微生物SOP文件.doc

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一、简易SOP文件：

1.1、标本接收筛选方案：

1.1.1、痰标本：

目测：

黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、稠厚，呈现团块状的标本为合格标本；

而无色、白色、有黑色小点，清稀，呈现泡沫状，有明显食物渣滓、纸屑灰尘、泥土的为不合格标本。

显微镜下筛选：

对经过目测筛选的标本须经过显微镜下再次筛选，凡脓细胞>25/HP且复层鳞状上皮<10/HP的标本为合格标本，可进入下一步程序；而脓细胞<10/HP或复层鳞状上皮>25/HP的标本为不合格标本，应拒收。

1.1.2、尿标本：

目测：

采用一次性无菌杯，杯盖严密者为初步合格；

显微镜下筛选：

标本经过离心后镜检，凡有较多复层鳞状上皮的，脓细胞较少而细菌数量较多的、或有大量尿结晶析出的均为不合格标本，应拒收。

1.1.3、大便标本：

采用一次性无菌杯，杯盖严密，无明显灰尘、泥土或纸屑者为合格标本。

1.1.4、咽拭子标本：

须采用显微镜下筛选，凡无脓细胞的标本为不合格标本，应拒收；而脓细胞>10/HP的为合格标本。

——怀疑为风湿热、猩红热的病人除外。

1.1.5、血液、骨髓、心包液：

凡未接种于血培养瓶中的均为不合格标本，应拒收。

1.1.6、各种穿刺液：

所有标本均采用无菌容器送检或未接种于血培养瓶中，否则为不合格标本，应拒收。

1.1.7、脑脊液、生殖道标本：

采用一次性无菌杯或直接接种于血培养瓶中，由医护人员（住院病人）或病人家属（门诊病人）当面交送给专业微生物检验人员，经过询问是在30min内，保温保湿条件下运送的方为合格标本，否则应拒收。

1.1.8、其他标本：

必须是采用无菌容器运送的，且在相应规定时间内送检的才是合格标本。

1.2、标本预处理：

1.2.1、痰标本：

按《全国临床检验操作规程》（第二版）相关章节，采用先用20ml生理盐水洗涤两次，经过10ml生理盐水稀疏后，用接种钩钩取脓性部分，采用压片法制作痰涂片，再在杯中加入胰蛋白酶消化1-2小时后接种。

1.2.2、尿标本：

WBC<5/HP的尿标本不用进行培养,因为很少会出现没有细胞渗出的尿路感染.当WBC>5/HP时，取4ml离心后，弃去上清液，留下200µl混匀后接种，剩余标本涂片干燥后染色；不离心标本用于菌落计数，方法，取5ml生理盐水，加入50µl尿液标本，混匀后取100µl接种，结果×1000为每毫升菌落数。

1.2.3、大便标本：

取绿豆大小的粪便标本加入生理盐水制成匀浆，用接种环取一环涂片，观察有无脓细胞，真菌孢子及菌丝，有真菌的须接种CHROMagar念珠菌培养基，脓细胞++以上的接种粪便选择性培养基，已经经验应用抗生素的采用改良TTC增菌液或Na2S2O3肉汤增菌液先进行增菌。

留下涂片干燥后Gram染色，观察菌群情况，注意有无菌群失调。

对于无脓细胞的标本无须进行接种。

1.2.4、咽拭子标本：

润湿后接种。

剩余标本直接涂片，干燥后染色。

1.2.5、脑脊液：

由临床医生按无菌操作直接注入血培养瓶1-3ml直接送检。

1.2.6、生殖道标本：

须将培养基孵温后接种。

剩余标本直接涂片作Gram染色。

1.2.7、其他标本：

除血液、骨髓、心包液等所有标本必须在接种完后用剩余标本作直接涂片，干燥后作　Gram染色。

1.3、读片：

根据人体对细菌/真菌感染在早期主要以非特异性免疫的细胞免疫为主的特点，结合标本来源部位系统器官生理病理特点，收寻20~30个视野中脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染色排列特征，菌体特征（如粗细、长短、扭曲）并作记录。

