细胞生物学实验报告.docx
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细胞生物学实验报告
实验一：
细胞的形态观察及其大小测量
一、实验目的：
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微构造；
2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。
二、实验材料和仪器：
小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；
普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。
三、实验步骤：
（一）细胞形态观察
l、动物细胞的观察
〔1〕人肝细胞切片：
在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。
〔2〕鸡血细胞涂片的观察：
观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察
〔1〕取蚕豆叶片横切片的观察：
注意表皮细胞和叶肉细胞的根本构造。
〔二〕细胞的大小和测量
1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。
2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。
调焦至能看清镜台测微尺的分度。
3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺（如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进展调焦），使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。
4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：
镜台测微尺的格数
目镜测微尺每格的微米数=—————————×10
目镜测微尺的格数
四、实验结果：
1、目镜校正：
40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24
2、细胞大小的测量：
测量次数
细胞种类
一/um
二/um
三/um
平均/um
人肝细胞〔10×40〕
19.44×21.36
18.00×18.96
16.32×19.68
17.92×20.00
血红细胞〔10×40〕
7.20
7.68
7.68
7.52
血白细胞〔10×40〕
9.12
9.60
9.84
9.52
血小板〔10×10〕
1.44
1.44
1.44
1.44
栅栏组织〔10×40〕
9.12×79.20
10.08×81.12
10.56×80.64
9.92×80.32
五、作业与思考：
1、血细胞按含量上下，主要含有：
红细胞，白细胞，血小板。
白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。
红细胞：
主要的功能是运送氧。
白细胞：
主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。
血小板：
止血过程中起着重要作用。
细胞形态见下列图。
2、植物细胞一般比动物细胞大一些。
形态图见下。
3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小根本一致，但有一些偏差。
放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。
实验二：
PAS〔PeriodicAcidSchiff〕反响显示糖原和其它多糖物质
一、实验目的
1、熟悉PAS法原理及操作步骤；
2、观察PAS反响的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。
二、实验原理
多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。
一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，一般称为构造多糖。
另一些多糖在生物体作为能量贮存，如淀粉〔植物〕和糖元〔动物〕，在需要时可以通过生物体酶系统的作用分解，释放出单糖。
三、实验用品：
过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯〔1：
1〕。
梯度乙醇溶液：
100％，95％，90％，80％，70％，50％各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。
载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆；小鼠肝细胞石蜡切片。
四、实验步骤:
〔一〕土豆切片的观察
制作土豆徒手切片→过碘酸处理15～30min→70%乙醇1min→schiff试剂15min→亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→镜检
