金银花精提取物与粗提取物注射液的主动全身过敏实验研究.docx

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金银花精提取物与粗提取物注射液的主动全身过敏实验研究

金银花精提取物与粗提取物注射液的主动全身过敏实验研究

冯文宇刘明华肖顺汉何兵

【摘要】目的对不同提取纯化工艺制备的金银花提取物注射液进行免疫毒性实验，以了解含金银花的注射剂致过敏反映的缘故。

方式按《中药、天然药物免疫毒性研究的技术指导原那么》的要求，做金银花精提取物与粗提取物注射液的主动全身过敏实验。

豚鼠腹腔注射致敏量以绿原酸计别离为，mg·kg-1，静脉注射激发量是致敏量的2倍，激发后详细观看记录每只动物的反映情形。

结果金银花精提取物注射液高、低剂量组动物均未显现过敏反映，而金银花粗提取物注射液高剂量组显现类过敏强阳性反映，低剂量组显现阳性反映。

结论金银花粗提取物注射液显现类过敏反映的缘故，与注射液中含有蛋白质、树脂、鞣质等杂质有关。

【关键词】金银花精提取物；金银花粗提取物；注射剂；绿原酸；过敏实验

　　Abstract:

ObjectiveTostudytheimmunetoxicityofHoneysuckleextractinjectionpreparedbydifferentextractionandpurificationprocesses，inordertoanalyzethecausesofallergicreactioncausedbyHoneysuckleinjection.MethodsAccordingtotherequirementof"Chinesetraditionalmedicine，naturalmedicineimmunitytoxicitystudyruller"，westudiedactivesystematicanaphylaxisofHoneysucklerefinedextractandcrudeextractinjection.Sensitizingdose（ip）countedaschlorogenicacidwas，mg·kg-1,excitationdose（iv）was2timesofsensitizingdose.Thereactionofeachanimalwasobservedafterexcitation.ResultsTheresultshowedthatnoallergicreactionoccurredinthehighandlowdosegroupofHoneysucklerefinedextractinjection，howererstrongpositivereactionouuredinhighdoseHoaeysucklecrudeinjectiongroupsandpositivereactioninlowdosecausesofallergicreactionoccurredinHoneysucklecrudeextractinjectionareassociatedwithimpurityintheinjectionsuchasprotein，resin，tannin.

　　Keywords:

Honeysucklerefinedextract；Honeysucklecrudeextract；Injection；Chlorogenicacid；Allergicexperiment

　　金银花具有清热解毒、抗菌、抗病毒功效。

以金银花为主研制的双黄连、清开灵等中药注射剂，被临床普遍用于上呼吸道感染、肺炎等高热疾病。

由于疗效靠得住，用量日增，不良反映也就加倍突出。

在人们寻觅发生不良反映缘故的时候，有人引用国外文献说金银花所含绿原酸与异绿原酸，既是抗菌抗病毒的要紧有效成份，又是致敏原，以为中药注射剂变态反映严峻与以绿原酸为代表的可疑致敏成份高度相关［1］；也有学者以为，中药注射剂发生不良反映的缘故是多方面的，如超量利用、浓度太高、滴速过快等［2,3］。

但更多的人以为，中药注射剂成份复杂，引发不良反映的要紧缘故是制剂质量问题，即目前有些产品质量操纵与提取工艺不够完善，对非药用成份没能完全去除，致使有大量的杂质混在制剂中［4～7］。

