第一部分蔬菜农药残留的提取Word格式.docx

第一部分蔬菜农药残留的提取Word格式.docx

《第一部分蔬菜农药残留的提取Word格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第一部分蔬菜农药残留的提取Word格式.docx（19页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

硝基甲烷>

二氯甲烷>

氯仿>

苯>

甲苯>

二甲苯>

四氯化碳>

二硫化碳＞环己烷>

正己烷>

正庚烷>

煤油

在农药分析中应用最广的溶剂为石油醚、丙酮、二氯甲烷和乙酸乙酯等

2.农药的极性：

在提取样品中的农药残留时，农药本身的极性以及在提取溶剂中的溶解度，直接影响提取效果，一般采用和农药极性相仿的提取溶剂，即“相似相溶”原理，选择具有广泛覆盖面的溶剂作为农残提取溶剂。

部分有机磷的极性强弱如下：

氧化乐果>

敌百虫>

敌敌畏>

马拉流磷>

倍硫磷>

甲基对硫磷>

对硫磷>

甲拌磷>

溴硫磷>

辛硫磷

3.样品的状况：

样品的特点和状态，在提取时也必须认真考虑。

在AOAC中将样品分为脂肪性和非脂肪性两大类。

脂肪含量大于10%为脂肪样品，小于则为非脂肪性样品。

#脂肪性大的样品，需要先提取脂肪，而后测定脂肪中的农药残留量。

非脂肪性的样品又分为含水样品和干品两大类；

前者的水分含量≥75%，后者为干的或低水分样品。

含水分样品又分含糖多少分类：

含糖5%以下，含糖15~30%等几种.如下表示:

状态

脂肪

非脂肪

干品

含水样品

低糖

中糖

高糖

不同现状的样品,必须采用不同的提取溶剂。

在谷物、茶叶一类水分低的样品中，不同提取溶剂的提取效率的差异最为突出，即便采样极性溶剂也不能完全提取，必须采用含水20~40%的溶剂或预先向试样中加入等量的水之后再行提取。

