中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋NGAL.docx

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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白

一、临床适应症背景情况

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（Neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL）又称人脂质运载蛋白2（lipocalin2,Ln2）或噬铁蛋白（siderocalin），是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。

近年来，NGAL作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。

早期急性肾损伤、慢性肾病、心肾综合症等疾病血清和尿液中NGAL会显著升高，且其水平监测对病情轻重、疗效及预后判断具有较好的诊断价值。

临床检测NGAL主要有免疫层析法、免疫比浊法、速率色散比浊法、乳胶增强免疫比浊法等。

胶乳增强免疫比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。

肾脏损伤约占所有泌尿生殖道损伤的65%左右。

急性肾损伤是一组临床综合征，是指突发（1-7d内）和持续（>24h）的肾功能突然下降，定义为血清肌酐至少上升0.5mg/dl1，表现为氮质血症、水电解质和酸碱平衡以及全身各系统症状，可伴有少尿（<400ml/24h或17ml/h）或无尿（<100ml/24h）。

肾病的发病迁延难愈，时间超过三个月，病人尿液和相关的血液指标出现异常，肾脏病理学、影像学发现异常，或肾脏的肾小球有效滤过率低于60%，都可统称为“慢性肾病”。

慢性肾病如未能及时有效救治，导致病情恶化进展，则随病程迁延，慢性肾病患者将发展成为慢性肾功能不全、肾衰竭，最终形成尿毒症。

心肾综合征（cardio-renalsyndrome，CRS）即心脏或肾脏对另一器官的损害不能代偿时，互为因果,形成恶性循环，最终加速心脏和肾脏功能的共同损害和衰竭。

其发病率、死亡率高，给社会和患者带来沉重的负担。

目前对心肾综合征的认识有限，缺乏有效的治疗措施，是临床处理的难题。

早期诊断急性肾功能损伤时血、尿NGAL浓度通常会迅速升高，2h最为明显（ 比临界值升十至几百倍），血清肌酐、尿酶等传统指标往往要在24～72h才后明显升高，因而NGAL可用于急性肾功能损伤的早期诊断。

监测病情进展NGAL还可以反映肾功能损伤的严重程度。

评估预NGAL可作为急性肾功能损伤的预后指标之一。

研究发现，慢性肾病患者的血清、尿NGAL水平显著高于正常人群，并与肾小球滤过率呈密切负相关，而血清肌酐与肾小球滤过率的关联程度不及NGAL。

因此，慢性肾病患者NGAL水平不仅是优于血清肌酐反映肾小球滤过率下降的指标，更是评价慢性肾病患者肾脏损伤程度的标志物。

心肾综合征是一种心脏和肾脏的病理生理紊乱，即由一个器官的功能不全导致的另一个器官的功能不全，死亡率高，共分为5个类型。

研究发现血NGAL诊断1型心肾综合征时，敏感性和特异性分别为100%、86.7%。

因此，作为肾损伤的早期诊断指标，密切监测NGAL水平，有利于临床医生正确评价心肾综合征中的肾功能损伤程度，并及时采取干预治疗，减少并发症的发生。

3.相关的临床或试验室诊断方法

目前临床检测NGAL主要有免疫层析法、免疫比浊法、速率色散比浊法、乳胶增强免疫比浊法等.乳胶增强免疫比浊法具有操作简单，可在几分钟内快速、准确地检测血清蛋白含量，真实反映病情进展和评估治疗效果，对于疾病的早期诊断和治疗具有重要的临床意义；不易受人为操作和外界因素干扰，检测稳定性和重复性都很好；能利用普通的生化分析仪进行检测，容易实现自动化，可在各级基层医疗机构普及和应用等优点。

二、描述

1.技术原理

采用兔抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体致敏的胶乳颗粒，与待测样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在液相中相遇，立即形成不溶性抗原-抗体复合物，并产生一定浊度。

浊度高低反映样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白浓度的高低，通过与同样处理的校准品比较，即可计算出样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量。