为此，咱们将金银花精提取物与粗提取物注射液做对照过敏实验，观看供试品给予动物后的主动全身过敏反映情形，为中药注射剂中含有金银花的原药材挑选最正确的提取纯化工艺。

　　1材料

　　供试品及其制备方式

　　金银花粗提取物注射液批号070327，自制。

制备方式：

金银花2kg（产地：

四川古蔺县，经鉴定为忍冬科植物灰毡毛忍冬LoniceramacranthoidesHand．-Mazz．的干燥花蕾）。

加水2000ml,煎煮3次，1h/次。

归并滤液，浓缩至2000ml，稍冷，加乙醇使含醇量达75﹪，静置24h，滤过。

醇滤液均分2份，留1份供制备金银花精提取物用，另1份加热挥醇后，加水至1000ml，放冷，调pH，冷藏24h，滤过，高效液相测绿原酸含量，按每毫升含绿原酸3mg投料，加注射用葡萄糖50g，添水配成1000ml，搅匀，4号滤球自然滤过，分装于2ml安瓿中，密封，100℃灭菌30min，检查澄明度合格后备用。

　　金银花精提取物注射液批号070330，自制。

制备方式：

取上述留样金银花醇沉液，加热挥尽乙醇，加5倍量水及鸡蛋清1个，充分搅拌后煮沸，再加%活性炭，微沸10min，趁热滤过，冷藏24h，滤过（除鞣、脱色、去树脂）。

浓缩至3∶1（药材∶水）清膏，放冷，用6mol·L-1盐酸调pH为，以4倍量醋酸乙酯分4次萃取，分取醋酸乙酯液，用适量水洗涤1～2次（勿使pH过），以5﹪氢氧化钠液调pH～，分取水层，加热挥尽醋酸乙酯，加水至1000ml，高效液相测绿原酸含量，一样按每毫升含绿原酸3mg投料，加注射用葡萄糖配制成金银花精提取物注射液。

　　对照品

　　阳性对照品牛血清白蛋白，规格5g/瓶,批号880802。

中国科学院生物物理研究所中生公司生产。

　　阴性对照品5﹪葡萄糖注射液，批号060923。

四川美大康佳乐药业生产。

　　动物Hartely豚鼠，一般级，雌雄兼用。

购自重庆医科大学实验动物中心。

合格证号：

SCXK（渝），重庆市实验动物治理委员会。

　　环境动物实验在泸州医学院药理毒理实验室进行，温度：

22～25℃。

　　2方式

　　致敏动物检疫后，取体重250～350g的健康豚鼠36只，雌雄兼用，按体重随机均分为6组：

金银花精提取物高、低剂量组，金银花粗提取物注射液高、低剂量组，阴性、阳性对照组。

致敏量实验组以绿原酸计别离为，mg·kg-1，阳性对照组给牛血清白蛋白mg/只，阴性对照组给5%葡萄糖注射液ml·kg-1，均为腹腔注射（ip），隔日1次，共3次。

　　激发在末次致敏给药后第11天，别离静脉注射（iv）上述供试品的两倍量进行激发。

静脉注射激发后立刻至30min，按过敏反映病症表［8］详细观看记录每只动物的反映，病症的显现及消失时刻，观看3h。

　　3结果

　　阴性对照组用5﹪葡萄糖注射液以5ml·kg-1静脉注射激发后，有两只豚鼠5～8min显现不安宁，其余豚鼠未见任何不适反映。

　　阳性对照组用牛血清白蛋白以5mg/只静脉注射激发后，15s～5min豚鼠要紧表现为：

不安宁、排尿、排粪、颤栗、搔鼻、步态不稳、呼吸急促、呼吸困难、喘息、跳跃、痉挛、横转，40s有1只动物死亡，还有两只别离于2，3h死亡；未死动物于3h后慢慢恢复正常。

　　金银花精提取物注射液高剂量组以15mg·kg-1静脉注射激发后，2～5min有1只豚鼠显现排尿，另一只排粪，其余豚鼠未见任何不适反映。

　　金银花精提取物注射液低剂量组以3mg·kg-1静脉注射激发后，6只豚鼠未见任何不适反映。

　　金银花粗提取物注射液高剂量组以15mg·kg-1静脉注射激发后，5s～3min有4只豚鼠要紧表现为呼吸困难、步态不稳、潮式呼吸，在40s～5min后死亡。

有两只豚鼠30s后显现不安宁、呼吸急促及步态不稳，10～15min后病症慢慢消失，恢复正常。

　　金银花粗提取物注射液低剂量组以3mg·kg-1静脉注射激发后，有两只豚鼠2～5min显现排尿、排粪，有5只豚鼠显现不安宁、颤栗、搔鼻及呼吸急促，上述病症25min后慢慢消失，恢复正常。

