海洋植物木果楝种子化学成分的研究.docx

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海洋植物木果楝种子化学成分的研究

海洋植物木果楝种子化学成分的研究

霍长虹，尹宝伟，沈立茹，赵雷，董玫，史清文，王永利

（河北医科大学药学院，河北石家庄050017）

摘要:

目的研究海洋植物木果楝XylocarpusgranatumKoenig种子的化学成分。

方法采用色谱法分离，根据化合物理化性质和波谱分析鉴定其结构；用MTT法测定单体化合物的抗肿瘤活性。

结果从木果楝种子中分离鉴定了16个化合物，分别为过氧化麦角甾醇

（1），xylocarpinG

（2），xylocarpinH（又名granaxylocarpinB,3），xylogranatinC（4），3β-detigloyoxy-2′-methylbutanoyloxyxylogranatinB（5），xylogranatinD（6），hispidolB（7），东莨菪葶（8），β-谷甾醇（9），胡萝卜苷（10），xylomexicaninA（11），odoratone（12），xylomexicaninB（13），piscidinolG（14），spicatin（15），7-deacetyl-7-oxogedunin（16）。

结论化合物11和13为新化合物，化合物1，7，8，12和14为首次从木果楝属植物中分离得到，化合物16为首次从木果楝中分离得到。

化合物3，4，11，14对人肿瘤细胞株HLE，Hela，KT显示了不同程度的抑制活性。

关键词:

木果楝；种子；化学成分；MTT

木果楝XylocarpusgranatumKoenig为一种生长在热带沿海地带的海洋红树林植物，属楝科木果楝属，主要分布于亚洲和非洲的热带海岸及大洋洲北部，在我国海南省亦有分布。

海南民间用其种皮治赤痢，种仁用作滋补品[1]。

在东南亚国家民间用其治疗腹泻，霍乱和由疟疾引起的发烧，还可用做昆虫据食剂[2]。

戴好富等报道木果楝的醋酸乙酯提取物对肿瘤HeLa细胞生长具有抑制活性[3]。

为研究与开发该植物的有效成分，我们对其化学成分进行了研究，此论文报道从木果楝种子中分离并鉴定了16个化合物：

过氧化麦角甾醇

（1），xylocarpinG

（2），xylocarpinH（又名granaxylocarpinB,3），xylogranatinC（4），3β-detigloyoxy-2′-methyl-butanoyloxyxylogranatinB（5），xylogranatinD（6），hispidolB（7），东莨菪葶（8），β-谷甾醇（9），胡萝卜苷（10），xylomexicaninA（11），odoratone（12），xylomexicaninB（13），piscidinolG（14），spicatin（15），7-deacetyl-7-oxogedunin（16）。

其中化合物11和13为新化合物，1，7，8，12和14为首次从木果楝属植物中分离得到，16为首次从木果楝中分离得到。

同时采用MTT法评价了单体化合物对人肿瘤细胞株HLE，Hela，KT的抑制作用，3，4，11和14对上述细胞显示了不同程度的抑制活性。

1仪器与材料

X4型显微熔点测定仪（温度未校正）；APEXⅡ型傅立叶变换离子回旋质谱仪；VarianINOVA-500型核磁共振波谱仪（TMS为内标）；Waters制备高效液相色谱仪（600泵和2487紫外检测器，Whatmanpartisil10ODS-2，9.5×250mm）；薄层色谱及柱色谱用硅胶（青岛海洋化工厂产品）。

木果楝种子采于海南省，由厦门大学生命科学学院王文卿教授鉴定为X.granatum。

2提取与分离

木果楝种子粗粉3kg，用95%乙醇渗漉提取，渗漉液减压浓缩后用适量水溶解，依次以石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得到相应萃取物。

