检验科资料资料Word文件下载.docx

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A.4.2.3检测方法

将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0mL待检样品按种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化的45℃～48℃的营养琼脂15ml～18ml,边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±

1℃温箱培养48h，计数菌落数。

细菌菌落总数计算方法见式（A.1）：

细菌菌落总数（cfu/cm2）=平板上菌落数x稀释倍数采样面积（cm2）…（A.1）

A.4.2.4结果判定

皮肤消毒效果的判定标准遵循WS/T313中外科手消毒卫生标准。

A.4.2.5注意事项

采样皮肤表面不足5cmx5cm，可用相应面积的规格板采样。

A.5物体表面的消毒效果监测

A.5.1采样时间

在消毒处理后或怀疑与医院感染暴发有关时进行采样。

A.5.2采样方法

用5cmx5cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，被采表面＜100cm2，取全部表面；

被采面积≥100cm2，取100cm2。

剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10ml无菌检验用洗脱液的试管中送检。

门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体表面采样。

采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。

A.5.3检测方法

充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15ml～20ml，36℃±

1℃恒温箱培养48h,计数菌落数。

怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。

A.5.4结果计算

A.5.4.1规则物体表面

物体表面菌落总数计算方法见式（A.2）：

物体表面菌落总数（cfu/cm2）=平均每皿菌落数X洗脱液稀释倍数采样面积（cm2）……（A.2）

A.5.4.2小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。

A.5.5结果判定

A.5.5.1洁净手术部、其他洁净场所，非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等；

物体表面细菌菌落总数≤5cfu/cm2。

A.5.5.2儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房等；

物体表面细菌菌落总数≤10cfu/cm2。

A.6空气的消毒效果监测

A.6.1采样时间

采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；

未采用洁净技术净化空气的房间在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样；

或怀疑与医院感染暴发有关时采样。

A.6.2监测方法

A.6.2.1洁净手术部（室）及其他洁净用房可选择沉降法或浮游菌法，参照GB50333要求进行监测。

浮游菌法可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。

监测时将采样器置于室内中央0.8m～1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。

房间面积＞10m2者，每增加10m2增设一个采样点。

A.6.2.2未采用洁净技术净化空气的房间采用沉降法：

室内面积≤30m2，设内、中、外对角线三点，内、外点应距墙壁1m处；

室内面积＞30m2，设四角及中央五点，四角的布点位置应距墙壁1m处。

将普通营养琼脂平皿（Φ90mm）放置各采样点，采样高度为距地面0.8m～1.5m；

采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间后盖上平皿盖及时送检。

A.6.2.3将送检平皿置36℃±

若怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。

A.6.3结果计算

A.6.3.1沉降法按平均每皿的菌落数报告：

cfu/（皿．暴露时间）

A.6.3.2浮游菌法计算公式见式（A.3）：

空气中菌落总数（cfu/m3）=采样器各平皿菌落数之和（cfu）采样速率（L/min）x采样时间（min）×

1000……（A.3）

A．６．４　结果判定

A．６．４．１洁净手术部（室）和其他洁净场所，空气中的细菌菌落总数要求应遵循ＧＢ５０３3３．

A．６．４．２非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数≤４cfu／（１５ｍｉｎ·

直径９ｃｍ平皿）。

A．６．４．３儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数≤4cfu/（5min·

直径9cm平皿）。

A．６．5注意事项

采样前，关闭门、窗，在无人走动的情况下，静止10min后采样。

A．7消毒液的监测

A．7．1常用消毒液有效成分含量测定

库存消毒剂的有效成分含量依照产品企业标准进行检测；

使用中消毒液的有效浓度测定可用上述方法，也可使用经国家卫生行政部门批准的消毒剂浓度纸（卡）进行监测。

A．7．2使用中消毒液染菌量测定

A．7．2．1.1用无菌吸管按无菌操作方法吸取1.0mL被检消毒液，加入9mL中和剂中混匀。

醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含0.1%硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季铵盐类消毒剂用含0.3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醛类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂，含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温80至3%；

也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定试验确定的中和剂。

A．7．2.1.2用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后混合液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL,36℃±