其中痰液标本的读片尤为重要：

阐述痰液形成过程和排出过程，我们可以得知，在下呼吸道中感染中形成的炎性渗出、包裹物中存在与感染直接相关的病原菌，在自然排痰的过程中会被上呼吸道的正常菌群所污染，但污染菌位于炎性包裹物之外，且人体对正常菌群具有共生性保护因而不会产生吞噬现象，借此理论，我们将选择痰标本中脓细胞成团块状分布，集中而不稠密，且周围无鳞状上皮细胞或无大量成团状分布的细菌球的区域为读片区，认真收寻脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染色排列特征，菌体特征（如粗细、长短、扭曲）并作记录，将此作为确定病原菌的理论依据。

粪便标本：

在观察吞噬现象的同时，作好菌群比例计算，并记录（菌群比例分析参照相关文件）。

1.4、标本接种：

1.4.1、痰液：

一般：

BA、Choc（加入万古霉素的营养强化嗜血杆菌培养基）、MecK、CHROMagar；怀疑为军团菌的加种BCYE-а培养基，怀疑为百日咳的加种Boudet-Gengou培养基，怀疑为肺炎支原体感染的加种Hayflick双相培养基或采用免疫学及分子生物学方法检测，肺炎衣原体须用免疫学或分子生物学方法。

1.4.2、尿液：

一般：

BA、MecK；怀疑为真菌感染的加CHROMagar，怀疑为淋病的加巧克力培养基，怀疑为软下疳的加种Choc；怀疑支原体感染的接种支原体选择性培养基如PPLO、A7B分离鉴定培养基或商品培养基

1.4.3、大便标本：

一般感染性腹泻的粪便标本直接接种或增菌后接种：

SS、SMC、TCBS；怀疑为金黄色葡萄球菌性食物中毒或伪膜肠炎的加HSM（高盐甘露醇培养基），怀疑为真菌性肠炎的加CHROMagar，怀疑为伪膜性肠炎的应作厌氧菌培养分离艰难梭菌。

1.4.4、耳、鼻、眼、咽拭子标本：

BA、Choc、CHROMagar；怀疑为白喉的加亚碲酸钾血琼脂或卵黄培养基

1.4.5、脓液、及脓性穿刺物：

一般：

BA、MecK；来源于面部、扁桃体周围、颌下、腋下等处淋巴结脓肿的脓液加种Choc，怀疑为真菌的加CHROMagar；来源于生殖系统的脓液须加种巧克力培养基。

怀疑厌氧菌感染时应作厌氧菌培养接种BAP（强化血琼脂）、KVLB（卡拉-万古冻溶血琼脂）、BBE（胆七拟杆菌琼脂）、PEA（苯乙醇血琼脂）等。

1.4.6、血、骨髓标本：

由医护人员床旁接种，需氧+厌氧或L-型血培养瓶，怀疑播散型结核分枝杆菌感染的加种分枝杆菌血培养基。

经过增菌后转种BA、Choc、MecK、厌氧菌BAP等固体培养基。

1.4.7、胸腹水、鞘膜液：

无菌操作注入血培养瓶内增菌后BA、Choc、MecK、厌氧菌BAP等固体培养基。

1.4.8、脑脊液：

由临床医生按无菌操作直接注入血培养瓶1-3ml直接送检。

1.4.9、手术创面、烧伤创面分泌物：

接种BA、MecK；怀疑为真菌感染的加CHROMagar。

1.4.10、各种生殖道标本：

种BA、Choc、MecK、CHROMagar。

1.4.11、组织标本：

（暂未开展！

）先粉碎后接种BA、Choc、MecK、CHROMagar，有必要时作厌氧菌培养。

1.4.12、皮屑、甲屑、毛发：

种CHROMagar、沙氏斜面培养基、必要时种察氏培养基。

1.5、读板：

1.5.1、痰液：

（经过18~24h隔夜培养，但孪生球菌、营养缺陷链球菌以及分枝杆菌则需延长培养时间）

1.5.1.1、BA生长、Choc不生长、MecK不生长：

Gram染色：

分G+co（革兰阳性球菌）,G+b（革兰阳性杆菌）

G+co—依靠溶血特征，菌落形态、菌落颜色、菌体形态区分:

▲葡萄球菌：

淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则圆形，β/γ溶血，较湿润，

▲微球菌：

黄色/白色/橙色，中等大小，较凸，规则圆形，不溶血，较干燥，不易乳化较葡萄球菌生长缓慢，该菌一般无临床意义；

▲链球菌：

白色/灰白色、凸起小菌落，β溶血为溶血型链球菌，其中化脓性链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌菌落相对较大（多在1.0mm左右），而咽峡炎链球菌，马链球菌等菌落则较小（多在0.5mm左右）；灰白隆起中心扁平或凹陷，1.0-1.5mm大小的宽大а溶血为肺炎链球菌，该菌是最常见的肺部感染病原菌，在社区获得性感染中有重要的地位；细如针尖，白色凸起а溶血的为草绿色链球菌，自然咯痰标本中的草绿色链球菌一般不具有临床意义；

▲孪生球菌：

白色小菌落，β/γ溶血，菌落黏着不易刮取，但在盐水中易乳化，较湿润，在质量较好的新鲜血琼脂或哥伦比亚血琼脂上易生长，在含血MHA上不生长。

从正常咳取的痰液中分离到一般不具有临床意义，但在套管保护下采集的下呼吸道标本中分离出来具有临床价值。

▲气球菌：

白色凸起小菌落，а溶血，1.0mm左右，有特殊气味（酷似乙醛），菌落较草链大。

镜下为短链或葡萄球菌样排列，菌体大而着色不均。

从痰液中分离到不具有临床意义。

▲肠球菌：

灰白，低凸，2.0mm左右之а溶血菌落，较湿润，

▲口腔球菌：

白色凸起较大菌落，不溶血，黏着，接种针挑之则整个菌落挑起，琼脂上不留痕迹。

该菌偶尔可引起肺部的严重感染，一般好发生于COPD病人和肺气肿病人；

G+b—依靠溶血特征，菌落形态、菌落大小、菌体形态区分：

▲棒状杆菌：

白色1.0-1.5mm左右大小，较干燥，不溶血/狭窄β溶血的为白喉或一般棒状杆菌；小而湿润，灰白/无色，半透明的为J-K棒状杆菌；灰白细小，β溶血的可能为假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌；除白喉杆菌外，假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌是罕见的咽喉部病源菌，棒状杆菌一般不导致肺部感染；

