微生物学与免疫学实验课教案Word格式.docx
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教学内容与组织安排：
课堂时间安排：
讲授60min，示教操作30min，学生操作70min。
一、介绍实验室规则（P2）
二、光学显微镜油镜的使用和保护法（操作－１台镜/人）（P19）
1.油镜头的识别
2.油镜的使用法
3.油镜头使用后的维护
三、细菌基本形态和特殊结构的观察（P23）
基本形态：
大肠杆菌、葡萄球菌、霍乱弧菌---革兰染色
特殊结构：
破伤风梭菌（芽胞染色）、肺炎球菌（荚膜染色）、变形杆菌（鞭毛染色）
观察时注意细菌的形态、排列方式及染色性。
四、常用培养基的介绍（示教）（P24）
常用培养基按物理性状分为固体培养基、液体培养基及半固体培养基；
按用途分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基等。
对照实物，讲成分、用途。
五、细菌的接种技术和培养方法（P25）
1、分离培养接种法――平板分区划线法（操作：
1份/人）（示教操作）
菌种：
大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合液。
讲目的、原理、方法、意义。
操作注意事项：
划线紧密、不能重叠、不能划破琼脂表面、无菌操作、接种后标记及放置。
2、纯种细菌接种法（示教操作）
包括：
固体斜面培养基、液体培养基、半固体培养基接种法。
注意事项：
正确的接种方法
六、细菌的生化反应（示教结果）（P30）
1、单糖发酵试验：
大肠杆菌、伤寒杆菌。
养基：
乳糖、葡萄糖液体发酵管。
2、吲哚（靛基质）试验
大肠杆菌、产气杆菌。
培养基：
蛋白胨水培养基。
3、硫化氢试验
大肠杆菌、变形杆菌。
醋酸铅培养基。
4、细菌色素的产生
绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌。
普通琼脂平板。
讲各生化反应的原理、实验方法、结果观赛，在细菌鉴别中的意义。
七、药敏试验—纸片扩散法（操作：
1皿/4人）（示教操作）（P37）
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌培养物。
药敏纸片一套（青霉素、四环素、庆大霉素、磺胺、链霉素）
接种细菌：
密集均匀、标记菌种；
放置药敏纸片：
字母、相互间距离；
标记班级、组号。
1、绘图：
细菌的基本形态（球、杆、弧菌）及细菌的特殊结构（芽孢、荚膜、鞭毛）。
2、记录细菌生化反应的各项试验结果。
系部病原生物学与医学免疫学系 教师姓名
实验二微生物学基础实验
（二）
细菌的致病性（细菌表面结构、侵袭性酶及内、外毒素的致病作用）；
细菌涂片的制备方法，革兰染色的步骤、结果、意义；
药敏试验（纸片扩散法）的原理、结果分析及意义。
不同细菌在各种培养基上生长情况的观察要点。
实验室常用灭菌器的使用方法。
细菌涂片的制备及革兰氏染色方法。
细菌在各种培养基上生长情况的观察。
课外作业：
系主任201年月日
看电教片及讲授60min，示教操作20min，学生操作80min。
一、细菌的致病性――电教片：
（P ）
1、破伤风外毒素毒性试验（12分）
2、伤寒杆菌内毒素毒性试验（1４分）
二、细菌在培养基上生长情况的观察（示教结果，P25）
（一）细菌在固体琼脂平板上生长情况的观察
1、普通琼脂平板：
金葡球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、变形杆菌（迁徙现象）的培养物。
学生上次实验课自己接种的平板（混合菌液）。
注意观察各种细菌在普通平板上菌落的大小、形态、颜色、透明度、表面、边缘、有无迁徙生长现象。
2、血平板：