2.主要原材料来源及制备方法

原料名称

规格/纯度

性状

三羟甲基氨基甲烷（Tris）

AR

白色结晶颗粒

兔抗人NGAL抗体致敏胶乳

/

乳白色悬浊液

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）

/

无色或淡黄色液体

2.主要生产工艺过程

定容★

溶解★

原材料质检

混合

中试

称量★

封口

分装★

入库

贴签

成品质检

总装

外包材

混合标签

试剂瓶

图一试剂工艺流程图

备注：

1.“★”表示关键工序，配制（称量、溶解、定容）和分装为关键工序，无特殊工序。

2.“”表示物料、半成品、成品流向。

3.“”配制（称量、溶解、混合、定容）、分装和封口为在十万级净化车间操作的工序。

三、其他

1.同类产品在国内外批准上市情况

目前，经国家食品药品监督管理总局（CFDA）批准注册的同类产品,国产39个，如：

上海科华生物工程股份有限公司的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）。

进口4个，如：

雅培的尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（化学发光微粒子免疫检测法）。

2.相关产品所采用的技术方法及临床应用情况

临床检测NGAL主要有以下方法：

免疫层析法、免疫比浊法、速率色散比浊法、乳胶增强免疫比浊法等。

因其方法简便，技术纯熟，现大多采用胶乳增强免疫比浊法。

本公司采用乳胶增强免疫比浊法研制生产的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）检测结果准确、精密度高、稳定性好，且可自动化批量分析，能广泛应用于临床。

3.与国内外同类产品的比较

内容

波音特生物

九强生物

方法

胶乳增强免疫比浊法

胶乳增强免疫比浊法

预期用途

本试剂盒用于人血清中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的体外定量测定。

用于体外定量测定血浆或尿液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的含量。

原理

样本中的NGAL在甘氨酸缓冲液中与超敏化的抗NGAL乳胶颗粒试剂反应形成免疫复合物。

其浊度的变化量与样本中NGAL浓度成函数关系。

样本中NGAL与超敏化的抗NGAL乳胶颗粒试剂反应形成免疫复合物。

其浊度的变化量与样本中NGAL浓度成函数关系。

主要组成成分

R1：

甘氨酸缓冲液：

50mmol/L

稳定剂（Tween-20）0.1%

防腐剂（ProClin300）0.01%

R2：

抗NGAL乳胶颗粒悬浮液

0.20%（W/V）

防腐剂（ProClin300）0.01%

R1：

甘氨酸缓冲液：

50mmol/L

稳定剂

防腐剂

R2：

胶乳试剂：

抗NGAL乳胶颗粒悬浮液0.20%（W/V）

防腐剂

储存条件及有效期

本试剂盒在2～8℃密闭保存稳定12个月；开启后在2～8℃保存稳定30天。

1.试剂在2～8℃密闭避光保存，有效期为12个月。

2.试剂不可冷冻，不同批号试剂不可混用。

3.已经开启的试剂注意避免污染，在2～8℃的条件下可稳定4周。

灵敏度

测定600ng/ml的被测物时，吸光度之差（∆A）应在0.02～0.15之间。

样品浓度为600ng/ml时，其吸光度变化在0.0200～0.1500之间。

试剂空白

波长570nm，光径10mm，测的试剂吸光度值A≤1.6.

线性范围

【50～5000】ng/ml，在此线性范围内：

a）线性相关系数r≥0.990；

b）在【50～500】ng/ml范围内，线性绝对偏差的绝对值≤50.0ng/ml；在【500～5000】ng/ml范围内，线性相对偏差的绝对值≤10.0%。

在50-5000ng/ml范围内，线性相关系数r2应≥0.99，在50-100ng/ml范围内测定的绝对偏差应≤30ng/ml，在100-5000ng/ml范围内测定的相对偏差应≤10.0%。

精密度

重复性CV≤10.0%；

批间相对偏差≤10.0%。

a）重复性

使用同一血浆样品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV%）应≤10.0%；

b）批间差

随机抽取三批试剂盒的批间差应≤10.0%。

准确度

相对误差≤10.0%。

a）型式检验

比对试验：

相关系数r2≥0.95，相对偏差应不超过±15.%；

b）出厂检验

使用质控品进行测定，准确性偏差应不超过±10%。

参考文献：

1.陈佩.急性肾衰竭患者血清NGAL测定的临床意义[J].临床医学,2011，（5）：

01.

2.龚淑文沈水娟何剑雾.NGAL的结构功能及其在慢性肾病中的作用[J].中国中西医结合肾病杂志.2013，（14）；354-355.

3.刘长海.急性肾损伤新的标记物NGAL的临床检测意义[J].中国实用医药，2011，（6）：

224-226．

4.薛志强童俊容.慢性肾脏疾病血清和尿液NGAL的改变及其临床意义[J].中国中西医结合肾病杂志，2010,（11）：

440-441。

5.张铁征张立华耿玉兰等.急性心力衰竭患者外周血NGAL检验的临床应用.中国卫生检验杂志.2015，（25）:

516-517。

医疗器械注册申请人：

四川沃文特生物技术有限公司4