〔二〕小鼠肝细胞切片的观察
取鼠肝石蜡切片→二甲苯脱蜡约10min→二甲苯+100%乙醇〔3min〕→梯度乙醇脱二甲苯，在各浓度乙醇〔100％，95％，90％，80％，70％，50％〕中约2～3min→过碘酸氧化15～30min→蒸馏水漂洗→Schiff试剂15～30min→亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→木精染色10min→流水冲洗→梯度乙醇脱水〔50％，70％，80％，90％，95％，100％〕，在各乙醇浓度中约2～3min→100%乙醇+二甲苯2～3min→二甲苯适度透明→指甲油封片→镜检
五、实验结果：
六、作业与思考:
1、描述土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特点。
土豆切片中，多糖多在细胞质液泡中。
鼠肝切片中，多糖多在靠近核的区域。
2、影响PAS反响染色效果的关键步骤是什么？
Camey固定液固定；Schiff染色液染色；对分色的控制。
3、如何制作徒手切片？
应注意什么才能得到薄而均匀的切片？
应注意需要连续快速地切下多片薄片，并从中选出较好的切片。
实验三：
叶绿体的别离与荧光观察
一、实验目的：
1、通过植物细胞叶绿体的别离,了解细胞器别离的一般原理和方法。
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。
二、实验原理：
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进展差速离心，是别离细胞器的常用方法。
将匀浆液1000r/min的条件下离心2min,以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。
然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有局部细胞核）。
某些物质在一定短波长的光〔如紫外光〕的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间放射出比照射光波长更长的光，这种光就称为荧光。
假设停顿供能，荧光现象立即停顿。
有些生物体的物质受激发光照射后，可直接发出荧光〔称为自发荧光〕。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光〔称为间接荧光〕。
三、实验材料和仪器：
普通离心机,粗天平,荧光显微镜，剪刀，研钵，移液管，漏斗，滴管,10ml刻度离心管,纱布假设干,无荧光载玻片和盖玻片，新鲜菠菜，0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙（acridineorange）、
四、实验步骤：
1、叶绿体的别离
〔1〕选取新鲜的菠菜嫩叶，洗净擦干后，去除叶梗及粗脉并剪碎，称取2g左右，置于预冷的研钵；
〔2〕加10ml的0.35mol•L-1NaCl溶液研磨匀浆；
〔3〕用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中；
〔4〕取滤液4ml于1000rpm离心2min，弃去沉淀；
〔5〕将上清液3000rpm离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体〔混有局部细胞核〕；
〔6〕沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。
2、叶绿体的观察
〔1〕滴叶绿体悬浮液一滴于载片上，加盖片；在普通光镜下观察，注意观察所别离的叶绿体的形态以及其是否完整。
〔2〕滴叶绿体悬浮液一滴于无荧光载片上，加无荧光盖片；在荧光显微镜下观察叶绿体有无自发荧光，其颜色如何。
〔3〕滴叶绿体悬浮液一滴在无荧光载片上，再滴加一滴0.01％吖啶橙荧光染料，加无荧光盖片后即可在荧光显微镜下观察其次生荧光。
3、完整细胞中的叶绿体观察
〔1〕用镊子撕取一片菠菜叶子表皮，平铺于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。
〔2〕用镊子撕去菠菜叶子的表皮，用刀片刮下一些叶肉细胞，放于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。
〔3〕将以上两种制片进展一下三种方式的观察：
a、通光镜下观察。
b、光显微镜下观察。
c、加一滴0.01％吖啶橙荧光染料，加无荧光盖片后，在荧光显微镜下观察。
五、实验结果:
表皮细胞〔普镜〕
木质素
木质素〔荧光〕
六、作业与思考：
1、描述你所观察到的实验现象，自发荧光和次生荧光的区别？
自发荧光：
有些生物体的物质受激发光照射后，直接发出的荧光称为自发荧光，如叶绿素的火红色荧光。
间接荧光：
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，那么称为间接荧光，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。
2、叶绿体别离的原理是什么？