二氯甲烷萃取物65.8g经硅胶柱色谱分离（石油醚-丙酮梯度洗脱），共得到10个部份（Fr.1~10）。

Fr.2经反复重结晶得到化合物9（124.6mg）。

Fr.3经反复硅胶柱色谱分离纯化得化合物1（4.6mg）。

Fr.5析出白色晶体，再经制备HPLC（甲醇：

水=60：

40）纯化得到化合物3（35.0mg）和化合物11（10.0mg）。

Fr.10经反复重结晶得到化合物10（216.0mg）。

Fr.6经反复硅胶柱色谱和葡聚糖凝胶色谱分离纯化得化合物4（105.1mg），5（70.2mg），12（35.0mg）和16（38.1mg）。

Fr.7经反复硅胶柱色谱和制备HPLC纯化得化合物2（7.6mg），6（14.7mg），13（3.2mg）。

Fr.9经反复硅胶柱色谱和葡聚糖凝胶色谱分离纯化得化合物7（4.5mg），8（4.6mg），14（8.2mg），15（60.0mg）。

3结构鉴定

化合物1：

白色针状晶体（丙酮）；1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：

0.81（3H，s，H-18），0.81（3H，d，J=6.8Hz，H-21），0.83（3H，d，J=7.5Hz，H-27），0.88（3H，s，H-19），0.91（3H，d，J=7.0Hz，H-26），1.00（3H，d，J=6.5Hz，H-28），3.96（1H，m，H-3），5.13（1H，dd，J=15.5，8.0Hz，H-22），5.22（1H，dd，J=15.5，7.5Hz，H-23），6.25（1H，d，J=8.5Hz，H-6），6.51（1H，d，J=8.5Hz，H-7）。

13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：

34.6（C-1），30.1（C-2），66.4（C-3），36.9（C-4），82.1（C-5），135.4（C-6），130.7（C-7），79.4（C-8），51.0（C-9），36.9（C-10），23.4（C-11），39.3（C-12），44.5（C-13），51.6（C-14），20.6（C-15），28.6（C-16），56.1（C-17），12.8（C-18），18.2（C-19），39.7（C-20），20.9（C-21），135.2（C-22），132.3（C-23），42.7（C-24），33.0（C-25），19.9（C-26），19.6（C-27），17.5（C-28）。

以上数据与文献报道的过氧化麦角甾醇一致[4]。

化合物2：

白色粉末（甲醇），UV（甲醇）maxnm215；1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：

0.82（3H，s，H-28），1.07（3H，s，H-19），1.21（3H，s，H-18），1.26（3H，s，H-29），1.40（1H，dd，J=13.5，8.5Hz，H-12β），1.79（1H，m，H-11β），1.80（3H，d，J=8.5Hz，H-4′），1.78（3H，m，H-5′），1.90（s，3-OCOCH3），2.14（1H，m，H-9），2.16（1H，d，J=16.5Hz，H-6b），2.17（1H，m，H-12α），2.38（1H，m，H-11α），2.39（1H，dd，J=16.5，10.0Hz，H-6a），2.70（1H，d，J=10.0Hz，H-5），2.97（1H，dd，J=9.0，4.5Hz，H-2），3.70（3H，s，7-OCH3），4.98（1H，s，H-17），5.10（1H，d，J=9.0Hz，H-3），5.56（1H，d，J=4.5Hz，H-30），6.03（1H，s，H-15），6.42（1H，s，H-22），6.84（1H，m，H-3′），7.41（1H，s，H-23），7.49（1H，s，H-21）。

13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：

107.4（C-1），53.1（C-2），74.0（C-3），37.6（C-4），40.8（C-5），32.0（C-6），174.0（C-7），81.2（C-8），51.5（C-9），42.9（C-10），14.8（C-11），24.9（C-12），39.0（C-13），160.1（C-14），117.4（C-15），163.8（C-16），81.5（C-17），19.4（C-18），20.9（C-19），119.9（C-20），141.2（C-21），109.9（C-22），142.8（C-23），24.5（C-28），21.9（C-29），76.5（C-30），51.9（7-OCH3），166.9（C-1′），127.8（C-2′），138.6（C-3′），11.9（C-4′），14.5（C-5′），170.2（3-OCOCH3），20.4（3-OCOCH3）。

