2104 DZG30多功能中药灭菌柜清洁验证方案.docx
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2104DZG30多功能中药灭菌柜清洁验证方案
清洁验证文件
文件名称
DZG-3.0多功能中药灭菌柜清洁验证
文件编号
TS-VD-QJ2104-00
DZG-3.0多功能中药灭菌柜
清洁验证方案
验证方案的起草：
日期：
验证方案的审核：
日期：
验证方案的审核：
日期：
验证方案的批准：
日期：
1.概述
DZG-3.0多功能中药灭菌柜是中药前处理车间重要的生药粉灭菌干燥设备,为确保建立的清洁操作程序能够保证按程序清洁完后，设备表面残余物不超过预先确定的残余物可接受标准，防止出现交叉污染，特对清洗效果进行验证。
2.验证目的
通过验证试验提供数据，证明DZG-3.0多功能中药灭菌柜按规定的清洁操作程序清洁后使用，能保证产品质量。
3.职责
车间：
负责起草验证方案和报告，并负责本方案的实施。
负责跟踪所有偏差缺陷均已整改。
生产部：
负责该方案和报告审核。
质量部：
负责验证方案、验证报告的审核，负责对验证过程的监控和检验，负责对偏差作出处理意见。
验证总负责人：
负责方案、偏差和报告的最后批准。
4.培训
在本方案实施前，已对方案实施过程中涉及人员进行培训，以保证方案顺利实施，并做好培训记录，培训记录见附表1。
5.风险评估
根据《设备确认操作规程》的要求，设备确认的范围应通过风险分析确定，本次确认的风险分析按照《药品生产质量失败模式与影响分析（FMEA）操作规程》进行，详见：
DZG-3.0多功能中药灭菌柜清洁验证风险评估（编号：
FX-QA-QJYZ-2019-01）。
6.验证内容
6.1.参照检测对象的选择
该设备日常生产产品一览表
产品参数
产品名称
药材
投料总量（Kg）
主药成分
水中溶解性
NOEL（mg/60kg体重）
主药检测方法
三黄片
大黄生药粉
600.0
总蒽醌
微溶或不溶
＞0.5
高效液相色谱法
游离蒽醌
元胡止痛片
白芷生药粉
996.0
欧前胡素
微溶
0.165
高效液相色谱法
利肺片
百合、冬虫夏草、蛤蚧混合生药粉
67.824
腺苷
易溶
＞20
高效液相色谱法
复方桔梗止咳片
桔梗、远志混合生药粉
1324.8
细叶远志皂苷
易溶
-
高效液相色谱法
远志口山酮Ⅲ
-
-
3，6'二芥子酰基蔗糖
易溶
-
黄连上清片
大黄、白芷、黄连、石膏混合生药粉
675
总蒽醌
微溶或不溶
＞0.5
高效液相色谱法
游离蒽醌
欧前胡素
微溶
0.165
盐酸小檗碱
易溶
＞7.5
舒筋活血片
红花、醋香附、烫狗脊
香加皮混合生药粉
1285
原儿茶酸
微溶
＞0.4
高效液相色谱法
羟基红花黄色素A
易溶
-
山柰素
易溶
-
4-甲氧基水杨醛
不溶
易致突变
藿香正气片
生半夏、白芷生药粉
503
-
-
-
-
小儿复方鸡内金散
鸡内金、六神曲
200
-
-
-
-
牛黄上清片
大黄、黄连混合生药粉
172.8
总蒽醌
微溶或不溶
＞0.5
高效液相色谱法
游离蒽醌
盐酸小檗碱
易溶
＞7.5
清眩片
白芷、石膏混合生药粉
1408
含水硫酸钙
微溶
-
滴定法
欧前胡素
微溶
0.165
高效液相色谱法
橘红片
法半夏、茯苓、浙贝母、桔梗、石膏混合生药粉
1130.4
贝母素甲/乙
不溶
-
高效液相色谱法
含水硫酸钙
微溶
-
滴定法
桔梗皂苷D
易溶
-
高效液相色谱法
羚羊感冒片
羚羊角、金银花、桔梗混合生药粉
388.8
木犀草苷
微溶
-
高效液相色谱法
绿原酸
易溶于热水
2
桔梗皂苷D
易溶
-
本验证方案以日常生产量大，产品的活性成分水溶度低、检测方法灵敏度高、活性或毒性较强的品种作为参照检测对象，在设备生产该品种结束后，进行清洁验证。
根据上表分析，故舒筋活血片中香加皮药材4-甲氧基水杨醛作为参照对象。
6.2.清洗方法
6.2.1.关闭电源后，将设备的状态标识“运行中” 去掉，换上状态标识“待清洁”，准备实施清洁时再将状态标识“待清洁”去掉，开始清洁操作。
6.2.2.打开设备，将喷液装置的喷枪取出，放入不锈钢桶中，每批生产结束后即将布袋卸下，送器具清洗间清洗。
6.2.3.主机料斗清洗：
送至器具清洗间，先用饮用水冲洗干净，再用纯化水冲洗干净，自净10分钟后，再用75%乙醇湿润的抹布擦拭表面，消毒十分钟，再用压缩空气吹干。
6.2.4.内表面清洗：
用饮用水冲洗，再用软刷刷洗，再用纯化水冲洗干净，自净10分钟后，再用75%乙醇消毒十分钟，再用压缩空气吹干。
6.2.5.喷液装置清洗：