操作过程中应注意什么？
通过研磨绿色植物叶片使叶肉细胞破损，叶绿体被释放到提取液中，再通过等渗介质中差速离心去除杂质，再次离心，那么可别离出叶绿体沉淀。
应注意须在低温下迅速提取，且须注意等渗液溶度，离心速度和时间的把握，防止叶绿体破裂。
实验四：
吖啶橙（acridineorange）染色
观察口腔上皮荧光
一、实验目的
1、熟悉荧光显微镜的原理及使用方法。
2、观察荧光染料染色后结合物发出的荧光。
二、实验原理
吖啶橙荧光染料可与细胞DNA和RNA结合。
其吸收光谱405nm，发射的荧光光谱是530～640nm，因此，吖啶橙和不同的细胞成分结合后，可发射红橙黄绿蓝各色荧光。
三、实验用品
荧光显徽镜、载玻片、盖玻片、染色缸、牙签；口腔黏膜上皮细胞临时制片；
0.1mol/LpH7、0PBS液。
0.1％吖啶橙原液、95％乙醇
四、实验步骤
1、用牙签刮取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上；
2、95％乙醇溶液固定5min；
3、滴加0.01％吖啶橙染液染色5min；
4、用PBS缓冲液缓慢冲洗；
5、加盖玻片镜检。
五、实验结果
口腔上皮细胞〔荧光〕
实验五：
植物细胞骨架的光学显微镜观察
一、实验目的
掌握植物细胞骨架的制备方法，并用光镜观察洋葱皮细胞的骨架网络构造。
二、实验原理
细胞骨架（cytoskeleton），是细胞以蛋白质纤维为主要成分的网络构造，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装构造的不同可分为微丝、微管和中等纤维。
本实验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜构造和大局部蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状构造。
三、实验用品
1、器材：
显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯；
2、实验材料：
洋葱鳞茎；
3、试剂：
pH6.8的磷酸缓冲液、M-缓冲液、1%TritonX-100、3%戊二醛、0.2%考马斯亮蓝R250染液、50％，70％，95％乙醇、〕叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶。
四、实验步骤
1、取材：
撕取洋葱鳞茎表皮0.5～1cm2，浸入装有磷酸缓冲液〔PH6.8〕的小烧杯中，处理5～10分钟。
2、去垢处理：
弃去PBS缓冲液，用吸水纸吸净剩余的PBS，加适量1%TritonX-100，使液体充分浸泡材料，并立即放入37℃恒温箱或水浴锅中处理30分钟。
3、冲洗：
吸去1%TritonX-100，立即参加M缓冲液轻轻冲洗3次，每次3～5分钟。
4、固定：
用吸管将M缓冲液吸尽，参加3%戊二醛，固定10～20分钟。
5、冲洗：
吸去3%戊二醛固定液，用磷酸缓冲液〔pH6.8〕冲洗3次，每次3～5分钟。
6、染色：
吸去PBS缓冲液，参加适量0.2%考马斯亮蓝R250染料，染色10～20分钟。
7、制片：
吸去染料，用水冲洗〔注意不要将材料丧失〕。
将洋葱表皮伸展铺平于载玻片上，加盖盖玻片。
8、镜检
五、实验结果
六、作业与思考
1、绘出洋葱细胞的骨架网络分布。
2、根据M-缓冲液的成分，分析其作用。
咪唑：
稳定PH值，缓冲作用；
KCL：
提供离子，对骨架起聚合作用；
MgCl2：
提供离子，对骨架起聚合作用；
EGTA：
螯合Ca离子，Ca离子对聚合不利；
EDTA：
螯合Ca离子，Ca离子对聚合不利；
巯基乙醇：
起复原作用，稳定骨架构造。
3、通过实验过程，推测你所观察到的细胞骨架属于胞质骨架中的哪种类型，为什么？
推测为所观察到的蓝色纤维属于细胞骨架中的微丝构造。
因为微管的构造较不稳定，局部纤维太细，光镜下难以分辨；而中间丝不是植物细胞的必须构造，在植物细胞中并不普遍存在，且中间丝更为纤细，光镜下更难以观察。
因此，推测为微丝。
实验六：
PEG法诱导细胞融合
一、实验目的
1、了解细胞融合的原理和过程；
2、初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理
细胞融合，即在自然条件下或利用人工法，使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。
化学融合方法一般使用聚乙二醇（PEG）诱导细胞在体外进展融合。
普遍认为PEG分子能改变各类细胞的膜构造，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的外表力作用，从而使细胞发生融合。
促进细胞融合的效力，必须采用较高浓度（有效工作浓度50%）的PEG溶液，但在高浓度PEG溶液下，细胞可能因脱水而受到显著的破坏。
因此，选择适宜的PEG分子量，浓度及作用时间是PEG融合技术的关键。
细胞融合率是指在显微镜的一个视野，已发生融合的细胞核总数与该视野所有细胞（包括已融合的细胞）的细胞核总数之比，通常以百分比表示。
三、实验用品
1、器材:
离心机、显微镜、天平、水浴锅、滴管、离心管、烧杯、盖玻片、载玻片。
2、材料：
鸡血悬液；
3、试剂：