金葡球菌和柠葡球菌的培养物。
观察要点：
菌落的大小、形状、颜色、表面、边缘、透明度、溶血性、迁徙生长现象。
（二）细菌在固体斜面上生长情况的的观察：
柠葡斜面培养物。
菌苔的颜色、湿润度等。
（三）细菌在液体培养基上生长情况的观察：
枯草杆菌、大肠杆菌或葡萄球菌、链球菌的肉汤培养物；
注意观察三种生长现象：
混浊生长、沉淀生长、菌膜生长。
（四）细菌在半固体培养基上细菌生长情况的观察：
大肠杆菌和金葡球菌的培养物。
穿刺线的情况（穿刺线周围是否清晰，或在穿刺线周围呈行刺状或云雾状）。
三、细菌的染色检查法－革兰染色法（操作，1份/人）（P21）
【材料】学生上次实验课自己接种的平板（金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液培养物）、革兰染色液、生理盐水、载玻片、接种环等。
【方法】
1、细菌涂片的制备：
使用学生上次课分区划线的结果（金葡球菌和大肠杆菌混合菌液的培养物），分别挑取两种不同类型的菌落制备细菌涂片。
涂片 自然干燥 固定
２、革兰染色：
分析革兰染色的关键步骤、结果及实际意义（鉴别细菌、指导用药、了解细菌致病性）。
3、镜检：
注意观察细菌的镜下特征。
四、细菌变异现象的观察（示教）（P40）
1、形态的变异：
（边台示教）
鼠疫杆菌正常形态（美兰染色）和变异形态（革兰染色）示教片。
2、鞭毛变异：
（示教结果）
变形杆菌普通平板培养物（有迁徙生长现象）和0.1%石炭酸琼脂平板培养物（无迁徙生长现象）。
五、常用消毒灭菌器介绍
利用PPT图片介绍烤箱、煮沸消毒器、阿诺氏流通蒸汽灭菌器、高压蒸汽灭菌器、紫外灯、几种常用的滤菌器。
六、上次课试验结果的观察分析。
1、分区划线的结果观察：
观察不同菌落的特征并描述之，挑取不同菌落进行革兰染色进一步鉴定之。
2、药物敏感性试验（纸片扩散法）：
观察试验结果，测量抑菌圈直径大小，确定各种抗生素对所测细菌的敏感性程度，写出实验报告，讨论药敏试验的意义（指导临床选用敏感抗生素、防止耐药菌株的出现）。
六、作业：
1、描述细菌在各种培养基上的生长情况。
2、记录分区划线的结果（不同细菌的菌落特征）及革兰染色的结果。
3、记录并分析药敏试验结果。
布置下次课（讲习课：
其他微生物）自学内容、做自测题，通知学生带课本。
系部病原生物学与医学免疫学系 教师姓名
实验三细菌学各论实验
（一）
病原性球菌、肠道杆菌、综合性实验（粪便标本中肠道杆菌的分离鉴定①）
几种常见病原性球菌的主要生物学性状；
病原性球菌致病性的鉴定方法；
粪便标本中肠道杆菌的分离鉴定；
肠道杆菌的在形态、染色上的共同特性；
肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点；
肥达试验原理及结果分析。
抗链球菌溶血素“O”实验原理及结果判断；
肠道致病菌与非致病菌主要生化反应的鉴别要点及其意义。
常见病原性球菌的形态、培养特点，致病性葡萄球菌的鉴定；
抗“O”实验原理及结果判断；
肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点、主要生化反应的鉴别要点及其意义；
肥达试验原理及结果判断。
讲授60min，示教操作25min，学生操作75min。
一、病原性球菌
1、病原性球菌的形态观察（示教，1套/室）P50
【材料】葡萄球菌、链球菌、脑膜炎球菌、淋球菌的革兰染色片及肺炎链球菌的荚膜染色片。
【方法】镜检上述各示教片。
讲述：
形态、排列方式、染色特性、肺炎球菌的荚膜。
2、病原性球菌的培养物观察（示教，2套/室）P50
【材料】金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌，甲、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌、肺炎链球菌在血琼脂平板及脑膜炎球菌在巧克力色血琼脂平板上的24小时培养物。