以上数据与文献报道的xylocarpinG一致[5]。

化合物3：

白色针状晶体（丙酮）；UV（甲醇）maxnm215；HREI-MSm/z582.2471（calcdfor[M]+582.2465）。

1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：

0.97（3H，s，H-18），1.03（3H，d，J=5.0Hz，H-19），1.13（3H，s，H-29），1.20（3H，s，H-28），1.63（1H，m，H-12α），1.83（3H，d，J=7.5Hz，H-4′），1.85（3H，s，H-5′），2.28（1H，m，H-6a），2.30（1H，m，H-5），2.30（1H，m，H-10），2.47（1H，m，H-6b），2.53（1H，m，H-11α），2.69（1H，m，H-12β），3.08（1H，dd，J=17.5，7.0Hz，H-11β），3.69（3H，s，7-OCH3），3.89（1H，s，8-OH），5.34（1H，s，H-17），6.09（1H，s，H-15），6.47（1H，s，H-22），6.60（1H，s，H-30），6.96（1H，m，H-3′），7.01（1H，s，H-3），7.45（1H，s，H-23），7.56（1H，s，H-21）。

13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：

198.8（C-1），128.8（C-2），161.9（C-3），36.8（C-4），45.2（C-5），34.6（C-6），173.4（C-7），80.3（C-8），208.8（C-9），42.8（C-10），33.0（C-11），25.5（C-12），38.3（C-13），163.5（C-14），118.4（C-15），163.3（C-16），80.1（C-17），18.5（C-18），11.6（C-19），119.7（C-20），141.4（C-21），109.8（C-22），143.2（C-23），27.9（C-28），20.5（C-29），67.5（C-30），52.0（7-OCH3），166.8（C-1′），127.7（C-2′），139.9（C-3′），12.1（C-4′），14.7（C-5′）。

以上数据与文献报道的xylocarpinH（在文献[6]中命名为granaxylocarpinB）一致[5]。

化合物4：

白色晶体（甲醇），UV（甲醇）maxnm214；1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：

0.98（3H，s，H-18），1.04（3H，d，J=6.0Hz，H-19），1.12（3H，s，H-29），1.21（3H，s，H-28），1.65（1H，dd，J=13.5，7.0Hz，H-12α），2.11（3H，s，30-OCOCH3），2.27（1H，m，H-6a），2.28（1H，m，H-10），2.29（1H，m，H-5），2.47（1H，m，H-6b），2.51（1H，m，H-11α），2.61（1H，m，H-12β），3.03（1H，dd，J=19.5，6.0Hz，H-11β），3.69（3H，s，7-OCH3），3.89（1H，s，8-OH），5.34（1H，s，H-17），6.18（1H，s，H-15），6.46（1H，d，J=1.5Hz，H-22），6.54（1H，s，H-30），7.00（1H，s，H-3），7.44（1H，d，J=1.5Hz，H-23），7.55（1H，s，H-21）。

13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：

198.8（C-1），128.4（C-2），162.0（C-3），36.8（C-4），45.2（C-5），34.6（C-6），173.4（C-7），80.0（C-8），208.6（C-9），42.8（C-10），33.0（C-11），25.5（C-12），38.4（C-13），164.1（C-14），118.2（C-15），163.3（C-16），80.1（C-17），18.5（C-18），11.6（C-19），119.6（C-20），141.4（C-21），109.8（C-22），143.2（C-23），27.8（C-28），20.5（C-29），67.4（C-30），52.0（7-OCH3），169.9（30-OCOCH3），21.1（30-OCOCH3）。

以上数据与文献报道的xylogranatinC一致[7]。

化合物5：

白色晶体（甲醇），UV（甲醇）maxnm212；1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：

0.78（3H，s，H-28），0.89（3H，t，J=7.5Hz，H-4′），1.06（3H，s，H-19），1.05（3H，d，J=7.5Hz，H-5′），1.21（3H，s，H-18），1.24（3H，s，H-29），1.38（1H，m，H-3′b），1.42（1H，m，H-12β），1.64（1H，m，H-3′a），1.81（1H，m，H-11β），1.99（s，30-OCOCH3），2.11（1H，m，H-12α），2.15（1H，m，H-9），2.16（1H，d，J=9.5Hz，H-6b），2.37（1H，m，H-11α），2.38（1H，dd，J=16.0，9.5Hz，H-6a），2.64（1H，d，J=9.5Hz，H-5），2.93（1H，dd，J=9.5，4.5Hz，H-2），3.70（3H，s，7-OCH3），5.00（1H，s，H-17），5.08（1H，d，J=9.0Hz，H-3），5.58（1H，d，J=4.0Hz，H-30），6.03（1H，s，H-15），6.42（1H，s，H-22），7.42（1H，s，H-23），7.49（1H，s，H-21）。