0.85%的生理盐水、GKN液、1%詹那斯绿B、Hanks溶液。
四、实验步骤
1、鸡血红细胞悬液的制备：
将抗凝剂与鸡血按1:
3~1:
4的比例稀释，制成鸡血红细胞细胞悬液；
2、取鸡血1ml，参加4ml0.85%的生理盐水，1000rpm离心3min,弃上清液，重复上述操作一次；
3、沉淀用适量Hanks溶液重悬浮，1000rpm离心3min,弃上清液；
4、迅速加0.5ml50%PEG溶液，滴管轻柔吹打悬浮细胞，37℃水浴中进展细胞融合〔30min左右〕；
5、缓慢参加Hanks溶液，轻轻混匀，终止PEG的作用，使细胞三三两两地分散开来〔镜检〕，室温静置约20min；
6、取1小滴悬液于载玻片上，加少量的詹那斯绿B染液，染色5min左右；
7、镜检，观察细胞融合现象。
五、实验结果
鸡血细胞融合
六、作业与思考
1、请分析Hanks溶液的作用是什么〔可以从其成分的角度来答复〕？
1.作为平衡盐溶液无机盐和葡萄糖浓度接近大局部动植物细胞的水平；
2.终止细胞融合；
3.制备细胞悬液，使细胞分散。
2、PEG诱导细胞融合率受哪些因素影响？
受PEG的相对分子质量、PEG的体积分数、融合时的时间长短及温度上下等因素影响。
3、你认为在进展细胞融合时，需要注意哪些问题？
在参加PEG溶液后，应立即用滴管轻轻吹打悬浮细胞，可能出现多数细胞聚集的现象，在融合过程过后无法对细胞进展融合观察。
实验七：
动物骨髓细胞染色体标本的制备与观察
一、实验目的
1、掌握动物骨髓细胞染色体标本的制备技术
2、观察染色体的数目以及形态特征
二、实验原理
骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度的分裂能力，可以直接观察到分裂细胞。
经过秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可制作出理想的染色体标本。
骨髓细胞染色体标本的制备，具有取材容易，方法简单易行等优点，设备也简单，在一般的实验室都可进展。
三、实验用品
1、仪器：
天平、低速离心机、恒温水浴锅、显微镜、1ml注射器、解剖盘、解剖剪、刀片、试管架、10ml离心管、吸管烧杯、量筒。
酒精灯、冰冻载玻片、玻璃板、吸水纸、擦镜纸
2、材料：
小白鼠
3、试剂：
Carnoy固定液、0.1％秋水仙素、0.85%生理盐水、柠檬酸钠溶液、0.4%KCl溶液、40.0667mol/L磷酸缓冲液〔pH7.4〕、1:
10Giemsa磷酸盐缓冲液。
四、实验步骤
1、骨髓细胞制备如下表：
步骤
小鼠
两栖动物
〔1〕秋水仙素注射
按4ug/g体重注射
3～4h后处死
按30ug/g注射
7～8h后处死
〔2〕取后肢胫骨和股骨，切去两端。
〔3〕取骨髓细胞
2%柠檬酸钠溶液1ml
1%柠檬酸钠溶液1ml
用1ml注射器吸取柠檬酸钠溶液，通过针头将溶液注入骨髓腔，冲出骨髓细胞置10ml离心管中〔细胞冲净后骨髓腔由粉红变为白色〕；摘掉针头，用注射器筒轻轻反复吸打，使分散成单个细胞。
〔4〕低渗处理
预热及低渗水浴温度：
37℃
低渗时间：
30min
预热及低渗水浴温度：
26℃
低渗时间：
30min
视细胞多少参加7～9ml预热的0、4%KCl溶液，在水浴中低渗处理。
2、1000rpm离心8min。
3、弃上清，沿离心管壁缓慢参加新配制的甲醇：
冰醋酸〔3:
1〕固定液5ml，注意不要冲动细胞团块。
加完后立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀，静置固定20min。
如此反复固定2～3次，每次20min。
4固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，视管底的细胞多寡参加少量新配制的固定液，细胞团块轻轻吸打成悬液〔注意：
吹打不要过于用力〕。
5、在干净并预冷的载玻片上滴2～3滴细胞悬液，枯燥。
〔注意：
滴片时滴管离载玻片有一定高度有助于染色体分散〕
6、将玻片细胞面朝上水平放置，滴加1:
10Giemsa磷酸盐缓冲液3～4ml，染色10min。
7、冲洗掉染液，枯燥后镜检。
五、实验结果
老鼠大腿骨髓细胞染色体
六、作业与思考
1、在制备小鼠骨髓细胞染色体时为什么要进展预固定？
由于别离得到的染色体处于不同的分裂期，进展预固定是为了将这些细胞及其染色体固定在当前所处的时期，便于观察。
实质就是将细胞杀死，使其无法继续进展有丝分裂。
实验八：
酵母活性的检测及线粒体活性观察
一、实验目的
掌握检测细胞活性的原理和方法，线粒体原位染色原理及线粒体观察。
二、实验原理
美兰〔次甲基蓝〕染色法对啤酒酵母活性检测简单易行，该染色法主要是利用细胞膜的完整性与新代的能力说明细胞活性。
活酵母细胞具有复原次甲基蓝呈无色的一种复原酶，当酵母细胞浸于美兰溶液时，色素渗入细胞，活细胞的复原酶能使其脱色，但死细胞的复原酶由于失活，不发生脱色作用，故被染成蓝色。
台盼兰是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。
正常的活细胞，胞膜构造完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
TTC即2,3,5-氯化三苯基四氮唑，可以用来测定脱氢酶的活性。