土壤是个比较特殊的样品，是农药污染最大的受害者，许多农药较强的与土壤耦合，比动植物组织的提取更困难。

土壤的水分、有机质、极性化合物以及其他因素的不同对农药的结合也不同，一般粘土高沙土低。

3．农药残留的提取和纯化（净化）

在农药残留分析中，提取溶剂必须适用于具有不同含量的水分、油脂、糖分和物质的基质中，提取出具有各种极性的化合物。

为了提供合适的条件，使残留物从样品中转移到提取溶液中。

例如土壤、粮食等干燥样品彩一种或多种混合溶剂浸泡，经震荡或索氏提取；

中、高含水量的样品，需在高速捣碎机中，在一种或混合溶剂的存在下加以粉碎。

在通常情况下，蔬菜和水果用匀浆机或组织捣碎机提取。

1初步提取溶剂的体系

1.1丙酮提取法：

用于含多糖类样品中农药的提取，再用二氯甲烷经液-液分配转入二氯甲烷中。

在有机磷和有机氮多残留分析中已经广泛使用。

1.2乙腈提取法：

适用于一些农药，但若是水溶的农药时，采用二氯甲烷进行液-液分配。

1.3丙酮-正已烷混剂：

用于非极性化合物，极性有机磷和有机氮农药及其性代谢产物。

此外，也有报道采用乙腈-二氯甲烷、乙腈-氯仿、丙酮-二氯甲烷、丙酮-石油醚。

对于谷物、秸秤、茶、土壤等干燥样品，添加一倍水量后或用含水溶液提取，提取率比直接用极性溶剂要高得多。

2初步提取液的纯化（净化）

2.1液-液分配净化法：

液-液分配是一种常用的净化方法，基本原理是分配规律，根据农药与杂质在不同溶剂中溶解度的差别，常用一种非极性溶剂和极性溶剂对来进行分配，如：

丙酮-已烷、乙腈-乙烷（石油醚）、丙酮-二氯甲烷、二甲基甲酰胺-已烷等。

农药与脂肪、蜡质、色素等一起被正已烷提取后，再用一种极性溶剂，如乙腈与共同震摇，使农药与脂肪、蜡质、色素完全分开。

这样农药大部分被乙腈所提取，经几次提取，农药几乎可以完全与脂肪等杂质分离，从而达到净化的目的。

2.2弗罗里硅土柱层析方法：

弗罗里硅土柱层析净化方法在农药残留分析中已有广泛应用，而在多残留分析中常用极性不同的溶剂体系，把各种农药淋洗入不同的洗提馏分中，使农药得到分组分离。

MILLS等提出的淋洗体系为A、B、C3种极性依次增大的体系：

A液：

二氯甲烷：

正已烷（1：

4）B液：

乙腈：

正已烷（50：

0.35：

49.65）、C液：

正已烷（50：

1.5：

48.5）

THEIR的用石油醚：

二氯甲烷（4：

1）石油醚：

二氯甲烷（3：

3）二氯甲烷：

甲醇（19：

1）的淋洗体系，分离水果和蔬菜中的一些磷酸酯、有机氯、甲基氨基甲酸酯、苯基氨基甲酸酯和脲类农药。

黄士忠等研究采用二氯甲烷：

石油醚：

丙酮（6：

：

3：

1）预淋及二氯甲烷：

3.5：

0.5）淋洗，分离了土壤和粮食中10种有机氮，回收率81~103%。

4．农药残留的提取操作方法

1.震荡法：

将样品和溶剂装入具塞容器（具塞锥形瓶），放在震荡机上，进行往返震荡或旋转震荡。

定时开塞放气。

2.组织捣碎提取，将样品和溶剂装入组织捣碎机中，通过高速旋转的刀具掺合，使溶剂侵入样品组织中，与其残留农药充分接触，使残留农药提取出来。

本法提取效率高。

适用范围广，每次提取时间3~5分钟，提取次数1~2次。

3.索氏提取法:

将样品装入和提取器匹配的滤纸包好，然后用合适的溶剂反复提取。

回流液一定要浸泡整个试样。

本方法适用于干品，如谷物、干果、脱水蔬菜、茶叶、干饲料等。

4.消化法：

酸、碱消化法，条件是农药在酸、碱中稳定。

5.其它方法：

超志声波法、浸渍法、洗脱法等等

5．农药残留的净化技术

在样品的提取液中，除了农药残留外，还有色素、油脂或其他天然物质，在测定前须去除这些干扰物质，这就是净化。

由于农药种类不同，采用的检测器也不同。

各种检测器对净化液程度的要求也不互相间。

ECD放射源易受污染，对净化要求高，FPD对净化要求不高，采用简单的方法净化就可以了。

液-液分配：

在一组织不相溶的溶剂对中，溶解某一溶质成分，这种溶质以一定比例分配在溶剂的两相中。

在两相溶剂中的分配比称为分配系数。

如此反复分配，便可使不同的物质组分得到分离，从而达到净化的目的。

分配时溶剂体积及提取次数，必须根据P值进行计算。

P值指在一组等容积互不相溶的溶剂对，溶质以一定比例分配在溶剂的两相中，该比值即为该物质对该组溶剂的P值。

1乳化的解决：

溶液分配过程中，往往会出现乳化现象，如不很好的解决，会影响分析结果的准确性。

1.加入饱和硫酸水溶液：

由于溶液中有大量的硫酸钠离子存在，盐析作用可以使乳化层破坏，（也可以加入适量的氯化钠）。

2.加入1：

的硫酸水溶液，加入量由10毫升、20毫升、30毫升逐步增加，乳化可以减轻或消除，此法只适用于对酸稳定的农药。

3.采用高速离心，破坏乳化层，消化乳化现象。

4.根据样品的情况添加，如蜂蜜和炼乳类，可以加草酸钾，茶叶类的可加入丙酮或甲酸，含糖样品，可以加入丙酮。

2．在多残留分析中常用极性不同的溶剂体系，把各种农药淋洗入不同的洗提馏分中，使农药得到分组分离，然后测定。

1）的淋洗体系，分离水果和蔬菜中的一些磷酸酯、有机氯、甲基氨基甲酸脂、苯基氨基甲酸脂和脲类农药。

黄士忠等研究采用内径1.5厘米，长18厘米的玻璃层析柱，在柱底部填入少量玻璃棉，先装入4克无水硫酸钠，然后再将入5克处理过的弗罗里硅土，稍加打实，最上层加4克无水硫酸钠。

该柱先用30毫升二氯甲烷：

1）预淋，待预淋液面进入上层无水硫酸钠时，将待净化的浓缩液移入柱中，弃去收集的预淋液，待上液面接近上层无水硫酸钠时，先用50毫升含10%乙醚的石油醚淋，再用120毫升二氯甲烷：

1）淋洗，控制流速3~4毫升/分，收集二次淋洗液、浓缩、定容。

此法分离了土壤和粮食中10种有机氮类农药，其回收率为85~101%。

3．酸净化：

是化学处理净化的一种方法，它可以有效去除脂肪、色素和杂质。

此法只适用于对酸稳定的农药。

4．凝结净化法：

根据一些有机磷和有机氮农药对净化要求不严格和偏酸性条件下稳定的特点，采用凝结净化法进行净化。

在含有30%丙酮或乙腈提取液中加入10~13毫升的凝结液（20克氯化铵和85%磷酸40毫升溶于400毫升蒸馏水中配置，再稀释5倍）和1克助滤剂，振摇15~20次，静止5分钟，过滤，根据杂质和色素的含量，确定凝结的次数。

在滤液中加入适用氯化钠（防止乳化），用（50*3）毫升二氯甲烷萃取3次，合并有机相，浓缩、定容。

5．其它：

氧化铝层析法、活性炭和混合柱净化法等等

二、一般试剂的要求、纯化、活化和灭活

1.水：

取100毫升水，用10毫升石油醚提取，取5微升石油醚提取液，进行分析，在色谱图上，除石油醚溶剂峰外，无其他杂质峰。

2.中性氧化铝（层析用），在550℃灼烧4小时密封保存，用前于130℃烘5小时，储存于干燥器中备用。

3.弗罗里硅土（60~80目）在600~650℃灼烧3小时，用前于130℃烘5小时，储存于干燥器中备用。

弗罗里硅土（Florisil,硅镁吸附剂）是一种合成的硅酸镁，具有很大的表面积，活化3小时以上，然后放在干燥器中避光保存。

使用前最好再于130℃下活化过夜，至少加热5小时，用玻璃盖瓶后于130℃处保存或者置于干燥器中。

如在室温下保存2天后，需于130℃重新加热。

加2%水降活（按重量计）弗罗里硅土，既使用含有30%二氯甲烷的已烷液作为淋洗溶剂，可吸附1克油或脂肪。

如用含有10%二氯甲烷的已烷淋洗时，甚至可吸附2克油或脂肪。

弗罗里硅土活性的测定：

通常认为，1克硅酸镁将要吸附100毫克分子量为200的化合物，则活性比较合适。

选用月桂酸作为被吸附的物质。

月桂酸分子量在200左右，是固体，比较容易提纯，易溶于已烷中、用酸碱滴定法可以直接测定，操作步骤如下：

将2.000克弗罗里硅土放入25毫克标准磨口锥形瓶中，盖上铝箔，在130℃下加热过夜，加塞后冷却至室温，加20毫升月桂酸溶液（内含月桂酸400毫克），塞好后间歇地振荡15分钟。

