荷叶化学成分研究.docx

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荷叶化学成分研究

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　　莲属隶属于被子植物门双子叶植物纲睡莲科Nymphaeaceae的莲亚科。

该属植物有2种，分别为美洲黄莲NelumbopentapetalaFernald.,北部为中心分布在北美；中国莲　,以中国为中心分布在亚洲、大洋洲。

我国仅有中国莲一种，为多年生水生草本植物，在湖南、湖北、浙江、江苏等地有广泛种植。

　　传统医学中荷叶、荷花、藕和莲子都多有应用，在治疗咽病、胸痛、遗精、白癒风、天花、痢疾、咳嗽、呕血、略血、血尿、子宫出血、高脂血症、发热、霍乱、肝病、剧渴等病症上均有疗效。

同时,莲生物体的不同部位,如荷叶、莲藕、莲子等,又具有很高的食用价值。

从莲的各个部位分离出的单体成分主要包括生物碱类、黄酮类、三萜类、类固醇、多酚类等E-]。

　　荷叶是莲的干燥叶,具有清暑化湿，升发清阳，凉血止血等功效，荷叶中含丰富的生物碱类化合物，目前对荷叶的应用多集中于减肥功效的开发。

为了更好的利用和开发该植物,选取荷叶为研究对象，对其所含的化学成分进行分离及活性筛选。

从荷叶中共分离得到化合物27个，包括15个黄酮,2个生物碱，2个甾体,2个甾体苷,3个脂肪醇,1个苯酚和2个megastigmaneglucosides类化合物。

其中，6个为首次从该植物中分离得到,4个为首次从荷叶中分离得到。

　　1材料

　　Bruker-AVX型核磁共振仪，内标为TMS;JMS-T100CSmass型质谱仪，电离电压为70eV;RE-52型旋转蒸发仪（河南巩义市英峪仪器厂）；Taike-X6显微熔点测定仪（温度计未校正）；循环水真空泵DLSB40L（巩义市英峪仪器厂）；KQ-300超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；柱色谱硅胶（160~200，200~300目，青岛海洋化工厂）；D101大孔树脂SephadexLH-20（GE）;GF254色谱硅胶板（Merck）;所有化学试剂均为分析纯。

　　实验材料于2009年10月购于北京市卫仁饮片厂，经中国中医科学院中药研究所王智民研究员鉴定为莲/era的干燥叶。

　　2提取与分离

　　荷叶干燥样品20kg经粉碎后,70%乙醇12倍体积中试化回流提取2次，每次2h,合并提取液，减压浓缩后得浓缩液30L。

将浓缩液用乙酸乙酯萃取3次，正丁醇萃取2次，浓缩后得乙酸乙酯部分495g（A部分），21（56mg）,22（17mg）,FrA3_2硅胶柱色谱以石油醚-丙酮（3:

1）洗脱，得到5（25mg）,A4部分硅胶柱色谱分离以石油醚-丙酮（3:

1~25:

1）梯度洗脱，得到6（29mg）,7（16mg）,25（20mg）。

　　正丁醇部分700g（B部分）经过D101大孔树脂粗分，分别用水,30%,50%乙醇梯度洗脱，得到3部分B1~B3,其中B1部分再硅胶柱色谱分离分别以氯仿-甲醇-水（40:

8:

1）洗脱，得到化合物14（10mg）,15（10mg）;以氯仿~甲醇-水（30:

8:

1）洗脱得到化合物10（150mg）,之后，此部分收集到的第13份（）,经过SephadexLH-20（甲醇洗脱）得到化合物8（12mg）,第14份（）,经过Sephadex[只-20（甲醇洗脱）得到化合物9（14以8）;最后，以氯仿-甲醇-水（20:

8:

1）洗脱，得到的第15份（）经过SephadexLH-20（甲醇洗脱）得到化合物11（15mg）,12（8mg）,第16份（）,经过SephadexLH-20（甲醇洗脱）得到化合物13（6mg）。

B2部分硅胶柱色谱分离以氯仿-甲醇-水（40:

8:

1~0:

0:

1）洗脱得到化合物27（15mg）。

B3部分以氯仿-甲醇-水（240:

20:

1）洗脱得到化合物16（28mg）,20（85mg）,洗脱收集到的第31份（）再经过SephadexLH-20（甲醇洗脱）得到化合物17（14mg）。

第34份经过SephadexLH-20（甲醇洗脱）得到化合物18（11mg）,第35份以氯仿-甲醇-水（120:

20:

1）洗脱得到化合物19（120mg）,26（13mg）。

　　3结构鉴定

　　化合物1白色粉末，易溶于氯仿，难溶于甲醇，mp85~90°C。

EI-MSm/z297,157,139,125,111,97,83,69,57〇1H-NMR（CDCl3,600MHz）S：

（1H,m,H40）,~（52H,brs,H-2~9,11~27）,（3H,t,J=,H4）,（3H,t,J=,H-28）。

通过分析质谱裂解规律及比对文献8]的报道,鉴定化合物为10-二十八院醇（10->ctacosanol）。

　　化合物6黄色针晶（氯仿），mp158~160C。

1H-NMR（CDCl3,600MHz）S：

（1H,s,-OH）,（1H,d,J=,H-3）,（1H,d,J=

　　,H-6’）,（2H,d,J=,H-2,6）,（1H,d,=,H-a）,（2H,d,J=,H-3,5）,（1H,d,J=,H-5’）,（1H,s,H-3’）,（6H,s,-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6,150MHz）S:

（C=O）,（C-6’）,（C-4’）,（C-4）,（C-8）,（C-l）,（C-2）,（C-6）,（C-a）,（C4’）,（C-3）,（C-5）,（C-3’）,（C-2’）,（4-OCH3）,（4’-OCH3）。

以上数据与文献9]报道基本一致，鉴定为6’~hy-droxy-4,4’-dimethoxychalcone。

　　化合物7棕黄色针晶（氯仿），mp150C。

　　ESI-MSm/z289[M+H]+,274[M+H-CH3]+。

1H-NMR（CDCl3,600MHz）S：

（1H,s,-OH）,（1H,d,J=,H-6）,（1H,d,J=,H-5）,（1H,d,J=3Hz,H-4）,（1H,d,J=,H-2）,（3H,s,8~OCH3）,（3H,s7-OCH3）,（3H,s,3-OCHj）；13C-NMR（DMSO-d6,150MHz）S:

（C4）,（C-2）,（C-3）,（C-4）,（C-5）,（C-6）,（C-7）,（C-8）,（C-4a）,（C-4b）,（C-8a）,（C-8b）,（C=O）,（3~OCH3）,（7-OCH3）,（8~OCH3）。

以上数据与文献10]报道基本一致,鉴定为1-羟基-3,7,8-二甲氧基Bill酉同（3,7,8~trimetlioxy-l~hyckoxyF:

\组卷传道客巴巴再传118\已上传an-thone）。

　　化合物8黄色粉末，易溶于甲醇，不易溶于氯仿，mp236~238C。

ESI-MSm/z479[M+H]+。

1H-NMR（DMSO-i6,600MHz）S：

（1H,d,J=

　　,H-6）,（1H,d,J=,H-8）,（1H,dd,J=,,H-2’）,（1H,d,J=,H-3’）,（1H,d,/=,H-6’）,

　　（1H,d,J=,H4”）,（1H,m,H~2”）,（1H,m,H-3”）,（1H,m,H-T）,（1H,m,H-5”）,（1H,m,H-6”）,（1H,m,H-6”）,（3H,s,7-OCH3）；13C-NMR（DMSO-i6,150MHz）5:

（C-2）,（C-3）,（C-〇,（C-5）,（C-6）,（C-7）,（C-8）,（C-））,（C40）,（C4’）,（C-2’）,（C-3’）,（C-4’）,（C-5’）,（C-3’）,（C4”）,（C-2”）,（C-3”）,（C-4”）,（C-5”）,（C-3”）。

