4、硫辛酸是一种酰基载体,存在于丙酮酸脱氢酶和α—酮戊二酸脱氢酶
5、限制性内切酶是能识别特定核苷酸序列的核酸内切酶
6、糖异生途径不是糖酵解途径的简单逆反应
7、排阻层析(凝胶过滤层析)是根据分子大小进行分离的技术,不同大小的分子受到的排阻不同,最终按照分子大小从小到大的顺序流出
8、端粒酶实际是一种反转录酶,它以RNA为模板来合成DNA的端粒结构(真核生物线性染色体的两个末端具有端粒结构富含G,功能是稳定染色体末端结构,防止染色体间末端连接,并可以补偿滞后链5’末端在消除RNA引物后造成的空缺,端粒酶的存在使端粒保持一定的长度)
9、肌红蛋白和血红蛋白又相似的三级结构,但共价结构不相似,动力学常数也不同
10、构成生物膜的脂质、蛋白质、糖类在膜两侧的分布都是不均匀的
四、名词解释
1、PI:
氨基酸净电荷为0时的PH称为等电点,即PI
2、蛋白聚糖:
是一类特殊的糖蛋白,由一条或多条糖胺聚糖和一个核心蛋白共价连接而成
3、生酮氨基酸:
分解过程中能产生乙酰乙酰辅酶A的氨基酸,可通过乙酰乙酰辅酶A变为乙酰乙酸和β—羟丁酸,这些氨基酸称为生酮基酸(生糖氨基酸:
凡能形成丙酮酸、α—酮戊二酸、琥珀酸、草酰乙酸的氨基酸都称为生糖氨基酸)
4、酶活力单位:
一定条件下,一定时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量(比活力:
每mg蛋白质所含的酶活力单位数)
5、PCR:
聚合酶链反应,是体外酶促扩增DNA的一种应用广泛的生物技术,又称无细胞分子克隆法
6、SDS-PAGE:
十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳,再聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠和少量巯基乙醇,用于测定蛋白质分子量的方法
7、氧化磷酸化:
伴随电子经电子传递链传递到氧,ADP被磷酸化形成ATP的酶促过程即是氧化磷酸化作用
8、蛋白质组:
指细胞内基因组表达的所有蛋白质
9、一碳单位:
具有一个碳原子的基团称为一碳单位
10、岗崎片段:
DNA复制时,3’—5’走向的链短期内首先合成较短的DNA片段,接着出现较大的分子,这些较短的DNA片段称为岗崎片段
11、别构效应:
多亚基蛋白一般具有多个结合部位,结合再蛋白质分子的特定部位上的配体对该分子的其他部位产生的影响称为别构效应
12、G蛋白:
全名GTP结合蛋白,它既与GTP结合,也与GDP结合,是一类信号传递蛋白
13、Na+-K+ATP酶:
是一个跨膜的Na+-K+泵,即通过水解ATP提供的能量主动向外运输Na+,而向内运输K+
14、Motif:
是具有特殊功能的超二级结构,是二个或三个具有二级结构的肽段,再空间上相互接近形成的一个具有特殊功能的超二级结构
15、质粒:
染色体外自主复制的遗传因子,多为共价闭环的DNA分子
五、问答题
1、
(1)前处理:
分离纯化某中蛋白质,首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来,并保持原来的天然状态,不丢失生物活性就。
对于猪肝应先剔除结缔组织和脂肪组织,再用电动捣碎机等设备对猪肝进行细胞破碎,再选择适当的缓冲液把SOD酶提取出来,细胞破碎等不溶物用离心或过滤的方法除去
(2)粗分级分离:
当蛋白质提取液获得后,选用一套释放的方法,将所需蛋白质与其他杂质分离开。
