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论文模板

分类号：

R361

学校代码：

10438

密级：

学号：

硕士学位论文

题目

HIF-1α、VEGF、uPA在胶质瘤中的表达及其与血管生成的关系

院、系（所）

临床学院

专　　　业

外科学

学位类型

医学专业学位

申请人

×××

导　　　师

×××教授

论文起止日期:

2012年01月-2013年03月

分类号：

R361

学校代码：

10438

密级：

学号：

硕士学位论文

题目

HIF-1α、VEGF、uPA在胶质瘤中的表达及其与血管生成的关系

院、系（所）

临床学院

专　　　业

外科学

学位类型

医学科学学位

申请人

×××

导　　　师

×××教授

论文起止日期:

2012年01月-2013年03月

学位论文原创性声明

本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。

文中依法引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。

论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其它学位申请的论文或成果。

本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：

1、交回学校授予的学位证书；

2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；

3、本人按照学校规定的方式，对因学位论文不当取得学位而给学校造成的名誉损害进行公开道歉；

4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。

论文作者签名：

_____________签字日期：

年月日

学位论文版权使用授权书

本学位论文作者完全了解潍坊医学院有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。

本人授权潍坊医学院可以将本学位论文全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。

本人离校后发表或使用该学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为潍坊医学院。

保密论文解密后仍适用于本声明。

论文作者签名：

_______________日期：

年月日

导师签名：

_______________日期：

年月日

（本声明的版权归潍坊医学院所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用）

一、中文摘要…………………………………………………………………………1

二、英文摘要…………………………………………………………………………4

三、符号说明…………………………………………………………………………7

四、正文

（一）前言………………………………………………………………………8

（二）材料和方法………………………………………………………………10

（三）结果……………………………………………………………………17

（四）讨论……………………………………………………………………20

（五）结论……………………………………………………………………28

五、附图表………………………………………………………………………29

六、参考文献………………………………………………………………………37

七、文献综述………………………………………………………………………42

八、致谢……………………………………………………………………………59

九、攻读学位期间撰写的论文……………………………………………………60

作用作用作用作用作用作用作用

研究生：

王二三

专业：

病理学与病理生理学

导师：

吕一一教授

中文摘要

目的：

本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验。

方法：

参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照。

结果：

一.尿酸对脑组织形态学变化的影响

1.脑组织含水量：

正常对照组的平均含水量是0.82±0.08，HI组的平均含水量是0.88±0.10，UA组的平均含水量是0.84±0.15。

HI组新生大鼠脑组织含水量显著高于正常组（P<0.01）,UA组新生大鼠脑组织含水量比HI组明显降低（P<0.01）,差异具有统计学意义,而正常组和UA组相比无统计学意义（P>0.05）。

2.氯化2，3，5-三苯基四氮唑（TTC）染色：

各组新生大鼠在脑缺血24小时进行TTC染色，结果显示正常组脑组织无梗死，HI组脑组织梗死体积百分比为40.37±3.25%，UA组脑组织梗死体积百分比为30.07±1.52%，UA组脑组织梗死体积百分比显著低于HI组，差异具有统计学意义（P<0.01）。

而正常对照组与UA组相比脑组织梗死体积百分比仍有显著差别（P<0.01）。

3.HE染色：

正常对照组脑组织结构完整,神经元清晰,HI组脑组织结构紊乱，大片的神经元变性、坏死和凋亡。

UA组较HI组神经元分布规则，细胞皱缩不明显、细胞核浓缩和神经元数量减少。

UA组与HI组相比，神经元形态存在明显差别。

结论：

1.尿酸用药后可降低新生大鼠脑缺血缺氧损伤程度，对脑组织具有神经保护作用。

2.尿酸的神经保护作用是通过抗氧化抗凋亡机制来实现的。

关键词：

尿酸、脑缺血缺氧、神经保护作用、三硝基酪氨酸、凋亡

NEUROPROTECTIVEEFFECTSOFURICACIDINANEONATALHYPOXICISCHEMICRATMODEL

Postgraduate

Liyi

Speciality

PathologyandPathophysiology

Supervisor

ProfessorLuyiyi

ABSTRACT

Objective:

Methods:

Results:

Keywords:

符号说明

英文缩写

英文全称

中文全称

hypoxicischemia

缺血缺氧

HIE

hypoxicischemiaencephalopathy

缺血缺氧脑病

HIBD

hypoxicischemiabraindamage

缺血缺氧性脑损伤

ROS

reactiveoxygenspecie

活性氧

RNS

reactivenitrogenspecies

活性氮

freeradical

自由基

TTC

2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorideHematoxylineosin

氯化2，3，5-三苯基四氮唑

Hematoxylineosin

苏木素

Nissl

toluidineblue

甲苯胺蓝

TUNEL

terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnickendlabeling

TDT介导的生物素dUTP

Caspase-3

nitricoxide

Cyteineaspartate–specificproteinase-3

一氧化氮

半胱胺酸蛋白酶蛋白-3

Caspase-9

Cyteineaspartate–specificproteinase-9

半胱胺酸蛋白酶蛋白-9

ANOVA

analysisofvariance

方差分析

O2•−

superoxideradicals

超氧阴离子

1O2

singletoxygen

单线态氧

H2O2

hydrogenperoxide

过氧化氢

•OH

hydroxylradical

羟基

ONOO−

peroxynitrite

亚硝酸盐

uricacid

尿酸

XDH

xanthinedehydrogenase

黄嘌呤脱氢酶

xanthineoxidase

黄嘌呤氧化酶

SOD

superoxidedismutase

超氧化物歧化酶

前言

材料与方法

一实验材料

1.主要仪器和器材

250-500透明动物加压仓

上海701所杨园医用氧舱厂

501型超级数显恒温水浴

上海浦东跃欣科学仪器厂

SW-CJ-IF型超净工作台

德国Leica公司

Leica020-519.010光学显微镜

德国Leica公司

5810R低温高速离心机

德国Eppendorf公司

摄像及FR-988生物显微图像分析系统

上海复日科技有限公司

SmartScape2002生物图像分析软件

上海复日公司

MTFG-A通风柜

深圳医疗器械公司

微量可调移液器

法国Gilson公司

THZ-C恒温振荡器

江苏太仓市实验设备厂

MLS-3020高压蒸汽消毒锅

日本三洋电器公司

EL×800酶联免疫检测仪

美国Biokit公司

EL×800BioelisaReader

美国Bio-TekInstruments

POLARstarmicroplatereader

德国BMG公司

DL-360超声波仪

浙江石浦海天电子仪器厂

Milli-Q去离子水制备仪

美国Millipor有限公司

AB104-N精密电子天平

美国MettlerToled有限公司

Delta320电子PH计

美国MettlerToled有限公司

电子天平

上海第一天平厂

电子摇床

上海离心机研究所

THZ-C恒温振荡器

江苏太仓市实验设备厂

水浴锅

上海医疗器械七厂

Incucell55型温箱

德国Incucell有限公司

DK-8A型电热恒温水槽

上海精宏实验设备有限公司

DK-8D型电热恒温水槽

上海精宏实验设备有限公司

超低温冰箱

美国公司

LKB-Ⅲ型超薄切片机

德国Leica公司

CM1900恒温冷冻切片机

德国Leica公司

微波炉

Galanz公司

-70℃冷柜

HarrisManufacturing公司

干热消毒柜

StuartScientific

2.试剂及药品

尿酸

美国Sigma公司

一氧化氮检测试剂盒

碧云天生物技术研究所

甲苯胺蓝

中国医药集团上海化学试剂公司

InSituCellDeathDetectionKit

瑞士Roche公司

Caspase-3/CPP32FluorometricAssayKit

美国BioVision公司

Ant-nitrotyrosine:

兔抗鼠

美国Upstate公司

TTC

中国医药集团上海化学试剂公司

多聚甲醛

中国医药集团上海化学试剂公司

NaCl

上海生化试剂一厂

NaH2PO4.2H2O

上海生化试剂一厂

Na2HPO4.12H2O

上海生化试剂一厂

考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒

南京建成生物科技公司

蛋白酶抑制剂

康成生物有限公司

甲醛

中国医药集团上海化学试剂公司

二甲苯

中国医药集团上海化学试剂公司

中性树胶

中国医药集团上海化学试剂公司

乙醚

中国医药集团上海化学试剂公司

30%H2O2

中国医药集团上海化学试剂公司

无水乙醇

中国医药集团上海化学试剂公司

工业氮气

工业氧气

上海江南气体公司

3.主要试剂的配制

（1）0.9%生理盐水

NaCl

ddH2O

混匀后高温高压消毒备用

1000ml

（2）0.2MPBS（PH7.4）

NaH2PO4.2H2O

Na2HPO4.12H2O

加入ddH2O定容至1000ml

5.6g

61.6g

（3）1%TTC

TTC

0.2MPBS

即配即用，避光保存

0.5g

50ml

（4）尿酸

尿酸

0.9%生理盐水

溶解后振荡，用时振荡

0.3g

10ml

（5）4%中性甲醛

40%甲醛

0.2MPBS

加入ddH2O定容至100ml

10ml

50ml

（6）0.01MPBS（PH7.4）

Na2HPO4.12H2O

NaH2PO4.2H2O

NaCl

加入ddH2O定容至1000ml

2.90g

0.2964g

（7）1mol/lMgCl2溶液

MgCl2加入ddH2O定容至100ml高温灭菌，室温储存

20.33g

（8）TSM1溶液

Tris-base

NaCl

1mol/lMgCl2溶液

加入双蒸水400ml使其完全溶解用适量浓HCl调pH至8.0后定容至500ml

6.057g

2.922g

5ml

（9）TSM2溶液

Tris-base

NaCl

1mol/lMgCl2溶液

加入双蒸水400ml使其完全溶解用适量浓HCl调pH至9.5后定容至500ml

6.057g

2.922g

25ml

（10）1%甲苯胺蓝

甲苯胺蓝

蒸馏水

混匀器上混匀

100ml

（11）甲醇过氧化氢

36%乙酸

无水乙醇

30%过氧化氢

0.01MPBS

7.5ml

15ml

1ml

至30ml

（12）10×PBS（pH7.4）

NaCl

KCl

Na2HPO4.12H2O

NaH2PO4.2H2O

加入双蒸水定容至100ml，过滤除菌分装保存于-20℃

8.0g

4.0g

3.48g

0.2g

（13）考马斯亮蓝蛋白贮备液（100T）

临用时按所需量用蒸馏水1:

4稀释（即5倍稀释），配成应用液（现用现配）。

4℃保存。

（14）一氧化氮标准品NaNO2

在1ml中取50ml,用0.9%的生理盐水稀释标准品。

二实验方法

结果

讨论

结论

附图表

参考文献

[1]Felderhoff-MueserU,BittigauP,SifringerM,etal.Oxygencausescelldeathinthedevelopingbrain[J].NeurobiolDis,2004,17

（2）:

273–282.

[2]HintzSR,KendrickDE,VohrBR,etal.Changesinneurodevelopmentaloutcomesat18to22months'correctedageamonginfantsoflessthan25weeks'gestationalagebornin1993–1999[J].Pediatrics,2005,115（6）:

1645–1651.

文献综述

一一的研究进展

综述：

王二三审校：

李二三

参考文献

[1]Sánchez-LozadaLG,NakagawaT,KangDH,etal.Hormonalandcytokineeffectsofuricacid[J].CurrOpinNephrolHypertens,2006,15

（1）:

30-33.

[2]ChamorroA,PlanasAM,MunerDS,etal.Uricacidadministrationforneuroprotectioninpatientswithacutebrainischemia[J].MedHypotheses,2004,62

（2）:

173–176.

[3]PritsosCA.Cellulardistribution,metabolismandregulationofthexanthineoxidoreductaseenzymesystem[J].ChemBiolInteract,2000,129（1-2）:

195-208.

致谢

攻读学位期间撰写的论文

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