等吸附剂沉下后，吸取上清夜10.0毫升，移入125毫升锥形瓶中。

吸取的上清夜中不应带入弗罗里硅土。

加入中性酒精50毫升和酚酞指示剂3滴。

用0.05氢氧化钠溶液滴定至终点。

称取100～200毫克月桂酸，在相同条件下，用0.05N氢氧化钠溶液进行滴定。

确定每毫升0.05N氢氧化钠溶液所相当的月桂酸毫克数，则每克弗罗里硅土所吸附的月桂酸值按下式计算:

每克弗罗里硅圭所吸附的月桂酸的毫克数（月桂酸值）=200-（滴定的0.05N氢氧化钠的毫升数*每毫升0.05N氢氧化钠溶液所相当的月桂酸毫克数）

4.硅胶（60~120目）630℃2小时,冷却至50~60℃3-5%水振摇,密封保存。

进柱），柱头顶到头，在拉出1MM，用手拧上，在用扳手板1/8圈。

卸下检测器（FPD）死堵，装上螺母和石墨密封垫（柱头尽量朝下，防止碎屑进柱），柱头留15.3CM，用手拧上，再用板头扳1/8圈。

老化：

连接检测器一端柱头取下，死堵装上。

增加新柱用CHANGE

校正，由于柱子经常被截，需要重新设置长度等参数时用CALIBRATION

5．GC参数

3个温度1个速度-进样口、柱温、检测器：

载气流速

建立方法-GC配置进样-进样口温度-柱子气流-炉温-检测器-AUX辅助设备-信号。

设置完毕APPLY不能OK否则会从当前界面退出，方法存盘；

从资源管理器删除。

6．洗针溶剂：

丙酮、甲醇，进行前针可以不用溶剂洗

溶剂不能空，废瓶不能满

7．毛细管恒压模式，基线稳定，不会过度漂移。

温度上升基经上移，流量降低基线下降，因而基线不变。

8．状态STATUS（机看，电脑看-VIEW设置），按instumenttoolbar中的STATUS出现状态柜。

9．安捷伦6890N工作站怎么修改文件的保存路径？

Configuration

二．样品信息

1.无样品盘，前进样序号从101始，后进样序号从201始；

有样品盘，进样序号从1始。

2.进样：

方法-样品-单针样品信息⊙PREFIX（共8位）--序列进样序列参数SEQUNCEPARATEN⊙AUTO，注意inj/location表示在vial?