用饮用水、洁净抹布将喷液筒清洗干净后，喷淋桶中加入饮用水，启动喷液装置，饮用水通过管路喷至不锈钢水桶中，如此反复至出水洁净。
自净10分钟后，加75%乙醇入喷液筒，启动喷液装置，将乙醇喷至不锈钢水桶中。
放净乙醇，再用压缩空气吹干。
6.2.6.布袋清洗：
滤袋用饮用水浸泡后，手动清洗干净，再用纯化水漂洗两次。
放入热风循环箱中烘干，再用洁净塑料袋密封，备用。
6.2.7.外部清洁：
用洁净剂湿润的洁净抹布擦拭净设备外表面有污迹的地方，再用饮用水湿润的洁净抹布将设备外表面再擦拭一次，最后用75%乙醇湿润抹布擦拭。
6.2.8.清洁用具的清洗、干燥及存放：
设备清洗完毕后，将使用的清洁工具用饮用水（如需要使用清洁剂，则按清洁剂的配制方法配制）清洗至洗出液无色或无泡沫，存放于洁具存放间。
6.2.9.清洁完毕后及时填写设备、仪器使用日志，经QA检查清洁完成情况及清洁效果，合格后更换设备状态标志（已清洁）。
6.3.最终淋洗水法验证：
6.3.1.取样：
用两个洁净的无菌取样瓶从设备冷凝水排放口处分别取最终淋洗水500ml，用于外观、pH值、残留物及微生物限度检测。
6.3.2.可接受限度标准
6.3.2.1.外观检查：
最终淋洗水无可见异物与不溶性微粒；
6.3.2.2.pH值：
设备最终淋洗水与用于清洁的淋洗水pH值相差范围应保证在±1；
6.3.2.3.残留物：
取设备最终淋洗水，以纯化水为空白，在200nm-760nm进行全波长扫描，吸光度不超过0.05Abs；
6.3.2.4.微生物限度：
需氧菌总数＜100CFU/ml。
6.3.3.检测方法
6.3.3.1.外观检查：
在不低于300勒克司的照度下取最终淋洗水用目视法检查；
6.3.3.2.pH值对比检查：
取设备最终淋洗水与清洁用淋洗水，按《中国药典》2015版四部通则pH值检查法进行检测，将两者检测结果进行对比分析；
6.3.3.3.残留物：
按《中国药典》2015版四部通则紫外-可见分光光度法进行检测；
6.3.3.4.微生物限度：
按《中国药典》2015版四部通则薄膜过滤法进行检测。
6.4.表面擦拭法验证
6.4.1.可接受限度标准
6.4.1.1.外观检查：
用干净的白色绸布搽试设备的内表面，应无污迹及可见残留物。
6.4.1.2.残留物限度标准：
根据食品法规的习惯要求，污染不超过10ppm（即下一个产品每kg中许可含上一个产品不超过10mg），按下列公式计算：
10ppm=10μg/g≌10mg/Kg
表面残留物限度L（mg/25cm2）=10×下批产品每批批量（Kg）×25/共用设备直接接触药品内表面积：
残留浓度总表面积S计算：
CW700水冷式破碎除尘机主要与物料接触部位为集粉分级机、旋风分离器、管道。
集粉分级机为上下为空的圆柱与圆锥混合体，旋风分离器为上下为空的圆柱与圆台混合体，管道为圆柱体。
集粉分级机表面积计算S1：
半径r145cm高h1135cm母线l170cm
集粉分级机的表面积S1=圆柱侧面积+圆锥侧面积
=90*3.14*135+90*3.14*70
=57933cm2
旋风分离器表面积计算S2：
上半径r230cm、高h2130cm、母线l270cm、下半径R215cm
集粉分级机的表面积S2=圆柱侧面积+圆台侧面积
=60*3.14*130+3.14*（30+15）*70
=34383cm2
管道的表面积S3：
半径r36cm、高度h3180cm
管道的表面积S3=6*3.14*180=3391.2cm2
CW700水冷式破碎除尘机表面积S4=S1+S2+S3=57933+34383+3391.2=95707.2cm2
CSJ600粗碎机主要与物料接触部位为粉碎主机。
粉碎主机为上下为空的长方体与梯形体的混合体。
CSJ600粗碎机表面积计算S5：
长方体长A560cm、宽B536cm、高度H5:
50cm；梯形体前后梯形上底a560cm、下底b536cm、高度h5:
35cm；侧面梯形上底c536cm、下底d512cm、高度f5:
38cm
CSJ600粗碎机表面积S5=长方体侧面积+梯形体侧面积
=2*（60*50+36*50）+2*{（60+36）*35/2+（36+12）*38/2}
=14784cm2
SH-5000双锥混合机与药品直接接触的部位主要是混合室与上下料口，混合室形状为圆柱体，料口为圆台。
SH-5000双锥混合机内表面积S6：
料口上半径r6200cm、下半径R6125cm、母线L691.8cm、混合室半径A6900m、高度H6200cm
SH-5000双锥混合机内表面积S8=上下料口内表面积+混合室表面积