1℃恒温箱培养72h,计数菌落数；

怀疑与医院感染爆发有关时，进行目标微生物的检测。

消毒液染菌量计算见式（A.4）：

消毒液染菌量（cfu/ml）=平均每皿菌落数×

10×

稀释倍数………（A.4）

A．7．2．2结果判断

使用中灭菌用消毒液：

无菌生长；

使用中皮肤黏膜消毒液染菌量：

≤10cfu/ml，其他使用中消毒液染菌量≤100cfu/ml。

A．7．3注意事项

采样后4h内检测。

A8清洁用品的消毒效果监测

A．8．1采样时间消毒后、使用前进行采样。

A．8．2采样方法布巾、地巾等物品可用无菌的方法剪取1cm×

3cm，直接投入5ml含相应中和剂的无菌生理盐水中，及时送检。

A．8．3检测方法将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，取采样液检测致病菌。

A．8．4结果判定未检出致病菌为消毒合格。

A．9致病菌的检测

当怀疑被某致病菌污染时，或怀疑医院感染与某致病菌有关时，致病菌的检测依据污染情况进行相应指标菌的检测。

检测方法参考相关标准。

附录B

（资料性附录）

消毒试验用试剂和培养基配方

B．1磷酸盐缓冲液（PBS.0.03mol/L.pH7.2）

无水磷酸氢二钠2.83g

磷酸二氢钾1.36g

蒸馏水加至1000mL

将各成分加入到1000mL蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20min备用。

B．2无菌检验用洗脱液

吐温―801g

蛋白胨10g

氯化钠8.5g

蒸馏水1000mL

将各成分加入到1000mL0.03mol/LPBS液中，加热溶解后调pH至7.2～7.4，与121℃压力蒸汽灭菌20min备用。

B．3营养琼脂培养基

牛肉膏5g

氯化钠5g

琼脂15g

除琼脂外其他成分溶解于蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121℃压力蒸气灭菌20min备用。

B．4溴甲酚紫蛋白胨培养液

葡萄糖5g

可溶性淀粉1g

溴甲酚紫乙醇溶液10mL

将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.0～7.2，加入1%溴甲酚紫酒精溶液，摇匀后，分装，每管5mL，于115℃压力蒸汽灭菌30min。

置4℃冰箱备用。

B.5营养肉汤培养基

蛋白胨10g

牛肉膏5g

氯化钠5g

蒸馏水1000ml

将各成分溶解于蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，分装，于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。

B.6嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基

牛肉膏3g

葡萄糖1g

琼脂20g

以上各成分蒸馏水溶解，调pH至7.0～7.2，装瓶，经115℃压力蒸汽灭菌30min后使用。

B.70.5%葡萄糖肉汤培养基

肉浸液1000ml

取蛋白胨与氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调pH至弱碱性，煮沸、加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调pH至7.0～7.4，分装，于115℃压力蒸汽灭菌30min。

B.8稀释液：

胰蛋白胨生理盐水溶液（TPS）。

胰蛋白胨1.0g

先用900ml以上蒸馏水溶解，并调节pH值在7.0±

0.2（20℃），最终用蒸馏水加至1000ml，分装后，经121℃压力蒸汽灭菌后使用。

B.9需氧-厌氧菌琼脂培养基

酪胨（胰酶水解）15g

牛肉膏3g

氯化钠2.5g

L-胱氨酸0.5g

硫乙醇酸钠0.5g

酵母浸出粉5g

新鲜配制的0.1%刃天青溶液1.0ml

（或新配制的0.2%亚甲蓝溶液0.5ml

琼脂0.5g～0.7g

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成份加入蒸馏水中，微温溶解后，调pH至弱碱性，煮沸、滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH至6.9～7.3，分装于115℃压力蒸汽灭菌30min。

B.10无菌试验用真菌培养基

磷酸二氢钾（KH2PO4）1g

硫酸镁（MgSO4·

7H2O）0.5g

蛋白胨5g

葡萄糖10g

除葡萄糖外，上述各成分加入蒸馏水内，微温溶解后，调节pH约6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀滤清，调pH使灭菌后为6.4±

0.2，分装，115℃压力蒸汽灭菌20min备用。

B.11血琼脂培养基

营养琼脂100ml

脱纤维羊血（或兔血）10ml

将营养琼脂加热熔化待冷至50℃左右，以无菌操作将10ml脱纤维血加入后摇匀，倒平皿置冰箱备用。

B.12注意事项

配制培养基注意事项如下：

a）配制培养基的容器不宜用铜锅或铁锅，以免影响细菌生长；

b）培养基用的试管口和锥形烧瓶口应用普通棉花制成的棉塞，再用牛皮纸包好；

c）试剂与培养基配制好后应置清洁处保存，常温下不超过1个月。

1空气消毒效果的监测

采样时间：

在消毒处理后、操作前进行采样。

（1）采样方法

1）布点方法；

室内面积≤30cm2，设内、中、外对角线3点，内、外点布点部位距墙壁IM处；

室内面积>

30cm2，设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁lm处。

2）平板暴露法：

将普通营养琼脂平板（直径为9cm）放在室内各采样点处，采样高度为距地面0.8m～1.5m，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5min，盖好立即送检。