　　结果评判计算过敏反映发生率，依照过敏反映程度、发生率及反映级数，进行综合判定［8～10］，如变态反映级数在2级以上，那么判定为阳性反映。

评判结果见表1。

　　表1金银花精提取物与粗提取物注射液豚鼠主动全身过敏实验结果（略）

　　补充实验取健康未致敏豚鼠6只，别离进行以下实验：

　　对2只健康未致敏豚鼠，静脉注射金银花精提取物注射液15mg·kg-1（激发剂量），未显现任何过敏病症。

　　对2只健康未致敏豚鼠，静脉注射金银花粗提取物注射液15mg·kg-1（激发剂量），注射后10s～min豚鼠要紧病症为：

不安宁、步态不稳、呼吸急促、痉挛、排尿和排粪，20～30min恢复正常。

　　对2只健康未致敏豚鼠，静脉注射金银花粗提取物注射液3mg·kg-1（激发剂量），注射后1～2min豚鼠显现不安宁、颤栗，10～15min慢慢恢复正常。

补充实验评判结果见表2。

　　表2金银花提取物注射液对健康豚鼠的阻碍（略）

　　*以绿原酸计

　　4讨论

　　豚鼠静脉注射金银花精提取物注射液以绿原酸计mg·kg-1，已是临床成人最大剂量，激发量15mg·kg-1，是成人最大剂量的10倍，豚鼠未显现过敏反映。

虽有1只排尿，1只排粪，但过敏反映级数只有，远未达到反映级数的2级［9，10］，且动物在排尿、排粪时没有失禁状态，属正常生理行为。

因此，绿原酸、异绿原酸是致敏原的说法，是值得商议和进一步探讨的。

　　水煮醇沉制备的金银花粗提取物注射液，由于未经除鞣、脱色、水沉及酸碱转换有机溶剂萃取纯化工艺，以除去树脂、蛋白、粘液质等杂质，尽管绿原酸用量与精提取物注射液相同，而大小剂量组均显现阳性过敏反映。

通过用健康未致敏豚鼠静脉注射金银花粗提取物注射液进行观看，一样显现强阳性反映，因此以为金银花粗提取物注射液引发的过敏病症属类过敏反映，不能判定为主动全身过敏反映。

类过敏反映的特点是无免疫系统参与，即便第一次用药也可诱发过敏反映，系药物直接刺激肥大细胞和嗜碱性粒细胞而释放大量组织胺，由此产生过敏反映病症，而不是抗原抗体反映。

这和文献报导中药注射剂引发不良反映，﹪均在第一次用药显现是相一致的［5］。

引发类过敏反映的缘故，与金银花粗提取物中含有鞣质、蛋白质、树脂等杂质有关。

实验说明，中药注射剂的提取纯化工艺必需改良，制剂质量标准必需提高。

另外，临床利历时，也要严格依照各品种注射剂的说明书进行配制利用，不能随意增大剂量、改变稀释溶剂或任意与西药配伍合用。

【参考文献】

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　　［3］陈晓丹.双黄连注射液不良反映的文献资料分析［J］.药品平价，2006，3

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　　［6］邹金生.中草药过敏反映综述［J］.有效中西医结合临床，2006，6（4）：

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　　［8］国家食物药品监督治理局.中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光过敏反映）研究的技术指导原那么（编号：

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人民卫生出版社，2005：

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　　［10］杨超燕，唐春萍，陈艳芬.注射用头孢西丁钠平安性实验研究［J］.广东药学院学报，2006，22（5）：

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