化学专业英语文献翻译.docx
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化学专业英语文献翻译
英语文献翻译
学院：
化学化工学院
班级：
应化1106
姓名：
***
吴海军
学号：
***********
20110222227
QuantifyingtheClusterofDifferentiation4ReceptorDensityonHumanTLymphocytesUsingMultipleReactionMonitoringMassSpectrometry
多反应监测质量光谱法应用于人类T淋巴细胞量化分化抗原簇4受体密度
ABSTRACT:
Clusterofdifferentiation4（CD4）isanimportantglycoproteincontainingfourextracellulardomains,atransmembraneportionandashortintracellulartail.ItlocatesonthesurfaceofvarioustypesofimmunecellsandperformsacriticalroleinmultiplecellularfunctionssuchassignalamplificationandactivationofTcells.Itiswell-knownasaclinicalcellsurfaceproteinmarkerforstudyofHIVprogressionandfordefiningtheThelpercellpopulationinimmunologicalapplications.Moreover,CD4proteinhasbeenusedasabiologicalcalibratorforquantificationofothersurfaceandintracellularproteins.However,flowcytometry,theconventionalmethodofquantificationoftheCD4densityontheTcellsurfacedependsonantibodiesandhassufferedfromvariablessuchasantibodyclones,thefluorophoreandconjugationchemistries,thefixationconditions,andtheflowcytometricquantificationmethodsused.Inthisstudy,wereportthedevelopmentofahighlyreproduciblenanoliquidchromatography−multiplereactionmonitoringmassspectrometry-basedquantitativemethodtoquantifytheCD4receptordensityinunitsofcopynumberpercellonhumanCD4+Tcells.Themethodutilizesstableisotope-labeledfull-lengthstandardCD4asaninternalstandardtomeasure
endogenousCD4directly,withouttheuseofantibodies.Thedevelopmentofthemassspectrometry-basedapproachofCD4proteinquantificationisimportantasacomplementarystrategytovalidatetheanalysisfromthecytometry-basedconventionalmethod.ItalsoprovidesnewsupportforquantitativeunderstandingandadvancedcharacterizationofCD4onCD4+Tcells.
摘要：
集群分化4（CD4）是一种重要的糖蛋白，它包含四个胞外区域,横跨膜的部分和短的细胞内尾巴。
它位于各种类型免疫细胞的表面，在多种细胞功能中扮演重要角色，像细胞信号放大和激活的T细胞。
众所周知的是作为研究艾滋病病程的临床细胞表面蛋白标记和在免疫学应用程序中定义辅助T细胞数量。
除此之外，CD4细胞蛋白质也已被用作其他表面和胞内蛋白量化的生物校准器。
但是，流式细胞，传统量化CD4T细胞表面密度的方法取决于抗体和并且会受到像抗体克隆、荧光团和结合化学、固定条件以及以前流式细胞定量方法等变量带来的改变。
在这项研究中，我们报道一种人类CD4+T细胞中量化CD4受体密度在每个细胞的拷贝数的高度可再生的纳米液相色谱-多反应监测质谱为基础的定量方法的发展。
该方法利用稳定同位素标记的全长标准CD4作为内部标准来直接衡量内源性CD4，而不需要使用抗体。
以CD4质谱为基础的蛋白定量方法的发展，作为一个重要的补充战略来验证分析以流式细胞仪为基础的传统方法。
它还提供了定量的理解和CD4在CD4+T细胞上高级鉴定的新支持。
Clusterofdifferentiation4（CD4）isaglycoproteinthatlocatesonthesurfaceofimmunecellssuchasThelpercells,monocytes,macrophages,anddendriticcells.Asacoreceptor,CD4amplifiesthesignalgeneratedbytheTcellreceptor,whichisessentialforactivationofmanymoleculesinvolvedinthesignalingcascadeofanactivatedTcell.InhumanTlymphocytes,CD4receptorproteinisencodedbytheCD4gene1andhasfourdistinctextracellulardomains（D1toD4）,atransmembraneportion,andashortintracellulartail.2TheuseofantihumanCD4monoclonalantibodiesgeneratedagainstthefourextracellulardomainshasbeenwidelyusedtodefineThelpercellsinimmunophenotyping.AlthoughthenumberofCD4+TcellsdecreasesintheprogressionofHIV-1viralinfectionderivingfromthegp120viralproteinbindingtotheCD4receptor,Ponceletetal.reportedthatthesurfaceCD4densitystillremainedconstantonThelpercellsofHIV-1infectedindividuals.3Sincethen,multiyearresearchhassupportedthetheorythatCD4expression/densitycanbeusedasabiologicalcalibratorforquantificationofothersurface