对于SOD酶可以选用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离法等。
(3)细分级分离:
也就是样品的进一步纯化。
对于SOD酶可选用层析法进行纯化
(4)结晶:
是蛋白质分离纯化的最后步骤,尽管结晶并不能保证蛋白质一定是均一的,但只有某种蛋白质再溶液中的数量占有优势时才能形成结晶,结晶过程本身也伴随这一定程度的纯化。
对于细分级分离后得到的SOD酶可以进行结晶。
2、蛋白质的结构和功能之间具有高度的统一性和适应性,二者密切相关。
在丝氨酸蛋白酶中胰凝乳蛋白酶的结构是个典型。
它的结构是以个紧密球状实体,活性中心位于酶分子表面凹陷的小口袋中,这个沟较深,说明了胰凝乳蛋白酶对芳香族和其他大的疏水性侧链的专一性的功能,在活性中心中His57与Ser195相临近,Asp102的羰基也在其附近,这3个残基形成了催化三联体,这种结构构成了酶的催化活性。
在催化过程中,专一性侧链进入酶的口袋,然后通过酸碱催化和共价催化完成催化作用。
正是蛋白质结构和功能之间的这种统一性和适应性,才是胰凝乳蛋白酶巧妙的完成了它的催化作用,可见蛋白质结构和功能的密切相关。
3、
(1)化学偶联假说:
见2007
(2)构象偶联假说:
见2007
(3)化学渗透假说:
这种假说认为电子传递释放出的自由能和ATP合成是与一种跨线粒体内膜的质子梯度相偶联,也就是电子传递的自由能驱动氢离子从线粒体基质跨过内膜进入到间隙,从而形成跨线粒体内膜的氢离子电化学梯度,这个梯度的电化学势驱动ATP的合成,这种假说可以解释很多关键现象:
①氧化磷酸化作用的进行需要封闭的线粒体内膜
②线粒体内膜对氢离子、氢氧根离子、钾离子、氯离子等离子都是不通透的
③破坏氢离子浓度梯度的形成都必然破坏氧化磷酸化作用的进行
④线粒体电子传递所形成的电子流能够将氢离子从线粒体内膜逐出到线粒体间隙
⑤大量实验表明膜表面不仅能滞留大量质子,而且在一定条件下,质子能沿膜表面迅速转移,其速度超过在大量水相中的速度
4、乳糖操纵子包括启动子、操纵基因和三个结构基因(分别编码分解乳糖所需要的3种酶),乳糖操纵子的操纵基因lacO不编码任何蛋白质,它是另一位点上调节基因lacI所编码的阻遏蛋白的结合部位,阻遏蛋白是一种变构蛋白,当细胞中有乳糖或其他诱导物的情况下阻遏蛋白便和他们结合,结果使阻遏蛋白的构象发生了改变而不能结合到lacO上,于是转录便得以进行,从而使吸收和分解乳糖的酶被诱导产生。
如果细胞中没有乳糖或其他诱导物则阻遏蛋白就结合在lacO上,阻止了结合在启动子P上的RNA聚合酶向前移动,使转录不能进行
5、
(1)关键调控步骤:
在糖酵解中:
①葡萄糖在己糖激酶作用下生成葡萄糖—6—磷酸
②果糖—6—磷酸在磷酸果糖激酶作用下生成果糖—1,6—二磷酸
③磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激酶作用下生成丙酮酸
其中第②步是主要的
TCA循环中:
①草酰乙酸和乙酰辅酶A在柠檬酸合酶作用下缩合形成柠檬酸
②异柠檬酸在异柠檬酸脱氢酶的作用下形成α—酮戊二酸
③α—酮戊二酸在α—酮戊二酸脱氢酶作用下生成琥珀酰辅酶A
其中第①步是主要的
(2)氧化还原步骤:
①甘油醛—3—磷酸在甘油醛—3—磷酸脱氢酶作用下氧化成1,3—二磷酸甘油酸(NADH)
②异柠檬酸在异柠檬酸脱氢酶的作用下形成α—酮戊二酸(NADH)