▲芽孢杆菌：

灰白大菌落，表面粗糙如毛玻璃状、蜡状、边缘不规则，不同种类菌落形态差异巨大，宽大β溶血。

延长培养时间，菌落从湿润变得干燥，边缘呈放射状扩散，形成叶状、掌状、雪花状、齿轮状等，常常为痰培养的污染菌；

1.5.1.2、BA生长、Choc生长、MecK不生长：

Gram染色：

分G+co及G+b

G+co：

▲平面球菌、藻球菌：

血琼脂上为а溶血，0.5-1.0mm大小，在Choc上呈现金属色泽，无临床意义。

G+b：

▲乳杆菌：

细小，白色凸起а溶血菌落，有特殊的酸臭味，口腔正常菌群，无临床意义；

G-菌：

根据形态分为G-b（革兰阴性杆菌）、G-co（革兰阴性球菌）、以及根据对特殊营养的需求对苛养性G-b进一步分类，常见的如嗜血杆菌，军团菌等：

1.5.1.3、BA生长、Choc生长、MecK生长：

——Gram染色：

G-b—氧化酶、分科琼脂颜色

▲肠杆菌：

氧化酶（-），MecK上红色、淡红色或无色湿润大菌落；

▲弧菌：

氧化酶（+），MecK上红色或无色扁平大菌落；

▲非发酵菌：

氧化酶（+/-），MecK上无色或淡红色透明小菌落

1.5.1.4、BA生长、Choc生长、MecK不生长：

Gram染色：

分G-b及G-co

G-b：

苛养性G-b：

▲HACEK族：

嗜沫/副嗜沫嗜血杆菌、艾肯氏菌、碳酸噬胞菌、放线杆菌、金氏菌；

▲心杆菌：

人类心杆菌；

▲鞘氨醇单胞菌：

少动鞘氨醇单胞菌；

▲莫拉菌：

缺陷莫拉菌、非液化莫拉菌、奥斯陆莫拉菌；

▲寡源菌：

所有种；

▲黄杆菌及相关种：

包括鞘氨醇杆菌、产吲哚金色杆菌、黏液威克菌、动物伤口伯杰氏菌、短稳杆菌等；

▲甲基杆菌：

嗜中温甲基杆菌；

▲巴斯德菌：

除产气和溶血巴斯德菌外的所有种；

▲鲍特氏菌：

百日咳/副百日咳鲍特氏菌；

▲弗朗西丝菌：

所有种。

G-co：

氧化酶（+）、触酶（+）

▲奈瑟菌：

白色/黄色中等大小菌落，该类细菌为口腔常见正常菌群，该菌在痰培养中含量的高低反应了标本采集状态的合格程度，大量出现提示培养结果将是不可信的；

▲卡他莫拉菌：

白色小菌落（24h内），菌落有脆性，用接种环推之可移，是儿科和老年病人常见的下呼吸道病原菌；

1.5.1.5、BA不生长/细小、Choc生长、MecK不生长：

Gram染色：

G-b、菌体细小或呈扭曲之长丝状

▲嗜血杆菌：

灰色/无色，半透明，1.5-2.0mm的多为流感嗜血杆菌[17]，该菌为最常见的肺部感染病原菌，可发生于各个年龄层次，其高携带与COPD发病有较强的相关性；灰色略黄，不透明，1.0-1.5mm的多为副流感嗜血杆菌。

一般副流感嗜血杆菌不导致肺部感染，大量出现提示培养结果将是不可信的；

1.5.1.6、BA不生长、Choc不生长、MecK不生长、BCYE-а生长/或在含有L-半胱氨酸、铁离子、复合抗生素选择剂的强化血琼脂上生长—Gram染色：

G-b、菌体细、长丝状

▲提示可能为军团菌：

该菌在BCYE-а上48~72h为中等大小扁平菌落，灰白色，较粘着；该菌具有较强的生物危险性，其中嗜肺军团菌可传染；

1.5.1.7、真菌及奴卡菌：

BA、Choc、MecK、CHROMagar均生长—Gram染色形态、生长速度

真菌：

▲酵母样真菌，菌落中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色；大多为口腔咽喉正常菌群，一般不导致肺部感染，但免疫缺陷、糖皮质激素、长期大剂量的抗生素使用可增加该类微生物机会感染的可能性；

▲烟曲霉菌，丝状真菌菌落，35℃培养24~48h时菌落为白色泛绿，72h后菌落迅速转为褐色，中心粉末状背面为黄褐色如烟熏状，该菌为肺部最常见的条件致病菌，感染时患者症状重，预后非常差；

▲奴卡菌：

小菌落，生长慢，菌落皱褶，呈颗粒状，有时产生褐色、黄色、黑色等色素，该类细菌可导致肺脓肿，标本脓性，有硫磺颗粒者应高度怀疑该菌；

肺炎支原体：

固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落，在Hayflick双相培养基的液体中使培养基变黄，该类微生物是最常见的非典型性肺炎的病原体，在社区获得性感染中有着很高的比例。

1.5.2、大便：

①沙门菌：

SS:

中心黑色之乳糖阴性菌落（亚利桑拉群可以为阳性）,SMC:

红色菌落

②志贺菌：

SS、SMC均为无色透明之乳糖阴性菌落

③O-157大肠埃希菌：

SS：

为红色乳糖阳性菌落，SMC为无色透明之山梨醇阴性菌落

▲其他致病性大肠埃希菌多数为：

SS、SMC均为红色

▲其中A-D大肠埃希菌在SS上可能为无色菌落

④霍乱弧菌：

SS：

无色菌落，TCBS：

黄色大菌落

▲其他弧菌：

SS、TCBS均为无色或淡绿色菌落

⑤小肠结肠耶尔森菌：

SS为无色小菌落，SMC为红色牛眼状小菌落

⑥气单胞菌：

所有气单胞菌转种血琼脂均呈现β溶血

▲嗜水气单胞菌，SS红色菌落，TCBS为黄色，SMC无色之大菌落

▲其他气单胞菌：

SS无色菌落，TCBS为黄色，SMC无色之大菌落

⑦邻单胞菌：

SS、TCBS及SMC均为无色菌落

1.5.3、尿液:

①肠杆菌、非发酵菌、弧菌，葡萄球菌、肠球菌、参照痰液读碟方法；

②J-K棒状杆菌：

小而湿润，灰白/无色，半透明，生长慢；

③真菌：

中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色

④支原体：

固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落

▲解脲支原体：

含尿素和酚红的支原体液体培养基中使培养基变红；

▲人型支原体:

含精氨酸和酚红的支原体液体培养基中使培养基变红；

各种生殖道标本：

①肠杆菌、非发酵菌，葡萄球菌、肠球菌、无乳链球菌参照痰液读碟方法；

②真菌：

中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色；

③支原体：

固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落

▲解脲支原体：

含尿素和酚红的支原体液体培养基中使培养基变红；

人型支原体:

含精氨酸和酚红的支原体液体培养基中使培养基变红；

④淋病奈瑟菌：

在GC培养基上为灰/灰白半透明小菌落，非常湿润；在强化血琼脂上为灰白凸起，不溶血，有银色光泽1.0-2.0大小的菌落；

⑤阴道加德纳尔菌：

GC培养基上不生长，强化血琼脂上无色/灰白，细小，狭窄β溶血的菌落，生长缓慢，多数需48h才能形成明显小菌落。

1.5.4、脑脊液：

①肠杆菌、非发酵菌、弧菌，葡萄球菌、肠球菌、链球菌、G+b、卡他莫拉菌、嗜血杆菌、奴卡菌等参照痰液读碟方法；

②真菌：

中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色；

▲新型隐球菌：

BA上为白色，1.0mm左右大小圆形凸起菌落，不溶血，CHROMagar上不显色。

③肺炎支原体：

固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落，在Hayflick双相培养基的液体中使培养基变黄。

④脑膜炎奈瑟菌：

BA上为无色透明，凸起，1.0-1.5mm左右大小的露滴状菌落，Choc（营养强化，含奈瑟菌选择剂）上为灰色有银色光泽的，半透明，凸起，1.5mm左右大小的湿润菌落；

血、骨髓标本：

先经过增菌后转种，肠杆菌、非发酵菌、弧菌，葡萄球菌、肠球菌、链球菌、G+b、卡他莫拉菌、嗜血杆菌等参照痰液读碟方法；

②真菌：

中等大小，生长快，多数可在CHROMagar上显色；同时应注意双相真菌和深部丝状真菌，如马尔尼菲青霉菌、荚膜组织胞浆菌、球孢子菌，烟曲霉菌、毛霉菌、镰刀菌、暗色孢科真菌

▲新型隐球菌：

BA上为白色，1.0mm左右大小圆形凸起菌落，不溶血，CHROMagar上不显色。

③肺炎支原体：

固体培养基上，低倍镜或解剖显微镜下为典型“荷包蛋”样菌落，在Hayflick双相培养基的液体中使培养基变黄。

④脑膜炎奈瑟菌：

BA上为无色透明，凸起，1.0-1.5mm左右大小的露滴状菌落，Choc（营养强化，含奈瑟菌选择剂）上为灰色有银色光泽的，半透明，凸起，1.5mm左右大小的湿润菌落