在细胞的线粒体中四氮唑从电子传递链上承受电子形成三苯基甲腙，其为脂溶性物质，形成后随即插入线粒体等膜中或脂滴中，变成红色。
细胞活力强，有氧呼吸旺盛，这种转化能力就强，红色深；而死细胞新代停顿不能使四氮唑转变成三苯基甲腙衍生物，细胞不着色。
此法常用于悬浮培养细胞等材料整体活力检测〔分光光度法〕，在单个细胞活力检测中较少用。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进展超活染色，这是由于线粒体的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被复原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验用品
1、材料：
液体振荡培养的酵母。
2、仪器：
倒置显微镜〔生物显微镜〕，低速离心机，血球计数板，15mL离心管，试管，移液管，盖玻片，滴管，香柏油等。
3、试剂：
2%二水合柠檬酸钠次甲基蓝溶液〔含有0.01%的次甲基蓝〕、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.0）、0.2%的TTC溶液、0.1%台盼兰溶液、詹纳斯绿B溶液、Ringer溶液。
四、实验步骤
1、美兰染色法步骤
〔1〕配制不同生长状态的酵母样品，用蒸馏水调整细胞总数在（30-60）×106个/ml。
〔2〕染色液与酵母样品液等量混合，染色5min。
〔3〕用血球计数板做水封片，显微镜下计数染色细胞与总细胞数。
重复3次。
〔4〕细胞活性=活细胞数/总细胞数×100%
2、台盼兰染色步骤：
晃动悬浮培养物，稍静置，吸取上层悬浮液，在倒置显微镜下观察细胞，用缓冲液调到适宜观察的细胞密度，参加几滴0.1％台盼兰溶液，用滴管混合均匀，5分钟后显微镜下观察，计数100个细胞的染况，重复3次，计算存活率。
3、TTC染色步骤：
〔1〕吸取振荡或静置培养的培养物8mL，以1000转/别离心10分钟。
〔2〕小心吸去上清液，参加0.4%的TTC溶液5mL混匀，30℃下染色1小时。
〔3〕在显微镜下观察细胞染况，比拟两种培养物染色差异。
4、詹纳斯绿B染色步骤：
〔1〕吸取振荡或静置培养的培养物8mL，以1000转/别离心10分钟。
〔2〕小心吸去上清液，参加少量詹纳斯绿B溶液混匀，30℃下染色30分钟。
〔3〕在显微镜下观察细胞染况，油镜下观察线粒体。
比拟两种培养物染色差异。
五、实验结果
1、美兰和台盼兰染色方法细胞存活观察
次数
处理方法
1
2
3
平均
美兰染色
活细胞
27
29
26
27.33
死细胞
7
10
8
8.33
存活率%
79.41
74.36
76.47
76.64
台盼兰染色
活细胞
31
28
35
31.33
死细胞
6
5
8
6.33
存活率%
83.78
84.48
81.40
83.18
2、振荡培养酵母TTC和詹纳斯绿B的细胞染色观察
六、作业与思考
1、美兰和台盼兰染色方法所得存活率差异原因探讨。
对于美兰染色，死细胞的复原酶由于失活，不发生脱色作用，故被染成蓝色；对于台盼兰染色，死细胞的细胞膜丧失活性或构造被破坏，胞膜的通透性增加，可被台盼兰染成蓝色。
然而，在美兰染色中，可能存在局部活细胞由于复原酶活性相对较低，而不能完全脱色，因此会造成判定细胞死亡的假象，故美兰染色的细胞存活率较台盼兰染色的偏低。
2、酵母TTC和詹纳斯绿B染色差异的原因是什么？
对于TTC染色，在细胞的线粒体中四氮唑从电子传递链上承受电子形成三苯基甲腙，其为脂溶性物质，形成后随即插入线粒体等膜中或脂滴中，变成红色。
对于詹纳斯绿B染色，由于线粒体的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色。
综合性实验：
细胞分裂中期纺锤体和染色体构造荧光观察
一、实验目的：
1、学习和掌握细胞免疫荧光染色/细胞转染技术和荧光显微镜使用。
2、观察有丝分裂过程中染色体和细胞骨架的形态特征和动态变化。
二、实验原理：
有丝分裂是高等生物细胞增殖的主要方式。
在有丝分裂过程中，细胞核的染色体通过复制，形成姐妹染色体，在微管形成的纺锤体的牵引下，每一对染色单体分开，并向相反地方向运动，随后胞质分裂，最后形成两个完整的子细胞。
通过有丝分裂，细胞形成两个与母细胞完全一样的子细胞，核染色体经过准确地复制，并有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞保持一致。
在细胞有丝分裂过程中，伴随着一系列事件的发生，比方基因组DNA的复制，染色体的形成，中心体移动到细胞两极，微管组装，纺锤体形成，核仁消失，核膜破裂等等。
通过一定的细胞处理，可以将细胞阻滞在某个分裂阶段，再通过染色或标记，就能够观察和研究该阶段的细胞部构造状态。
三、实验材料和仪器：
细胞培养间，超净工作台，细胞培养箱，倒置荧光显微镜，低速细胞离心机，水浴锅，冰箱，移液枪。
高糖DMEM液体培养基，胎牛血清〔FBS〕，0.25%胰酶消化液，PBS，200U/μl青链霉素储藏液〔P/S〕，0.2%秋水仙碱，牛血清白蛋白〔BSA〕，4%多聚甲醛，75%酒精
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