急性毒性试验LD50的测定.docx
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急性毒性试验LD50的测定
急性毒性试验-LD50的测定
开放性实验总结报告
学生姓名班级学号
所在院系专业
开放实验室名称
日期2013-5-5
北京理工大学实验室设备处制
一、实验项目概况
开放实验题目：
实验动物的基本操作及其相关技术
实验题目类型：
□参与科研□科技活动√自选实验□素质培养
指导教师及实验技术人员姓名：
李岩
实验项目起止日期：
2013-4-5至2013-5-5
利用何种时间段开展实验：
课余时间
开展实验的累计总学时数：
32学时
实验项目基本原理：
急性毒性试验是临床前新药安全性评价的第一步，与其它毒性实验相比具有简单、经济、易行等特点。
因此新药研究开发时往往通过该项试验，尽可能多的了解一些新药的毒理学特点，为早期判断侯选新药是否具有研究开发价值提供毒性强度资料。
通常测定药物ED50及LD50以初步估计药物毒性大小。
实验项目的实验方法概述：
给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠，并观察记录各组别小鼠的行为变化，通过比较不同组别小鼠出现死亡的数量来计算LD50。
实验项目的仪器设备组成情况：
天平，1000ul的移液枪，200μl移液枪，2ml离心管，1ml注射器，手术器械（包括剪刀、镊子等），鼠笼，离心管架
实验项目的消耗材料明细：
乳胶手套，KM小鼠,封口膜
实验项目的主要结论：
戊巴比妥钠的半数致死量为134.32mg/kg
用Bliss法计算半数致死量，回归方程y（Probit）=-24.916+14.058Log（D）
半数致死量LD50=134.32mg/kg
LD50（Feiller校正）95%的可信限=92.405--205.57mg/kg
LD5=102.59mg/kg
LD95=175.85mg/kg
二、实验项目技术报告
1．实验原理
戊巴比妥钠属于巴比妥类镇静催眠药，对中枢神经系统有普遍性抑制作用，可起到镇静、催眠、抗惊厥作用。
一定剂量的戊巴比妥钠引起一般实验动物死亡。
半数致死量（LD50）,即在一群实验动物中，能使实验动物一半死亡的药量，其值越大越好。
2．实验内容
（1）探测戊巴比妥钠LD50的剂量范围。
（2）确定组数并计算各组剂量。
（3）正式实验：
给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠，并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。
（4）记录实验结果，并计算LD50。
3．实验方法：
1、预试溶液配制和样品处理（预实验）
（1）探索剂量范围：
取小鼠9到12只，以3只为一组，分成3到4组，包括组距较大的一系列剂量，按组分别腹腔注射戊巴比妥钠溶液，观察出现的症状并记录动物死亡数，找出引起0及100%有效剂量的所在范围，此即上下限剂量Dn和Dm。
（2）：
确定组数并计算各组剂量
确定组数《G》：
根据适宜的组距确定组数，一般分为5到8个剂量，这里我们分为5组，按等比级数增减
计算各组剂量：
在找出Dm、Dn和确定组数后，课按下列公式求出公比r.再按公比计算各组剂量Dl-Dm,其中D1=Dn=最小剂量。
配置等比药液系列，让每只小鼠给药量相等，一般为0.1ml/10g体重
经过预实验的五个剂量浓度分别是77、96、120、150、190mg/kg,相应浓度：
0.77、0.96、1.2、1.5、1.9%，在随后的急性毒实验中对这些剂量进行验证
2、急性毒性试验：
昆明种小鼠共15只，实验前一天晚禁食不禁水，实验当天称重，标记，随机分组。
给5组小鼠分别按77、96、120、150、190mg/kg,腹腔注射，给药后观察动物死亡情况。
记录小鼠死亡时间，死亡数目。
利用Bliss法计算LD50。
分组
动物数（N）
剂量（mg/kg）
对数剂量（X）
动物死亡数（n）
死亡率（P=n/N）
1
2
3
4
5
3
3
3
3
3
77
96
120
150
190
1.89
1.98
2.08
2.18
2.28
0
0
1
2
3
0％
0％
33.3％
66.7％
100％
表1药物对小白鼠产生效应情况
【实验结果】：
LD50的测定
依据药物剂量依次给药。
利用Bliss法计算LD50
样品名称戊巴比妥钠
实验动物昆明小鼠
给药途径腹腔注射
实验日期2013.5.5
用Bliss法计算半数致死量
--------------------------------------------------------------------------
剂量对数剂量动物数死亡数死亡百分率实验机率单位回归机率单位
（x）（只）（只）（%）（Y）（Y）
--------------------------------------------------------------------------
771.8865300.00----1.6031
961.9823300.00----2.9495
1202.07923133.004.56974.3119
1502.17613267.005.43035.6742
1902.2788331E2----7.1173
--------------------------------------------------------------------------
回归方程y（Probit）=-24.916+14.058Log（D）
半数致死量LD50=134.32mg/kg
LD50（Feiller校正）95%的可信限=92.405--205.57mg/kg
LD5=102.59mg/kg
LD95=175.85mg/kg
三、参加开放性实验的体会与建议
四、评价与认定
指导教师评价意见与成绩评定：
实验态度积极认真，并且能够较好的完成实验包含的内容。
试验后积极思考老师提出的问题。
成绩：
指导教师签字：
年月日
院系主管领导审核与学分评定意见：
同意核准该生选修学分数分。
院系主管签字：
年月日
学校主管部门审批意见：
部门签章：
年月日
备注：
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