【方法】
观察金黄色、表皮和腐生葡萄球菌在血平板上的生长情况，注意菌落的色素及溶血性。
观察甲、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌、肺炎链球菌在血平板上的生长情况，注意菌落大小、表面、透明度及溶血性。
比较甲链和肺炎链球菌的菌落有无区别。
观察脑膜炎球菌（24小时培养物）在巧克力色血平板上的生长情况，注意菌落表面、透明度。
3、致病性葡萄球菌的鉴定――血浆凝固酶试验（玻片法）（操作，1份/人）P52
【材料】葡萄球菌24小时培养物、兔血浆、生理盐水、玻片等。
【方法】示教试管法，操作玻片法（1份/人）
血浆凝固酶试验的原理、方法、判断结果、意义
4、抗链球菌溶血素“O”试验（示教，2套/室）（P52）
【材料】待检血清、溶血素“O”、还原剂片、生理盐水、2%人“O”型或兔红细胞、试管、吸管、37℃水浴箱等。
抗链球菌溶血素“0”试验原理、方法、判断结果、临床意义
二、肠道杆菌
1、肠道杆菌的形态观察（示教，1套/室）P57
【材料】大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌革兰染色示教片。
【方法】镜检上述各示教片
肠道杆菌形态染色共性
2、肠道杆菌培养物与生化反应观察（示教，2套/室）P57
【材料】大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在SS培养基、双糖铁、尿素及蛋白胨水培养基上24小时培养物。
参阅培养基组成份，讲述其生化反应原理，注意观察菌落的形态、大小、颜色及透明度和动力的鉴别。
3、肥达试验（操作，1排/2人，1套/8人）P58
【材料】待检血清、伤寒沙门菌“H”、“O”菌液、甲、乙型副伤寒沙门菌“H”菌液、小试管、吸管、生理盐水、水浴箱等。
肥达试验原理、方法、步骤、结果判断和意义。
三、综合实验――粪便标本中肠道杆菌的分离培养
（一）（操作，1份/人）P60
1、分离培养（操作，每人一份）
【材料】新鲜粪便标本、SS琼脂平板。
【方法】第一日的检验步骤，即用接种环挑取新鲜粪便标本，分区划线接种于SS平板上，37℃培养24小时。
讲解粪便标本中肠道杆菌的分离鉴定程序，阐明本次实验要做的内容方法
链球菌、脑膜炎球菌、淋球菌、大肠杆菌（或变形、痢疾、伤寒杆菌）的形态染色结果。
2、记录五种肠道杆菌在SS培养基上的菌落特征和双糖铁、蛋白陈水、尿素培养基上的生化反应和动力结果。
系部病原生物学与医学免疫学系 教师姓名
3
实验四细菌学各论实验
（二）
分枝杆菌、棒状杆菌、综合性实验（粪便标本中肠道杆菌的分离鉴定②）
结核杆菌的形态特征、培养特点。
白喉杆菌的形态特征。
结核分枝杆菌的形态特征、培养特点，酸染色法；
肥达试结果分析。
系主任201年月日
讲授20min，示教操作15min，学生操作85min。
一、棒状杆菌、分枝杆菌P71、P82
（一）形态观察（边台示教）
〖材料〗白喉杆菌（Albert或Neisser染色）示教片；
结核杆菌（抗酸染色）示教片。
〖方法〗显微镜油镜观察。
注意观察：
形态、排列、染色性。
（二）结核杆菌培养物观察（示教）
〖材料〗结核杆菌培养物（改良罗氏培养基）。
注意观察结核分枝杆菌的菌落特点。
（三）结核病人痰标本检查----抗酸染色（操作，1份/人）
〖材料〗结核病人痰标本、抗酸染液一套、玻片、玻片夹、酒精灯、记号笔。
〖方法〗
1、涂片标本的制备：
结核病人痰标本→→涂厚片→→干燥→→固定
2、抗酸染色：
石炭酸复红（加热5min）→→3%盐酸酒精（1min）→→碱性美兰（1min）→→镜检
注意：
演示方法注意安全