⑤红斑丹毒丝菌：

可形成两种菌落，光滑型细小、圆形突起、有光泽、易乳化；粗糙型菌落大，表面颗粒状、边缘如卷发样，微а溶血。

1.5.5、其他标本：

参照以上标本的读碟方法。

1.6、鉴定（在读碟的基础上进行）

①G+co：

▲触酶阳性、易乳化——葡萄球菌：

鸟氨酸、尿素、ONPG、硝还采用酶法4-6h观察记录结果；试管法凝固酶，分别于1h、4h、24h观察一次；蕈糖、甘露醇、甘露糖、麦芽糖、蔗糖、木糖；

▲触酶阳性、不易乳化——微球菌：

葡OF、七叶苷、精氨酸、硝还、枸橼酸盐、动力、7.5%高盐肉汤；

▲β溶血性链球菌——触酶阴性——6.5%高盐肉汤、CAMP试验、杆菌肽、胆七、蕈糖、乳糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、七叶苷、菊糖（所有糖类均需加入血清）；

▲肺炎链球菌——Optochin——如果R，需加6.5%高盐肉汤、胆七、乳糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、菊糖（所有糖类均需加入血清），必要时作胆汁溶菌试验和乳胶凝集试验；

▲D群链球菌及肠球菌——触酶阴性——6.5%高盐肉汤、胆七、精氨酸双水解、棉子糖、甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、蔗糖、动力；

▲口腔球菌——触酶阴性/弱阳——葡OF；

▲草绿色链球菌—Optochin（R）—6.5%高盐肉汤、胆七、棉子糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、七叶苷、尿素；

G+b：

—

—触酶（+）—棒状杆菌：

硝还、尿素、七叶苷、明胶、动力、葡、麦、蔗、甘醇、木

—触酶（+）—芽孢杆菌：

动力、卵磷脂水解、甘露醇、木糖、青霉素酶

—触酶（+）—李斯特菌：

20℃动力、CAMP、甘露醇、木糖、鼠李糖、七叶苷

—触酶（—）——红斑丹毒丝菌：

H2S、精氨酸水解、七叶苷、动力、蕈糖、阿拉伯糖

②肠杆菌科：

——氧化酶（—）、KIA——GYZ15e、API20E等鉴定系统；——沙门菌、志贺菌、致病性大肠埃希菌需作血清学试验；

③弧菌科：

—氧化酶（+）、KIA、GYZ9v、API20E、或按操作规程上的经典双歧图表法鉴定；

④非发酵菌：

—氧化酶（±）、KIA、GYZ11n、15n、API20N、或按操作规程上的经典双歧图表法鉴定；

⑤G-co:

——氧化酶（+）、触酶（+）、DNase、硝还、酶法葡、麦、蔗、甘醇、木糖；

⑥嗜血杆菌：

—触酶、Ⅴ、Ⅹ因子需求、酶法鸟氨酸、尿素、靛基质、ONPG、硝还、葡、蔗、乳、甘糖、木糖；

⑦军团菌：

—氧化酶（±）、触酶（+）、硝还（—）、尿素（—）、糖类（—）、动力（+）/橡树岭军团菌（—）—血清学试验定种；

⑧念珠菌：

CHROMagar显色培养基——不显色的——玉米-土温80、TH-15c、API 20c、YBC卡等鉴定系统；

⑨其他罕见细菌按经典书籍提供的方法鉴定。

1.7、抗菌药物敏感试验：

按CLSI2008版方案有关规定执行，其中链球菌采用5%BloodMHA，嗜血杆菌用HTM，淋病奈瑟菌用GC培养基（不加选择剂），其他非苛养菌用MHA；

所选用药物根据CLSI选药规则结合我院工作实践发展了以下几种组合：

▲肠杆菌科/弧菌科：

AM、（AMC）、GM、CIP、SXT、TE、AN、CZ、CTX/CA、CTX、CRO、FOX、FEP、AZT、（CXM）、（CAZ）、（IPM）、FT（尿路用）；

▲非发酵菌（含盖假单胞菌、不动杆菌、窄食单胞菌、伯克菌在内）：

PIP、GM、TM、AN、CIP、SXT（假单胞菌不选）、TE（假单胞菌不选）、CFP/SB（即SCF）、CTX、CAZ、IPM、AZT、FEP、（PIP/TZ）、FOX（假单胞菌不选）、LVF（窄食单胞菌、伯克菌选用）；

