

《医学入门》卷一。

8.蒸脐秘妙方：

人参7钱，五灵脂5钱。

处方来源：

《遵生八笺》卷十八。

1.1.1.3以二者功效并重的方剂有：

1.益气活血汤：

人参10g，五灵脂10g。

处方来源：

福建中医药1993,24（5）：

13

2.八珍加味汤：

人参3钱，五灵脂3钱。

处方来源：

《医中一得》。

3.华山五子丹：

人参2两，五灵脂2两。

处方来源：

《医方类聚》卷八十九引《施圆端效方》。

4.灵砂丹：

人参（去芦）半两，五灵脂1分。

处方来源：

《幼幼新书》卷二十三引《医方妙选》。

5.参脂四物汤：

人参2钱，五灵脂（微焙，研末，酒飞，去砂）2钱。

处方来源：

《医林纂要》卷八。

1.1.1.4讨论：

人参从古至今一直作为重要药物，在各方面应用的都比较多，尤其在抗衰老方面应用较多。

但是从上边内容分析可知，在五灵脂和人参配伍应用的方剂中大多数是以五灵脂的主治功效为主的，多用于胃痛瘀血症和妇科瘀血症，二者配伍后虽然也有用于抗衰老的治疗，但数量较少，只有2-3首，这一点与人参大量在抗衰老方剂中应用这一现象很不相称，是否提示：

五灵脂与人参配伍后，五灵脂使人参在抗衰老方面的作用丧失了？

人参又是否使五灵脂的在某些方面的作用增强了？

国内在对五灵脂与人参配伍后的很多方面都进行了实验研究，多数是对人参部分活性成分变化进行研究，但从文献分析来看，五灵脂与人参配伍，多数是以五灵脂功效、主治为主，但目前对五灵脂与人参配伍后五灵脂活性成分含量变化方面尚缺乏研究来证实，因此，本论文以此作为深入研究的方向之一。

1.1.2五灵脂与人参配伍化学实验研究进展

近年来，有很多学者从