13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：

107.4（C-1），53.3（C-2），74.0（C-3），37.4（C-4），40.5（C-5），32.1（C-6），173.9（C-7），81.3（C-8），51.5（C-9），42.9（C-10），15.0（C-11），25.1（C-12），38.9（C-13），159.4（C-14），117.7（C-15），163.7（C-16），81.5（C-17），19.5（C-18），20.5（C-19），119.9（C-20），141.2（C-21），109.9（C-22），142.9（C-23），24.5（C-28），21.7（C-29），76.0（C-30），51.9（7-OCH3），175.9（C-1′），40.9（C-2′），26.5（C-3′），11.6（C-4′），16.4（C-5′），170.0（30-OCOCH3），20.8（30-OCOCH3）。

以上数据与文献报道的3β-detigloyoxy-2′-methylbutanoyloxyxylogranatinB一致[8]。

化合物6：

无色油状（甲醇），UV（甲醇）maxnm237；1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：

1.08（3H，s，H-18），1.10（3H，s，H-29），1.15（3H，d，J=6.5Hz，H-19），1.18（3H，s，H-28），1.37（1H，m，H-12α），1.66（1H，ddd，J=15.0，4.5，4.5Hz，H-11β），1.79（1H，ddd，J=15.0，15.0，4.0Hz，H-11α），2.00（s，30-OCOCH3），2.24（1H，m，H-12β），2.30（1H，m，H-6a），2.31（1H，m，H-5），2.41（1H，m，H-10），2.49（1H，m，H-6b），3.70（3H，s，7-OCH3），3.78（1H，s，9-OH），5.52（1H，s，H-17），6.27（1H，s，H-30），6.36（1H，s，H-15），6.50（1H，s，H-22），7.01（1H，s，H-3），7.45（1H，s，H-23），7.61（1H，s，H-21）。

13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：

198.6（C-1），130.2（C-2），161.5（C-3），36.7（C-4），45.2（C-5），34.7（C-6），173.4（C-7），200.9（C-8），79.6（C-9），43.1（C-10），29.2（C-11），28.3（C-12），41.4（C-13），156.2（C-14），121.6（C-15），163.3（C-16），81.3（C-17），18.6（C-18），12.2（C-19），119.2（C-20），141.4（C-21），109.7（C-22），143.3（C-23），28.0（C-28），20.5（C-29），66.4（C-30），52.0（7-OCH3），168.8（3-OCOCH3），20.7（3-OCOCH3）。

以上数据与文献报道的xylogranatinD一致[7]。

化合物7：

白色粉末（甲醇），UV（甲醇）maxnm212；ESI-MSm/z477[M+H]+。

1H-NMR（500MHz，CD3OD）δ：

0.72（3H，s，H-18），0.79（3H，s，H-19），0.80（3H，s，H-30），0.89（3H，s，H-29），0.89（3H，d，J=6.5Hz，H-21），0.96（3H，s，H-28），1.19（3H，s，H-26），1.21（3H，s，H-27），3.12（1H，brs，H-24），4.01（1H，dd，J=9.5，5.0Hz，H-23），5.22（1H，m，H-7）。

13C-NMR（125MHz，CD3OD）δ：

38.6（C-1），29.4（C-2），79.8（C-3），40.0（C-4），52.2（C-5），22.5（C-6），119.3（C-7），146.9（C-8），50.5（C-9），36.0（C-10），17.3（C-11），34.8（C-12），44.8（C-13），52.4（C-14），35.1（C-15），28.3（C-16），55.3（C-17），13.6（C-18），19.5（C-19），35.2（C-20），19.3（C-21），42.2（C-22），69.9（C-23），76.7（C-24），74.8（C-25），25.0（C-26），27.0（C-27），27.8（C-28），15.4（C-29），26.8（C-30）。

