细胞培养对无血清培养基的适应.doc

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细胞培养对无血清培养基的适应

有两种方法可以使细胞适应无血清培养基（SFM）:

1．直接适应法式—将细胞直接从添加血清的培养基转换到无血

清培养基中。

2．连续适应或循序隔绝法—分几步将细胞从添加血清的培养基

转换到无血清培养基中。

与直接适应法相比较，连续适应法对于

细胞更温和些。

为了使细胞适应无血清培养基，关键是细胞培养应满足以下条

件：

1．处于对数生长中期

2．存活率大于90%

3．在适应期间，以较高的初始细胞接种量进行接种

　下面列出了常规适应步骤。

初始细胞接种量、细胞产量和培养

　周期是连续优化的良好开端。

直接适应

有些类型的细胞可以直接从含有血清培养基适应无血清培养基。

对于直接适应，细胞接种量应在2.5x105-3.5x105细胞/ml范围

内，当细胞密度达到1x106-3x106细胞/ml时，传代培养细胞。

培养4至7天后，当细胞密度达到2x106-4x106细胞/ml时，细

胞已完全适应了无血清培养基。

当细胞密度达到1x106-3x106

细胞/ml且存活率为90%时，应当每隔3到5天再次将适应了无血

清培养基的贮存细胞在无血清培养基中进行传代培养。

连续适应

我们推荐采用连续适应法使细胞适应无血清培养基（SFM）,典型的

转换步骤如下:

第一代

75%含血清培养基和

25%无血清培养基

第二代

50%含血清培养基和

50%无血清培养基

第三代

25%含血清培养基和

75%无血清培养基

第四代

100%无血清培养基

由于从75%无血清培养基到100%无血清培养基的变化对细胞的

压力过大，因此可能需要将细胞在含有10%含血清培养基与90%

无血清培养基的混合培养基中传代培养2-3次。

可以认为大多数

细胞系在100%无血清培养基中传代培养3次后即可完全适应。

在

将细胞转换到100%无血清培养基中之前，偶尔也会遇到问题，

无法通过某一特定步骤。

如果出现这种情况，可在上一混合比例

的含血清培养基中将细胞传代培养2-3次。

无血清培养基的使用注意事项

总体而言,无血清基培养中的细胞对于极端pH值、温度、渗透

度、机械压力和酶处理更为敏感。

抗生素

在无血清培养基中最好不要使用抗生素。

如需使用，建议其用量

比使用含血清培养基时减少十分之一到五分之一。

这是因为血清

蛋白倾向于结合一定量的抗生素；如果没有这些血清蛋白，原来

使用的抗生素水平将对某些细胞产生毒性。

更高的细胞密度

在适应前，细胞必须处于对数生长中期，而且存活率大于90%。

可能必须采用连续适应的方法。

在无血清适应期间，每次传代时

接种密度要高于正常传代，这有助于适应过程。

由于部分细胞无

法在新的培养环境中存活，因此接入更多的细胞可以提高以后传

代存活的细胞数量。

细胞聚集

在适应无血清培养基时，细胞经常会聚成团。

建议您在进行细胞

传代时将细胞团轻轻弄碎，使之散开。

细胞形态

在适应无血清培养基的过程中以及适应无血清培养基以后，一般

不会发生细微的细胞形态变化。

只要细胞倍增时间和存活率保持

良好，细微的形态变化是无关紧要的。

条件培养基适应

适应无血清培养的另一种方法是使用“条件培养基”。

这种培养

基是指细胞已经在其中生长了完整一代。

如果采用这种方法，可

以按照以下步骤进行适应

第一代

100%含血清培养基

第二代

50%来自第一代的培养基和

50%无血清培养基

第三代

50%来自第二代的培养基和

50%无血清培养基

第四代

50%来自第三代的培养基和

50%无血清培养基

第五代

100%无血清培养基

无论采用哪种适应方法，都强烈建议您始终采取下列预防措施：

?

适应前用含血清培养基冻存一份细胞。

?

每进行下一步适应之前，都要在上一步的条件中再培养一份

细胞作为备份，以免进行下一步适应时细胞无法存活。