S6=2π（r6+R6）L6+πA6H6
=2×3.14×（200+125）×91.8+3.14×900×200
=1317845.4cm2
DZG-3.0多功能中药灭菌柜与药品直接接触的部位主要药盘（1柜共104盘），药盘为长方形。
药盘尺寸：
48×47×4（cm）
药盘表面积S6=48×47+（48+47）×2×4=3016cm2
根据上述公式，最大允许残留量为：
L=10×67.824×=0.0116mg/25cm2
即最大允许残留量为：
0.0116mg/25cm2。
6.4.2.化学残留取样方法回收试验
6.4.2.1.样品的涂布
取一块洁净、平整光洁的不锈钢板；用钢锥划出100mm×100mm的区域；配制浓度为每ml含黄芩苷60μg的对照品溶液，精密量取1mL对照品溶液尽量均匀地滴在100mm×100mm的区域内，自然干燥。
同法涂布6块。
6.4.2.2.取样方法：
将棉签头按在取样表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面，擦拭过程应覆盖整个表面；翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭，但与前次擦拭移动方向垂直（如下图）。
擦拭完后，用剪刀剪下棉签头放入锥形瓶中，盖上瓶塞，备用。
6.4.2.3.检测方法：
a.色谱条件与系统适用性试验：
用十八烷基硅硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-醋酸（36：
64：
2）为流动相；检测波长278nm。
理论塔板数按4-甲氧基水杨醛峰计算，应不低于2000。
b.对照品溶液制备：
取4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成1ml含20μg的溶液，摇匀，即得。
c.供试品溶液制备：
将擦拭棉签头折断放入装有10ml甲醇的锥形瓶中溶解，摇匀，过滤即得。
d.测定法：
吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，计算回收率和回收率的RSD。
6.4.2.4.可接受标准：
回收率应大于70%，相对标准偏差应不大于20%。
6.4.2.5.计算：
回收率=测得量/涂布量*100%
相对标准偏差（RSD）=标准偏差（SD）/计算结果的算术平均值*100%
6.4.2.6.回收取样法检测结果
板号
涂布量µg
测得量µg
回收率
平均回收率
回收率RSD
1
2
3
4
5
6
小结：
执行人：
日期：
复核人：
日期：
6.4.3.微生物棉签擦拭取样方法回收试验
6.4.3.1.菌液的制备
6.4.3.1.1.金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液的制备
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时。
取上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释制成每0.1ml含菌数50～100CFU工作菌液。
6.4.3.1.2.白色念珠菌菌液的制备
接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3天。
取上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释制成每0.1ml含菌数50～100CFU的工作菌液。
6.4.3.1.3.黑曲霉菌液的制备
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20℃～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱。
用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释制成每0.1ml含菌数50～100CFU的工作菌液。
6.4.3.2.试验操作过程
6.4.3.2.1.染菌不锈钢载片制备
6.4.3.2.2.载片脱脂：
处理载片放在含肥皂的水中煮沸30min，以纯化水洗净，再用纯化水煮沸10min；最后用注射用水漂洗至pH中性晾干备用。
6.4.3.2.3.菌液滴染