andintracellularproteins.4
分化4（CD4）的集群是一种糖蛋白，位于免疫细胞如T辅助细胞，单核细胞，巨噬细胞和树突状细胞的表面。
作为一个辅助受体，CD4放大由T细胞受体产生的信号，它对很多分子的活化作用很重要包括信号级联激活T细胞。
人类T淋巴细胞，CD4的受体蛋白质是由编码CD4基因并且有四个不同的胞外结构域（D1到D4），跨膜部分和短的胞内尾巴。
利用抗人CD4单克隆抗体在4各细胞外结构域的繁殖，已被广泛地被用于在免疫表型上定义辅助性T细胞。
尽管CD4+T细胞的数目在HIV-1病毒感染中减少，HIV-1病毒感染来源于病毒的gp120蛋白结合到CD4受体，蓬斯莱等。
报告说，表面CD4的密度在艾滋病毒感染者的T辅助细胞上仍保持不变。
从此以后，多年的研究支持了CD4表达/密度可用作生物校准器用于其它表面和细胞内蛋白质量化的这一理论。
Quantitativemulticolorflowcytometryincorporatinganti-bodiesandafluorescencedetectionmethodhasplayedacriticalroleinclinicaldiagnosticsandimmunotherapies.Thoughtheultimateobjectiveofquantitativeflowcytometryistomeasurethenumberofantigensorligandbindingsitesassociatedwithacell,thetaskiscarriedoutbymeasuringthenumberofantibodiesboundpercell（ABC）.Itiscriticallyimportanttoproducebiologicalcellreferencematerialsthatbearwell-characterizedproteinmarkerssuchasCD4forthetrans-formationofacalibratedlinearfluorescenceintensityscaleofaflowcytometerchanneltoabiologicallymeaningfulABCscale.7Thequalityofthecytometricmeasurementsisaffectedbyvariablessuchasantibodyclones,thefluorophoreandconjugationchemistries,thefixationconditions,andtheflowcytometricquantificationmethodsused.4,8−11Hence,inadditiontocharacterizingcandidatereferencecellpreparationsthatuseantibody-basedcytometricmethods,12itisnecessarytodevelopacomplementaryapproachtovalidatetheabsolutequantificationofreferencemarkerproteinssuchasCD4withouttheuseofantibodies.
定量多色流式细胞结合体和荧光检测方法在临床诊断和免疫治疗中起到了至关重要的作用。
虽然定量流式细胞仪最终目标是测量抗原或与细胞结合配体结合位点的数目，该任务的完成是通过测量每个细胞（ABC）抗体结合的数目。
这对于产生具有良好辨识性蛋白质标记特征的生物细胞参考资料是很重要的，如CD4对于一个流式细胞仪通道的校准线性荧光强度的反式就像生物学意义的ABC测量。
它的质量受到一些像抗体克隆，荧光和缀合化学，定影条件，和流程流式细胞仪定量分析方法变量的影响。
因此，在除了表征候选参考细胞制剂使用基于抗体的流式细胞术方法，制定补充办法，以验证像CD4的参考标记蛋白的绝对质量而不使用的抗体是非常必要的。
Liquidchromatographycoupledmassspectrometryhasemergedasaversatileplatformforquantitativeprotein/proteomicsanalysisduetoitshighspecificityandsensitivity.Relativequantificationofproteinscanbeachievedwithouttheuseofanyinternalstandardforcomparativeanalysisunderthesameanalyticalconditions.However,inmanyanalysessuchasclinicalbiomarkertests,absolutequantificationofprotein（s）intermsofmoleculecopynumberpercellorperunitweight/volumeofbiologicalsamplesisrequired.Absolutequantitativedataenablevaluablecomparisonsacrossdifferentstudiesandconclusiveinterpretationsofthediseasestatesortreatmentefficacyaswellastheunderstandingofthewholebodysystembiologyprobedfromdifferentanglesindifferentstudies.Multiplereactionmonitoringmassspectrometry（MRMMS）combiningproperseparationand/orfractionationtechniqueshasbeenproventobeaneffectiveplatformforproteinquantificationinbiologicalsamples.16−18Inthepresentstudy,wereportthedevelopmentofanMRMMS-basedapproachthatcombinesnanoscaleliquidchromatographyandastableisotope-labeledfull-lengthproteinastheinternalstandard,enablingthequantificationoftheCD4receptordensityinunitsofcopynumberpercellonhumanCD4+Tcellswithouttheuseofantibodies.