▲葡萄球菌：

OX、FOX、CM、VA、E、TE、OFL、SXT、（RA）、FT（尿路用）；

▲肠球菌：

GM120、AM/P、VA、OFL/LEV、RA、TE、E、FT（尿路用）；

▲肺链：

OX、CM、VA、E、TE、OFL、SXT、RA、C；

▲β-链/草链：

P（草链用）、FEP、CRO、CM、VA、E、TE、OFL

▲淋病奈瑟菌：

P、CIP、TE、SPT、CRO、CXM、AZI；

▲脑膜炎奈瑟菌：

不作常规测试：

P、CRO、MEM、TE/MIN，常规测试：

CIP、SXT、C、RA；

▲嗜血杆菌：

AM、CIP、SXT、TE、AMX/CA、CXM、CRO、AZI。

抑菌环测量后，根据相应breakpoint标准解释，得出S、I、R定性结果；

肺链除OX外，所有β-内酰胺类抗生素均须采用稀释法得出确切得MIC值，才能由此得出S、I、R结果，K-B法不可用。

二、各科病原菌接种微量生化管及所帖K-B药敏纸片

1、肠杆菌科：

GYZ15：

硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐；靛基质、甲基红、枸橼酸；尿素、动力、产气；赖氨酸、鸟氨酸、棉子糖；山梨醇、侧金盏花醇、木糖；可视情况补种DNA酶，丙二酸盐

2、弧菌科：

GYZ9：

1%NaCl赖氨酸精氨酸鸟氨酸、甘露醇、水杨素、6%高盐、枸缘酸

3、肠杆菌科/弧菌科药敏：

氨苄西林（AM）、庆大霉素（GM）、复方新诺明（SXT）；四环素（TE）、环丙沙星（CIP）、阿米卡星（AN）、头孢唑啉（CZ）、头孢曲松（CRO）、头孢噻肟（CTX）、头孢他定（CAZ）、头孢西丁（FOX）、头孢吡肟（FEP）、氨曲南（AZM）、亚胺培南（IPM,）、头孢噻肟/克拉维酸（CTX/CA）、头孢他啶/克拉维酸（CAZ/CA）

（若病原菌来自小便或肠道则加贴呋喃妥因）

4、非发酵菌

GYZ11:

FO（厌、需）、氧化酶、枸缘酸、麦芽糖（非）、精氨酸双水解、甘露醇（非）、木糖（非）、硝酸盐还原实验、DNA酶、乙酰胺

GYZ15:

精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、枸缘酸、硝酸盐还原实验、尿素、七叶苷、靛基质、β-半乳糖苷酶（ONPG）、蔗糖（非）、麦芽糖（非）、木糖（非）、硫化氢、葡萄糖（非）、氧化酶

非发酵菌药敏：

哌拉西林（PIP）、庆大霉素（GM）、妥布霉素（TM）、阿米卡星（AN）、环丙沙星（CIP）、氨曲南（ATM），四环素（TE）、复方新诺明（SXT）、头孢西丁（FOX）、舒普深（SCF）、头孢噻肟（CTX）、头孢他定（CAZ）、左氧氟沙星（LVF,嗜麦芽和窄食假单胞菌贴）、头孢吡肟（FEP）、亚胺培南（IPM）

4、革兰氏阴性双球菌：

OE（+）、H2O2（+）、硝酸盐还原实验、DNA酶、葡萄糖（非）、木糖（非）、麦芽糖（非）、甘露醇（非）、蔗糖（非）

5、革兰氏阴性双球菌（主要用于淋球菌）药敏：

四环素（TE）、环丙沙星（CIP）、青霉素G（PG），壮观霉素（SPT）、阿奇霉素（AZI）、头孢曲松（CRO）、头孢呋辛（CXM）；（可用阿奇霉素经验性治疗）

6、嗜血杆菌科：

H2O2（+）、OE（+）、V、X因子需求试验（卫星试验）、酶法硝酸盐还原实验、鸟氨酸、尿素、靛基质、β-半