将经灭菌的载片（50mm×50mm）平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉含菌量为50～100CFU的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。
滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。
每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片。
6.4.3.2.4.染菌玻璃载片制备
因培养皿的材质为玻璃，故用培养皿代替玻璃载片进行染菌试验。
进行菌液滴染前，用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积（50mm×50mm），标注清晰。
菌液滴染操作同“6.4.3.2.3”。
6.4.3.2.5.擦拭取样：
取无菌医用棉签2支，用0.9％无菌氯化钠溶液润湿后，在锥形瓶上挤压除去多余的溶液。
将其中1支棉签头按在染菌载片上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面。
在向前移动的同时将其从一边移到另一边。
擦拭过程应覆盖整个表面。
另取1支棉签再进行擦拭。
但与前次擦拭移动方向垂直。
擦拭完后，用无菌手术剪刀把棉签的头部（棉花部位）剪断，投入装有50ml0.9％无菌氯化钠溶液的锥形瓶中，密闭。
6.4.3.2.6.检验操作：
将装有样品的锥形瓶反复振摇，使棉签上的微生物释放到溶液中。
照薄膜过滤法进行过滤，取出滤膜，菌面朝上，贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上。
6.4.3.2.7.菌液计数：
取适宜稀释的菌液0.1ml（约50～100CFU）分别注入平皿中，立即倾入冷却至45℃左右的胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所涂布的试验菌数。
6.4.3.2.8.阴性对照：
将无菌医用棉签用0.9％无菌氯化钠溶液润湿后，在锥形瓶上挤压除去多余的溶液。
将棉签头按在已灭菌的载片上（未染菌的载片）擦拭取样，操作同上。
平行制备两份样品。
6.4.3.2.9.培养及计数：
检验结束后，将需氧菌平皿倒置于30～35ºC培养箱培养3天计数。
6.4.3.2.10.可接受标准：
应进行3次独立的平行试验；阴性对照均应无菌生长，每种、每次擦拭回收菌落数回收率应大于70%。
6.4.3.2.11.计算
回收率%=擦拭回收菌落数／试验菌涂布菌落数×100%
6.4.3.2.12.检验结果
第一次试验结果
名称
项目
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
试验菌菌落计数
平均菌落数
不锈钢载片阴性
不锈钢载片擦拭菌落数
平均菌落数
不锈钢载片擦拭回收率
玻璃载片阴性
玻璃载片擦拭菌落数
平均菌落数
玻璃载片擦拭回收率
第二次试验结果
名称
项目
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
试验菌菌落计数
平均菌落数
不锈钢载片阴性
不锈钢载片擦拭菌落数
平均菌落数
不锈钢载片擦拭回收率
玻璃载片阴性
玻璃载片擦拭菌落数
平均菌落数
玻璃载片擦拭回收率
第三次试验结果
名称
项目
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
试验菌菌落计数
平均菌落数
不锈钢载片阴性
不锈钢载片擦拭菌落数
平均菌落数
不锈钢载片擦拭回收率
玻璃载片阴性
玻璃载片擦拭菌落数
平均菌落数
玻璃载片擦拭回收率
小结：
执行人：
日期：
复核人：
日期：
6.4.4.取样方法及检测
6.4.4.1.取样点的确定
根据设备结构和日常使用功能，需选择最难清洗部位代表设备清洁验证取样点。
根据生产经验，我们选择最难清洗部位为腔内表面顶部拐角处、腔内表面底部拐角处、物料盘内表面拐角处。
选择依据是设备腔内表面顶部拐角处、腔内表面底部拐角处容易堆积脏污物质，物料盘拐角处易粘附物料，不易冲洗干净。
6.4.4.2.样品采取及检测（采用棉签擦拭取样）
6.4.4.2.1.微生物取样：
应在化学取样之前进行，与化学验证取样在取样点不同部位取样。
将镊子、棉签进行消毒灭菌后用镊子取脱脂棉签用0.9％无菌氯化钠溶液润湿后，在最确定取样部位擦拭25cm2区域面积取样。
后将棉签头折断放入50ml的0.9%无菌氯化钠液溶液中，充分振摇，作为供试品，按照薄膜过滤法进行检验。