以上数据与文献11]报道基本一致，鉴定为鼠李素-3-9-3-D-B比喃葡萄糖苷（rhamnetin-5-9-3~D~glucopyrH-T）,（1H,d,J=,H-5”）,（2H,m,H-3”）,（1H,d,=,H-T）,（1H,d,=,H-2”）,（1H,m,H-3m）,（1H,d,=,H-T）,（1H,d,=,H-5）,（1H,dd,J=,,H-5）,（1H,s,H4”“）,（1H,d,J=,H-2”“）,（1H,t,J=,H-3”“）,（1H,m,H-T〇,（1H,d,J=,H-5〃”），（1H,d,J=,H-6ffff）,（3H,s,-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6,150MHz）5：

（C-2）,（C-3）,（C-0,（C-5）,（C-3）,（C-7）,（C-8）,（C-9）,（C-10）,（C4’）,（C-2’）,（C-3’）,（C-4’）,（C-5’）,（C-3’）,（C-r）,（C-T）,（C-3”）,（C-T）,（C-5”）,（C-3”）,（C-T）,（C-2m）,（C-3m）,（C-T）,（C-5）,（C-T”）,（C-2”“）,（C-3”“）,（C-T”）,（C-5”“）,（C-3”“）,（-OCH3）。

以上数据与文献12]报道基本_致，鉴定该化合物为异鼠李素-3-9-al-鼠李糖-（H）-a-3-来苏糖-（1-2）-3-）-葡萄糖苷]（isorhamnetin-3-O-a-L-’hamnopyranosyl-C1->?

6）-[a-D-lyxopyranosyl-（1--2）-3-D-glucopyrano-side]）。

　　化合物16黄色粉末，易溶于甲醇，不易溶于氯仿，mp170~173C。

ESI-MSm/z633[M+Na]+。

酸水解化合物16,薄层色谱检验水解产物，检出葡萄糖和来苏糖。

1H-NMR（DMSO-i6,600MHz）5:

（1H,d,J=,H-2’）,（1H,dd,=,,H-3’）,（1H,d,J=,H-5’）,（1H,d,J=,H-8）,（1H,d,J=,H-3）,（1H,d,J=,H4”）,（1H,t,=,H-2”）,（1H,t,J=,H-3”）,（1H,m,H-4”）,（1H,m,H-5”）,（1H,m,H-6”）,（1H,m,H-6”）,（1H,d,=,H-T）,（1H,m,H-2”）,（1H,m,H-3）,（1H,m,H-T）,（1H,dd,J=,,H-5m）,（1H,dd,J=,,H-5）,（3H,s,-OCH3）;13C-NMR（DMSO-i6,150MHz）5：

（C-2）,（C-3）,（C-4）,（C-5）,（C-5）,（C-7）,（C-8）,（C-））,（C40）,（C4’）,（C-2’）,（C-3’）,（C-4’）,（C-5’）,（C-3’）,（C-T）,（C-2”）,（C-3”）,（C-4”）,（C-5”）,（C-3”）,（C-T）,（C-2m）,（C-3m）,（C-T）,（C-5m）,（-OCH3）。

以上数据与文献报道基本一致，故鉴定该化合物5’）,（1H,d,/=,H-8）,（1H,d,J=,H-6）,（1H,d,J=,H4”）,（3H,s,-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6,150MHz）5：

（C-2）,（C-3）,（C-〇,（C-5）,（C-6）,（C-7）,（C-8）,（C-9）,（C-10）,（C4’）,（C-2’）,（C-3’）,（d）,（C-5’）,（d）,（C-r）,（C~2”）,（C-3”）,（C-T）,（C-5”）,（CV）,（-XH3）。

以上数据与文献13]报道基本_致,故鉴定该化合物为（1H,d,J=,H-6）,（1H,d,J=,H4”）,（1H,d,J=,H4m）,（3H,s,3’-OCH3）,（3H,d,J=,H-3m）;13C-NMR（DMSO-d6,150MHz）5：

（C-2）,（C-3）,（C-0,（C-5）,（C-3）,（C-7）,（C-8）,（C-9）,（C-10）,（C4’）,（C-2’）,（C-3’）,（C-4’）,（C-5’）,（C-5’）,（C-r）,（C-T）,（C-3”）,（C-T）,（C-5”）,（C-3”）,（C-T）,（C-2m）,（C-3m）,（C-T）,（C-5m）,（C-3m）,（-3CH3）。