二、综合实验--粪便标本中肠道杆菌的分离鉴定
（二）（操作，1份/人）
2、初步鉴定
【材料】双糖铁培养基
【方法】观察SS平板上菌落，依据其大小、颜色、透明度等特点，初步识别可疑病原菌菌落。
用接种针从可疑病原菌菌落中心点取细菌，穿刺接种双糖铁培养基，37℃培养18-24小时。
白喉杆菌、结核杆菌的形态
2、记录并分析肥大试验的结果
通知学生自学：
厌氧性细菌（破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌），动物源性细菌（布鲁菌、炭疽杆菌、鼠疫杆菌），做相关自测题。
系部病原生物学与医学免疫学系 教师姓名
讲习
5
实验五细菌学各论实验（三）
厌氧性细菌、动物源性细菌、综合性实验（粪便标本中肠道杆菌的分离鉴定③）
破伤风梭菌的致病条件、致病因素及特异性防治措施。
厌氧性细菌的共同特性，种类与分布、厌氧菌感染的特点；
产气荚膜梭菌的形态培养特点、致病特点，微生物学诊断及防治原则；
布氏杆菌的致病性，血清学检查方法及特异性预防；
鼠疫杆菌的形态染色特点，致病因素，传播特点及预防措施；
炭疽杆菌的形态染色特点，抵抗力、致病性及特异性预防。
厌氧菌的培养方法。
系主任201年月日
讲授20min，学生自学及做自测题90min，示教操作20min，学生操作40min。
提问及讲自测题30min。
一、电教片：
布鲁菌病
二、自学
破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌；
布鲁菌、炭疽芽胞杆菌、鼠疫杆菌。
并做自测题。
三、形态观察（边台示教）
（一）厌氧性细菌的形态观察
〖材料〗破伤风梭菌（芽胞染色）、产气荚膜杆菌（荚膜染色）肉毒梭菌（革兰染色）示教片。
细菌的大小、形态、染色及特殊构造。
（二）动物源性细菌形态观察
〖材料〗布鲁菌（革兰染色）、炭疽芽胞杆菌（革兰染色及芽胞染色）、鼠疫杆菌（复红或美兰染色）及衰退型（革兰染色）示教片。
四、培养物及生化反应观察
（一）厌氧性细菌培养物及生化反应的观察
〖材料〗菌种：
破伤风梭菌、产气荚膜梭菌
血平板、疱肉培养基、牛乳培养基、高层琼脂培养物。
〖方法〗观察破伤风梭菌、产气荚膜梭菌的培养特性与生化反应。
讲述有关厌氧菌培养物的原理、制备方法、厌氧菌培养特性与生化反应结果
（二）动物源性细菌培养物观察
〖材料〗炭疽芽胞杆菌、鼠疫杆菌培养物（普通琼脂平板）
〖方法〗肉眼及低倍镜下观察。
五、综合实验――粪便标本中肠道杆菌的分离鉴定（三）（操作，1份/人）
3、血清学鉴定
〖材料〗沙门菌属、志贺菌属四种多价诊断血清、生理盐水、玻片等。
〖方法〗①根据初步鉴定结果，判定细菌属性，选用相应诊断血清做玻片凝集试验。
用接种环自双糖铁培养基上挑取少许细菌，分别磨匀于生理盐水与相应诊断血清中，摇动玻片1～2分钟，观察结果。
②凝集试验阳性者，报告结果；
阴性者保留菌种进一步鉴定。
2、记录粪便中肠道病原菌的检查程序及结果，并写出报告。
支原体、立克次体、衣原体、螺旋体、真菌，并做相关自测题。
系部病原生物学与医学免疫学系 教师姓名
实验六其他微生物（讲习）
引起人类疾病的支原体、螺旋体、衣原体立克次体的生物学特性和致病性；
肺炎支原体“油煎蛋集落”低倍镜下的形态特征；
斑疹伤寒或恙虫病立克次体、梅毒螺旋体、钩端螺旋体、牛放线菌、白假丝酵母菌、新型隐球菌、皮肤丝状菌、沙眼衣原体包涵体的镜下形态特征。
熟悉病原性真菌的结构、致病性及培养物特征。
病原性真菌临床标本的常规检查方法实验室常用灭菌器的使用方法。
各种微生物的镜下形态观察。
电教片及讲授35min，学生自学及做自测题60min，示教操作10min，学生操作25min。
一、电视——病原性真菌
支原体、立克次体、衣原体、螺旋体、真菌自测题
三、其它微生物的形态及培养物观察
1、肺炎支原体“油煎蛋集落”示教片（低倍镜观察）