液相色谱-质谱联用由于其高特异性和灵敏度，作为定量蛋白质的一个多功能平台/蛋白质组学分析被应用。
蛋白质的相对量化的可以在没有达到内部标准的情况下，作为同样的分析条件的比较分析。
然而，在许多分析中，如临床生物标志物检测，蛋白质的绝对定量，需要根据每个单元或每单位重量/分子拷贝数计算生物样品的体积。
绝对定量在不同的量化数据，使有价值的比较研究和疾病状态或结论性的诠释治疗的效果以及整体的理解人体系统生物学从不同的角度不同的探讨研究。
多反应监测质谱（MRMMS）结合适当的分离和/或分馏技术已经被证明是一个有效蛋白质定量生物样本的平台，本研究中，我们的MRM基于MS的开发方法，将纳米液相色谱和稳定同位素标记的全长蛋白作为内标准，使CD4受体的量化密度在每个细胞的拷贝数对人体的CD4+T台细胞，而不使用抗体。
EXPERIMENTALSECTION
实验部分
Materials.Allchemicalsandreagents,unlessindicatedspecifically,werefromSigma-AldrichInc.
材料。
所有的化学品和试剂，除非另有说明具体地讲，购自Sigma-Aldrich公司。
DeterminationoftheHumanCD4+TCellCount.Cryopreserved,negativelyselectedhumanCD4+Tcellswithapurityof98.5%werepurchasedfromAstarteBiologics
（Redmond,WA）,confirmedinternally,andusedwithoutfurtherpurification.ThethawedcryopreservedCD4+Tcellswereslowlyaddedto9mLofRPMI-1640containing10%fetalbovineserum（FBS）ina15mLconicaltube.Afterthetubewasinvertedthreetimes,thecellswerecentrifugedat400gnfor10min,andthesupernatantwasdiscarded.Theresultingcellswerewashedonceandresuspendedinphosphate-bufferedsaline（PBS）with1%FBS.ThenumberofCD4+TcellswascountedbyusingbothahemocytometerandaflowcytometrywithwhichTruCountbeadsfromBDBioscience（SanJose,CA）wereusedastheinternalcountingstandard.MouseantihumanCD4fluoresceinisothiocyanate（FITC;cloneSK3,catalognumber340133,BDBiosciences）wasusedforcellstaining,andCD4+cellswerecountedusinganAriaIIflowsorterfromBDBiosciences.GatingofCD4+andTruCountbeadswasperformedonaFITChistogram.TheratiooftherespectivelygatedeventsofCD4+cellsandTruCountbeadswasusedforobtainingtheCD4+cellnumberaccordingtothemanufacturer’sprocedure.TheCD4+cellnumbersmeasuredbythehemocytometerandflowcytometrywerefairlyconsistentwithadifferenceofnomorethan6%,andtherefore,theaveragedcellcountfrombothmethodswasusedtoderivetheCD4receptordensity/copynumberpercell.
测定人体的CD4+T细胞计数。
冻存，负选择的人CD4+T细胞与98.5％的纯度从阿斯塔特生物制剂购买（华盛顿州雷德蒙市），内部确认，也没有用进一步纯化。
解冻的冷冻保存的CD4+T细胞中缓慢加入含10％胎牛血清的9毫升的RPMI-1640的在一个15毫升锥形管中的牛血清（FBS）。
后管呈倒三次，将细胞离心400gnfor10分钟，并弃去上清液。
所得到的细胞洗涤一次并重新悬浮在磷酸盐缓冲的盐水（PBS）和1％FBS中。
CD4+T细胞的数目是通过同时使用血细胞计数器和一个流式细胞计数与自BDBioscience公司（圣何塞TruCount珠，CA）被用作内计数标准。
鼠标抗人CD4异硫氰酸荧光素（FITC;克隆SK3，产品目录号340133，BDBiosciences公司）被用于细胞使用第二晓月流染色，CD4+细胞计数分拣机自BDBiosciences。
CD4+和TruCount之门珠对FITC直方图进行。
的比例CD4+细胞和TruCount珠分别门控事件用于根据所述获取的CD4+细胞数制造商的过程测得的CD4+细胞数由血球和流式细胞术是相当以不超过6％的差异相一致，因此，
从两种方法中的平均细胞数来求出每CELCD4受体密度/拷贝数。
CharacterizationofIsotope-LabeledStandardCD4.Isotopelabel（13Cand15N）wasintroducedonarginineandlysineresiduesinastandardCD4proteinfromOriGeneTechnologies（Rockville,MD）.TheaminoacidsequenceofthisstandardCD4proteinisprovidedintheSupportingInformation,TableS1.Sincetheisotopeincorporationofthestandardproteinisnot100%,thepercentageofisotopelabeling
wasevaluatedusingMRMMSbycomparingthechromato-graphicpeakintensitiesoftransitionsfromtheisotope-labeledpeptidestothepeakintensitiesofthecorrespondingtransitionsfromtheunlabeledpeptides.Theconcentra
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