经查阅文献，以上数据与文献[14]报道基本_致,故鉴定该化合物为异鼠李素-3-O-a-L-鼠李糖-（1->6）-3~D-葡萄糖苷（isorhamnetin-3-O-a-L-hamnopyranosyl-（1->6）-3-D-glucopyranoside）。

　　化合物24白色针状晶体（甲醇），mp157~159C。

EI-MSm/z414,399,396,381,329,303,273,271,255,246,231,213。

H-NMR（CDCl3,600MHz）5:

（1H,m,H-7）,（1H,m,H-3）,（3H,d,,=,H-21）,（3H,t,J=,H-29）,（3H,d,,=,H-26）,（3H,d,J=,H-27）,（1H,s,H49）,（1H,s,H48）;13C-NMR（CDCl3,150MHz）5:

（C4）,（C-2）,（C-3）,（C-4）,（C-5）,（C-6）,（C-7）,（C-8）,（C-9）,（C40）,（C41）,（C42）,（C-13）,（C44）,（C45）,（C46）,（C47）,（C48）,（C49）,（C-20）,（C-21）,（C-22）,（C-23）,（C-?

706?

24）,（C-25）,（C-26）,（C-27）,（C-28）,（C-29）。

以上数据与文献15]对照一致，鉴定该化合物为stigmast-7-sn-3S-jl。

　　化合物25白色针状结晶（氯仿），mp104~105C。

EI-MSm/z10（M+’）MHz）5:

（2H,m,H-3,6）,（2H,m,H-4,5）;13C-NMR（CDCl3,150MHz）5:

（C4,2）,（C-3,6）,（C-4,5）。

以上数据与文献[16]对照一致，故鉴定该化合物为邻二羟基苯（benzene4,2-diol）。

　　化合物2,与J-谷甾醇对照品共薄层Rf相同，故鉴定为J-谷甾醇（J-sitosterol）;化合物3,数据与文献16]对照一致，鉴定为1-十一烷醇（1-rnde-canol）;化合物4,数据与文献[17]对照一致，鉴定为1-二十烷醇（14cosanol）;化合物5,与胡萝卜苷对照品薄层色谱Rf及显色情况一致,故鉴定为胡萝卜苷（daroside）;化合物13,数据与文献22]对照一致,鉴定为槲皮素-34■芸香糖苷（quercetin-3-O-utinoside）;化合物14,数据与文献23]对照一致，鉴定为紫云英苷（astragalin）;化合物19,数据与文献22]对照一致，鉴定为槲皮素（quercetin）;化合物20,数据与文献20]对照一致,鉴定为山柰酚（kaempferol）;化合物21,数据与文献24]对照一致，鉴定为去氢荷叶碱（dehydro-nuciferine）;化合物22,数据与文献24]阳性，抑制率均大于50%,分别为（±）%,（士）%,（±）%,（±）%,（±）%,（±）%。

在这6个化合物中，有5个为黄酮类化合物，其中鼠李素-3-9-3-D-1比喃葡萄糖苷的抑制作用最强，超过了阳性对照Curcumint的（±）%。

不同浓度下化合物活性的测定有待进一步进行活性复筛。

　　体外其他活性筛选考察了化合物1~27对体外脂肪酶抑制活性、体外乙酰胆碱酯酶抑制活性和体外人胰岛淀粉样多肽抑制活性，以抑制率（％）表示抑制活性。

结果显示，体外脂肪酶抑制活性试样在质量浓度为

　　抑制活性试样在浓度为74mg?

L-1,体外人胰岛淀粉样多肽的抑制活性在浓度为?

L-1时，各试样的抑制率均<50%,因此认为无明显抑制作用。

　　5讨论

　　通过对化合物的分离鉴定发现，正丁醇萃取层中主要以黄酮类化合物为主要成分，且含量较大。

以往对荷叶的开发利用，主要利用了其生物碱类成分的活性，开发的新药及保健类食品也主要侧重于减肥降脂方面的功效。

而其所含有的大量黄酮类化合物成分的活性则开发的不够，如抗氧化，抑菌等活性。

淀粉样蛋白（S-amyloid,AS）

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