样品编号依次为5-7号。
6.4.4.2.2.表面残留物取样设备清洗完成后，用洁净棉签在腔内表面顶部拐角处、腔内表面底部拐角处用擦拭法取样。
取样前先将棉签头用甲醇浸湿，取样时，握住棉签柄，以30°角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积25cm2（可用特定的模板确定擦拭面积），然后将棉签头折断放入70%乙醇中，充分振摇，作为供试品，按“6.4.2.3”检测方法进行检测。
6.5.设备清洁验证取样点确定表
设备名称
多功能中药灭菌柜
设备编号
SBBMJ01
设备型号
DZG-3.0
设备位置
中药前处理车间
取样点编号
取样方法
检验目的
取样点位置
1
最终淋洗水
外观、pH值、残留物
冷凝水排放口处
2
棉签擦拭
表面残留物
腔内表面顶部拐角处
3
棉签擦拭
表面残留物
腔内表面底部拐角处
4
棉签擦拭
表面残留物
物料盘拐角处
5
棉签擦拭
微生物限度
腔内表面顶部拐角处
6
棉签擦拭
微生物限度
腔内表面底部拐角处
7
棉签擦拭
微生物限度
物料盘拐角处处
6.6.验证重现性：
该验证连续进行3次。
6.7.检测结果记录：
清洁时间：
年月日产品名称：
产品批号：
设备名称
多功能中药灭菌柜
设备编号
SBBMJ01
设备型号
DZG-3.0
设备位置
中药前处理车间
检测项目
外观
残留物/表面残留物
微生物限度
pH值
可接受标准
淋洗水
应无可见异物与不溶性微粒
＜0.05Abs
＜100CFU/ml
设备最终淋洗水与用于清洁的淋洗水pH值相差范围应保证在±1
擦拭
应无污迹及可见残留物
＜0.0116mg/25cm2
＜50CFU/25cm2
--
1
淋洗水pH：
纯化水pH：
2
--
--
--
3
--
--
4
--
--
5
--
--
6
--
--
--
7
--
--
--
8
--
--
--
结果评价
设备清洁验证检测结果记录
（二）
清洁时间：
年月日产品名称：
产品批号：
设备名称
多功能中药灭菌柜
设备编号
SBBMJ01
设备型号
DZG-3.0
设备位置
中药前处理车间
检测项目
外观
残留物/表面残留物
微生物限度
pH值
可接受标准
淋洗水
应无可见异物与不溶性微粒
＜0.05Abs
＜100CFU/ml
设备最终淋洗水与用于清洁的淋洗水pH值相差范围应保证在±1
擦拭
应无污迹及可见残留物
＜0.0116mg/25cm2
＜50CFU/25cm2
--
1
淋洗水pH：
纯化水pH：
2
--
--
--
3
--
--
4
--
--
5
--
--
6
--
--
--
7
--
--
--
8
--
--
--
结果评价
设备清洁验证检测结果记录（三）
清洁时间：
年月日产品名称：
产品批号：
设备名称
多功能中药灭菌柜
设备编号
SBBMJ01
设备型号
DZG-3.0
设备位置
中药前处理车间
检测项目
外观
残留物/表面残留物
微生物限度
pH值
可接受标准
淋洗水
应无可见异物与不溶性微粒
＜0.05Abs
＜100CFU/ml
设备最终淋洗水与用于清洁的淋洗水pH值相差范围应保证在±1
擦拭
应无污迹及可见残留物
＜0.0116mg/25cm2
＜50CFU/25cm2
--
1
淋洗水pH：
纯化水pH：
2
--
--
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3
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--
4
--
--
5
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6
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7
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8
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结果评价
结论：
执行人：
日期：
复核人：
日期：
6.8.偏差及处理
本次验证过程出现的偏差应详细记录在附件3“偏差记录表”中，验证小组根据公司《偏差管理规程》认真仔细地分析原因并提出解决方案并监督实施。
6.9.方案修改记录
在执行过程中，本方案若有必要修改，应由验证小组提出，经验证
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