以上数据与文献报道的hispidolB一致[9]。

化合物8：

浅黄色针状结晶（二氯甲烷），1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：

3.96（3H，s，-OCH3），6.15（1H，brs，7-OH），6.27（1H，d，J=9.5Hz，H-3），6.85（1H，s，H-5），6.92（1H，s，H-8），7.60（1H，d，J=9.5Hz，H-4）。

13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：

161.4（C-2），111.5（C-3），144.0（C-4），113.4（C-5），143.3（C-6），149.7（C-7），103.2（C-8），150.2（C-9），107.5（C-10），56.4（-OCH3）。

以上数据与文献报道的东莨菪葶一致[10]。

化合物9：

白色针状晶体（丙酮），mp137~138℃，Liebermann-Burchard反应阳性，10%硫酸乙醇溶液显色为紫红色。

与β-谷甾醇标准品薄层色谱对照，Rf值及显色行为均一致，且混合后熔点不下降，故确定为β-谷甾醇。

化合物10：

白色粉末（甲醇），mp288~290℃（分解），Liebermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性，10%硫酸乙醇溶液显色为紫红色。

该化合物的NMR数据与文献报道的胡萝卜苷基本一致[11]，经与胡萝卜苷标准品薄层色谱对照，Rf值及显色行为均一致，且混合后熔点不下降，故确定为胡萝卜苷。

化合物11白色晶体（丙酮），mp172~174℃，[α]D25-27.9º（c0.21，MeOH），UV（甲醇）λmax：

212nm，IR（KBr）max：

3404，2984，2963，1722，1671，1369，1272，1245，1164，1151，1015cm-1，HRFAB-MSm/z：

570.2472，（calcdfor[M]+570.2465），确定分子式为C31H38O10，同时提示不饱和度为13。

IR图谱显示，在3404和1722cm-1处有吸收峰，则表明羟基和酯基功能团的存在。

由其1HNMR和13CNMR谱可知，13个不饱和度中有9个是由4个碳碳双键和5个羰基引起的，则其余的4个不饱和度推测可能是由4个环引起。

从13CNMR和DEPT图谱上可以观察到，化合物11有5个羰基，3个sp2杂化的季碳原子，3个sp3杂化的季碳原子，5个sp2杂化的次甲基，5个sp3杂化的次甲基，3个sp3杂化的亚甲基和7个甲基（包括1个甲氧基）。

另外，从NMR谱中还可以观察到柠檬苦素类化合物的特征吸收峰：

2个酮基（δC198.8和208.7）；1个羟基峰（δH3.87,s）；1个甲氧基峰（δH3.69，s；δC52.0）和一个呋喃环（δH7.56，brs；7.45，brs和6.47，brs；δC143.2，141.4，119.6和109.8）。

以上的NMR数据和2DNMR（包括1H-1HCOSY，HMQC和HMBC）均表明，化合物11是一个B环开裂的墨西哥交酯类的柠檬苦素。

将化合物11的NMR数据与9，10开裂的墨西哥交酯类的柠檬苦素类化合物xylogranatinC[12]的NMR数据进行对照，两个化合物的数据基本吻合，唯一不同的是在化合物11的C-30位存在一个异丁酰基基团[δH2.56m，1.18（d，J=7.0Hz），1.16（d，J=7.0Hz）；δC175.9，34.1，19.2，18.5]，而xylogranatinC的C-30位是一个乙酰基。

另外，HMBC谱中的H-30（δH6.48，s）与C-1′（δC175.9）的相关可以证明该异丁酰基存在于C-30位。

NOESY谱可以帮助推测化合物11的立体构型，H-30与H-11β（δH3.05，dd，J=19.5，6.5Hz），H-12β（δH2.62，ddd，J=14.0，14.0，7.0Hz）的相关峰，以及H-17（δH5.34，s）与H-12β的相关峰可知H-30与H-17均为β-构型。

由于从1HNMR中可以观察到8-OH在δH3.87出现尖锐单峰，并且与18-Me（δH0.98，s）有强烈的NOESY相关，表明8-OH为α-