③α—酮戊二酸在α—酮戊二酸脱氢酶作用下生成琥珀酰辅酶A(NADH)
④琥珀酸在琥珀酸脱氢酶作用下形成延胡索酸(FADH2)
⑤苹果酸在苹果酸脱氢酶作用下生成草酰乙酸(NADH)
⑥丙酮酸在丙酮酸脱氢酶作用下生成乙酰辅酶A(NADH)
(3)ATP数目:
①底物水平的磷酸化作用:
在糖酵解起始阶段先消耗了2分子ATP用于底物的磷酸化,然后形成的1,3—二磷酸甘油酸和磷酸烯醇式丙酮酸,分别可以形成3—磷酸甘油酸和丙酮酸,并各产生1分子ATP,这样1分子葡萄糖糖酵解就在底物水平的磷酸化作用上净形成了2分子ATP。
在TCA循环中琥珀酰辅酶A转变为琥珀酸形成了1分子GTP(相当于ATP),1分子葡萄糖就生成了2个GTP
②氧化磷酸化作用:
如上1分子葡萄套共产生10分子NADH和2分子FADH2,共生成ATP为2.5*10+1.5*2=28个
1分子葡萄糖有氧氧化共产生ATP28+4=32个
2005年
一、填空
1、α—1,4糖苷键:
①糖原磷酸化酶(a活、b):
只能催化α—1,4糖苷键磷酸解,发生在碳和氧之间,形成葡萄糖—1—磷酸,需要辅助因子:
磷酸吡哆醛(PLP,氨基转移作用中也是一个重要的辅助因子)
②糖原脱支酶:
催化α—1,6糖苷键水解,产生葡萄糖
③磷酸葡萄糖变位酶:
需要少量葡萄糖—1,6—二磷酸的存在才能充分发挥活性
④UDP—葡萄糖焦磷酸化酶:
催化葡萄糖—1—磷酸与UTP生成UDP—葡萄糖(UDPG),葡萄糖形成UDPG的重要生物学意义就在于它使葡萄糖变为更活泼的活化形式
⑤糖原合酶:
不能从0开始合成,需要引物:
生糖原蛋白(糖原素),它具有自动催化功能,可催化8个UDPG连续以α—1,4糖苷键连接,形成糖原分子的核心,在此基础上糖原合酶在进行合成,糖原分子的延长与否取决于糖原合酶与生糖原蛋白的相互作用,糖原合酶一旦脱离生糖原蛋白,就不在进行合成
⑥糖原分支酶:
从非还原末端约7个葡萄糖残基(至少已经有11个残基了)处断开α—1,4糖苷键,转移到同一或其他糖原分子靠内部的某个葡萄糖残基上,形成α—1,6糖苷键,糖原分支增加了糖原的可溶性,还增加了非还原末端的数目,从而大大提高了糖原的分解、合成效率
2、细胞溶胶果糖—6—磷酸形成果糖—1,6—二磷酸线粒体草酰乙酸与乙酰辅酶A缩合成柠檬酸琥珀酰辅酶A转化成琥珀酸生成GTP
3、Vmax·[S]/(Km+[S])增大:
Km的物理意义,Km是当酶反应速率达到最大反应一半时的底物浓度,单位是mol/L。
1/Km可以近似的表示酶对底物亲和力的大小,大大、小小
4、丙酮酸α—酮戊二酸5、帽子(3’端有多聚腺苷酸尾巴)6、丙氨酸核内不均一RNAribozyme聚丙烯酰胺凝胶电泳
二、名词解释
1、福林—酚反应:
福林—酚试剂定量的与Cu+反应,Cu+是由蛋白质的易氧化成分还原Cu2+产生的
2、无规则卷曲:
或称卷曲,它泛指那些不能被归入明确的二级结构的多肽区段
3、盐溶:
低浓度时,中性盐可以增加蛋白质的溶解度,这种现象称为盐溶(盐析:
当溶液离子强度增加到一定数值时,蛋白质的溶解度开始下降,当离子强度增加到足够高时,蛋白质可以从溶液中沉淀出来,这种现象称为盐析)、
4、Z—DNA:
是DNA的一种构象,是一种左手螺旋的、细长的
5、比活力:
每mg蛋白质所含的酶活力单位数,即总活力U/总蛋白mg
6、Cori循环:
激烈运动时,糖酵解作用产生的NADH的速度超过氧化呼吸链再形成NAD+的能力,这时肌肉中酵解过程形成的丙酮酸由乳酸脱氢酶转变为乳酸使NAD+再生,乳酸扩散到血液并随血液进入肝细胞,再通过糖异生作用转变为葡萄糖,又回到血液中,这个循环称为可立氏循环:
肌肉酵解产生丙酮酸变为乳酸,同时再生NAD+,乳酸随血液进入肝脏,糖异生形成葡萄糖,再进入血液的过程称为可立氏循环
7、丙氨酸—葡萄糖循环:
肌肉氨基转移酶可以催化丙酮酸形成丙氨酸,后者随血液进入肝细胞经转氨基作用产生丙酮酸,又可用于糖异生作用,生成的葡萄糖又回到肌肉,又降解为丙酮酸,此循环称葡萄糖—丙氨酸循环(起着把氨运入肝脏的作用)
8、外显子:
真核生物的基因通常都是断裂的,保留再成熟RNA中的编码序列称为外显子(插入的非编码序列称为内含子)
9、rRNA:
核糖体RNA,构成核糖体,是蛋白质的装配者
10、终止子:
(DNA)
11、HIV:
人类免疫缺损病毒,它是一类逆转录病毒,侵入人体引起人类免疫缺陷综合症,即艾滋病
12、脂质体:
利用类脂经超声波、机械搅拌等处理形成双脂层小囊泡,将DNA包裹再内即为脂质体(它与细胞膜融合使DNA进入细胞的方法为脂质体法)
13、乙醛酸循环:
这个循环通过一些列反应最终产生乙醛酸,再动物体内不存在,只存在于植物和微生物中,主要内容是通过乙醛酸途径使乙酰辅酶A转变为草酰乙酸从而进入柠檬酸,其全部反应可以看做是2个乙酰辅酶A分子合成1分子草酰乙酸
14、反义链:
15、拓扑异构酶:
引起拓扑异构反应的酶称为拓扑异构酶
16、滞后链:
DNA复制中,一条模板链是5’→3’走向的,在其上DNA以5’→3’方向合成,但是与复制叉移动的方向正好相反,所以随着复制叉的移动,形成许多不连续的片段,最后连成一条完整的DNA链,该链称为滞后链(DNA复制中,一条模板链是3’→5’走向的,在其上DNA能以5’→3’方向连续合成,称为前导链)
17、一碳单位:
具有一个碳原子的基团称为一碳单位
18、磷酸戊糖途径:
在细胞溶胶内进行的从磷酸化六碳糖形成五碳糖并产生还原力(NADPH)的循环过程
19、别构酶:
酶分子的非催化部位与某些化合物可逆的非共价结合后发生构象的改变,进而改变酶活性状态,称为酶的别构调节,具有这种调节作用的酶称为别构酶
20、脂多糖:
脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁的特有结构成分,构成外膜外表面的主要物质,并赋予这类细胞以亲水表面
三、简答题
1、
(1)合成:
酮体的合成主要是肝脏的功能,在肝脏线粒体中,决定乙酰辅酶A去向的是草酰乙酸,在草酰乙酸浓度十分低时,乙酰辅酶A进入TCA循环的量也随之变少,从而有利于酮体的合成,同时肝脏中脂肪酸的氧化仍保持继续。
在基质中先由乙酰辅酶A合成乙酰乙酸,之后乙酰乙酸可在D—β—羟丁酸脱氢酶作用下生成D—β—羟丁酸,也可自动脱羧生成丙酮。
(2)分解及生理意义:
在肝外组织中D—β—羟丁酸被D—β—羟丁酸脱氢酶催化生成乙酰乙酸,进而形成2分子乙酰辅酶A进行供能
(3)增加及其影响:
严重饥饿或未经治疗的糖尿病人体内可产生大量的乙酰乙酸,其原因是饥饿状态和胰岛素过低都会耗尽体内糖的贮存。
肝外组织不能自血液中获取充分的葡萄糖,为了获得能量,肝中的葡萄糖异生作用就会加速,肝和肌肉中的脂肪酸氧化也同样加速,同时带动蛋白质的分解。
脂肪酸氧化加速产生大量的乙酰辅酶A,糖异生作用使草酰乙酸供应耗尽,而后者又是乙酰辅酶A进入TCA循环所必需的,在此种情况下乙酰辅酶A不能正常的进入柠檬酸循环,而转向生成酮体的方向,造成:
①血液中出现大量