2、斑疹伤寒或恙虫病立克次体（东方体属）示教片
3、沙眼衣原体包涵体示教片
4、梅毒螺旋体示教片（镀银染色）
5、钩端螺旋体示教片（镀银染色）
6、牛放线菌示教片（HE染色）
7、白假丝酵母菌示教片（不染色）
8、新型隐球菌示教片（墨汁染色）
9、皮肤丝状菌示教片（棉兰染色）
10、真菌培养物观察：
酵母型菌落、类酵母型菌落、丝状型菌落
绘图：
沙眼衣原体包涵体、斑疹伤寒或恙虫病立克次体、肺炎支原体“油煎蛋”集落、梅毒螺旋体、钩端螺旋体、白色念珠菌、皮肤丝状菌。
系部病原生物学与医学免疫学系 教师姓名
实验七医学免疫学实验
（一）
免疫溶血反应的原理，理解补体在免疫溶血反应中的重要作用。
常见天然免疫功能测定技术。
中性粒细胞吞噬功能检测技术的方法、结果观察。
免疫溶血反应的方法、结果观察。
瑞氏染色的方法。
2％绵羊红细胞悬液、2单位溶血素、2单位补体的配制。
补体在免疫溶血反应中的重要作用。
系主任201年月日
讲授30min，示教操作20min，学生操作70min，课堂讨论题40min。
一、讲解：
简要介绍天然免疫功能测定技术，包括：
中性粒细胞吞噬功能检测、巨噬细胞吞噬功能检测、溶菌酶的测定、补体参与的反应（免疫溶血反应）等。
二、实验：
1、中性粒细胞吞噬功能检测（操作，1份/人；
示教片，1份/室）P36
讲述试验的原理、方法和结果观察。
【材料】白色葡萄球菌18小时肉汤培养物、抗凝人血、小试管、玻片、吸管、毛细吸管、瑞氏染色液。
采血1份/4人；
每人染一张片。
2、免疫溶血反应（操作，1份/2人）P15
【材料】2％绵羊红细胞悬液、2单位溶血素、2单位补体、试管、刻度吸管、37℃水浴箱。
讲述免疫溶血反应的原理、试验方法、结果观察。
三、讨论题：
胞外菌和胞内菌感染的免疫特征有何不同？
它们各自引起哪些类别的免疫应答？
简述其过程。
小吞噬现象。
P5
2、记录并分析免疫溶血反应结果。
P6
实验八医学免疫学实验
（二）
抗原抗体反应的特点、影响因素、抗原抗体反应检测技术的类型。
凝集反应的原理、类型及应用。
沉淀反应的原理、类型及应用。
人工主动免疫、人工被动免疫的应用。
玻片凝集试验（痢疾杆菌的血清学鉴定）的操作方法及结果观察。
血型鉴定的原理，实验方法和结果观察。
双向琼脂扩散试验的操作方法、结果观察及应用。
常见的生物制品种类及特点。
间接凝集反应、凝集抑制试验的原理。
单向琼脂扩散实验、免疫比浊、免疫电泳的原理。
凝集反应、沉淀反应的原理、类型及应用。
讲授80min，示教操作15min，学生操作65min。
一、电视教学片------预防接种
二、常用生物制品介绍
三、基于抗原抗原反应的检测技术
讲解：
①抗原抗体反应的特点、影响因素、抗原抗体反应检测技术的类型。
②凝集反应概念、分类；
直接凝集反应的原理、方法、结果观察；
间接凝集反应的原理；
凝集抑制试验的原理、方法、结果观察；
③沉淀反应的概念、分类；
双向琼脂扩散试验的原理、方法、结果观察、应用；
单向琼脂扩散试验的原理、应用。
1、痢疾杆菌的血清学鉴定（操作，1份/人）P2
【材料】痢疾杆菌18～24小时培养物，志贺菌属多价诊断血清，生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯。
示教操作和结果观察。
2、ABO血型鉴定（操作，1份/人）P3
【材料】玻片、标准抗A抗体和抗B抗体、刺血针、酒精棉球。
讲解血型鉴定的原理，示教操作和结果观察。
3、双向琼脂扩散试验（操作，1板/2人）P9
【材料】羊抗人全血清，小牛血清，正常人混合血清，精制琼脂粉，生理盐水、载玻片，打孔器（直径3mm）、湿盒、吸管等。
讲双向琼脂扩散试验的
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