3）检测方法：

将送检的平板置37℃温箱培养48h，计数菌落数，若怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。

（2）结果判定Ⅰ类区域：

细菌总数≤10cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格；

Ⅱ类区域：

细菌总数≤200cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格；

Ⅲ类区域：

细菌总数≤500cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格。

注意事项：

采样前，关闭门、窗，在无人走动的情况下，静止10分钟后进行采样。

2物品和环境表面消毒效果监测采样时间：

在消毒处理后进行采样。

（1）采样方法：

用5cm×

5cmd标准灭菌规格板，放在被检问题表面，采样面积≥100cm2，连续采样4个，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml含有相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。

（2）结果判定Ⅰ、Ⅱ类区域：

细菌总数≤5CFU/cm3并未检出致病菌为消毒合格。

细菌总数≤10CFU/cm3并未检出致病菌为消毒合格。

Ⅳ类区域：

细菌总数≤15CFU/cm3

并未检出致病菌为消毒合格。

母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏3手的消毒效果监测采样时间:

在消毒后立即采样。

（1）采样方法1）手的采样：

被检人五指并拢，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm3），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10ml含有相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

2）结果判定Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：

细菌总数≤5CFU/cm3，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌为消毒合格。

Ⅲ类区域工作人员：

细菌总数≤10CFU/cm

3并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。

Ⅳ类区域工作人员：

细菌总数≤15CFU/cm3并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。

母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌为消毒合格。

4压力蒸汽灭菌效果监测方法

（1）化学监测法1）化学指示卡（管）监测方法：

将既能指示温度，又能指示温度持续时间的化学指示管（卡）放人每一待灭菌的物品包中央，经一个灭菌周期后，取出指示管（卡），根据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。

2）化学指示胶带监测法：

将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品包外，经一个灭菌周期后，观察其颜色的改变，以指示是否经过灭菌处理。

3）结果判定：

检测时，所放置的指示管（卡）的性状或颜色均变至规定的条件，可认为该包灭菌合格。

4）注意事项：

监测所用化学指示剂须经卫生部批准，并在有效期内使用。

（2）生物监测法1）指示菌株：

指示菌株为嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC7953或SSIK31株），菌片含菌量为5.0X105-5.0x106cfu/片，在121℃±

0.5℃条件下，D值为13-1.9min，杀灭时间（KT

值）≤19min，存活时间（ST值）为≥3.9min。

2）培养基：

试验用培养基为溴甲酚紫蛋白胨水培养基。

（3）检测方法：

将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装人灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。

灭菌柜室内,排气口上方放置一个标准试验包（由3件平纹长袖手术衣，4块小手

术巾，2块中手术巾，1块大手术中，3O块10cmx10cm8层纱布敷料包裹成25cmX30cmx30cm大小）。

手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒（22cmx13cmx6cm）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位的两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将贮物盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。

经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投人溴甲酚紫蛋白胨水培养基中，经56℃培养7天（自含式生物指示物按说明书执行），观察培养基颜色变化。

检测时设阴性对照和阳性对照。

（4）结果判定：

每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基都不变色，判定为灭菌合格；

指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基，由紫色变为黄色时，则灭菌不合格。

（5）注意事项：

监测所用菌片须经卫生部认可，并在有效期内使用。

5紫外线消毒效果的监测

（1）紫外线灯管辐照度值的测定1）检测方法：

开启紫外线灯5min

后，将测定波长为254nm的紫外线辐照计探头置于被检紫外线灯下垂直距离1m的中央处，待仪表稳定后，所示数据即为该紫外线灯管的辐照度值。

2）结果判定：

普通30w。

直管型紫外线灯，新灯辐照强度≥90Uw/cm2为合格；

使用中紫外线灯辐照强度≥70Uw/cm2对为合格；

30W高强度紫外线新灯的辐照强度≥180Uw/cm2行为合格。

3）注意事项：

测定时电压

220v土5v，温度20一25℃，相对湿度<

60%，紫外线辐照计必须在计量部门检定的有效期内使用。

6医疗器械灭菌效果的监测

（1）采样时间：

在灭菌处理后，存放有效期内采样。

常规监测

1）检测方法：

用无菌的方法将拟检缝合针、针头、手术刀片等小件医疗器械各5支，分别投人5ml的无茵洗脱液中；

注射器则取5副在5ml无菌肉汤中分别抽吸5次；

手术钳、镊子等大的医疗器械在无菌操作下取2份以上用沾有无菌洗脱液的棉拭子反复涂擦采样，并将棉拭子投入5ml无菌洗脱液中。

将采样管用力振打80次，用无菌吸管吸取lml待检样品放于灭菌平皿内，加人已熔化的45℃-48℃的营养琼脂15-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置37℃温箱培养48h，计数菌落数。