位置上进样？

次

3.FPD扳手试焰，有白雾，不能与其接触，防止静电破坏。

点火后须平衡30分钟。

OFFSET点火补偿值（点火是否成功判定值）一般为2~5

4.移进样塔前从工作站退出，关GC。

三．数据分析

1.调用图谱

FILE—LOADSIGNAL

2.重新绘图

GRAPHIC---SIGNALOPTIONS（5V）RANGES

LAYOUTOVERLAIDSCALEALLTHESAMESCALE

3.积分参数

INTERGRATION—INTERGRATIONEVENTS

SLOPESE斜率敏感度100

PEAKWI峰宽，尽量保持原始，不要调。

AREARE面积拒绝

HEIGHRE峰高拒绝

调出一行或几行及ONOFF表示从第几分钟到第几分钟图谱积分或不积分，可以不对溶剂峰积分，按两次确认，退出；

将图谱设置成可输出的结果。

4.建立校正（一个方法中只能有一个校正表）

调出标准品图谱，根据保留时间定性，峰面积定量（一个峰至少含15点，峰宽越细，采集点要多）。

5.无水硫酸钠（分析纯），在700℃灼烧4小时，密封保存。

6.脱脂棉，将脱脂棉发入大号索氏提取器中，加4%丙酮-正已烷，在水浴上回流4小时后，在通风橱内让其自行挥发干

7.溶剂：

取300毫升溶剂，放入旋转蒸发器中浓缩近干（约1毫升），取1微升注入GC，在色谱图上，除溶剂峰外，无其他杂质峰。

提纯方法很复杂，建议直接购买农残级试剂使用。

石油醚沸程为30~60℃主要该60~90℃90~120℃，其主要成分为脂肪族烃类的混合物；

丙酮沸程为55~57℃；

乙酸乙酯沸程为76.5~77.5℃；

乙腈沸程为81~82℃，可与水、醇和醚任意混合，毒性很大；

二氯甲烷39~41℃；

甲醇64~66℃

三、提取效果的评价

在实验室中，一般对提取方法的评价是通过添加回收实验来量化的。

一般固定“净化”和“测定”条件，而变换前面的“提取”条件，来比较“提取”效果的。

不足的是比真正的提取率要高。

还有一种完全提取法，采用与农药极性相似的提取溶剂，长时间索氏提取。

然后与选择的方法对比。

如果两种方法的结果相近，则认为所采用的提取方法有效。

采用同位素的化学性质一致性的原理，把农药分子中的原子换成放射性同位素，使农药带上标记，此方法有直接了解提取的效果。

国内使用不多。

1．最低检出浓度：

也叫最低检出限，表示用添加法能可靠地实际检测出待测农药的最低含量（以mg/kg），最低检出溶度必须低于或等MRL值。

以色谱法为例，最低检出浓度与最小检出量、样本溶液定容体积、样本溶液进样体积、称样重量相关，以下式表示。

最低检出浓度（mg/kg）=最小检出量（mg）*样本溶液定容体积（ml）

样本溶夜进样体积（ul）*称样质量（g）

根据检测目的衡量检测方法最低检出浓度是否符合要求，若为了与规定的最高残留量（MRL值）比较，以判断被检样本残留量是否超标时，一般要求最低检出浓度低于MRL值一个数量级（10倍）即可。

若规定的MRL很低（小于或等于0.05mg/kg）时，则最低检出浓度小于或等于MRL值即符合要求，最低检出浓度与规定的MRL值的关系见下表。

最低检出浓度（mg/kg）

0.001

0.005

0.01

0.02

0.04

0.1

0.2

0.5

1.0

MRL值（mg/kg）

0.05

1

2

5

10

2.回收率　用添加法测定回收率，原则不添加浓度以接近待测样本的农药含量为宜。

但由于待测样本中的农药残留量是未知的，因此，一般以该样本的最高的残留量（MRL值）和方法最低检出浓度10倍的浓度做添加浓度。

若没有MRL值与最低检出溶度之间的浓度作为添加浓度，即添加回收率试验必须选3个添加浓度。

若没有MRL值参照时，以最低检出浓度和高于最低检出浓度10倍的浓度做添加回收率，每一个浓度进行3次以上的重复试验。

添加回收率结果应以接近100%为佳，但由于杂质干扰，操作误差等诸多因素的影响，实际结果会有很大偏差，添加回收率70~110%，平均回收率>

80%为满意结果。

不同添加浓度要求回收率范围如下。

添加浓度/（mg/kg）回收率/%

>

0.180~110

0.01~0.170~110

0.001~0.0160~120

<

0.00150~120

3.相对标准偏差（RSD）或变异系数：

是标准偏差在平均测定值中所占的百分率，也叫变异系数。

在进行添加回收率实验时，对同一浓度的回收率试验必须进行至少三次重复。

平均实验结果偏差与添加浓度相关，添加浓度愈低，允许偏差愈大，不同添加浓度回收率实验所要求的相对标准偏差如下。

添加浓度/（mg/kg）相对标准偏差/%

1~1010~25

0.1~125~50

0.01~0.150~100

相对标准偏差计算公式如下。

∑（检测值-平均检测值）2

相对标准偏差（RSD）=检测次数-1（n-1）×

100%

平均检测值（X）

4．确证实验：

报告检测结果之前应需进行确证实验，以免做出错误结论。

对待测农药进行定性定量的方法有以下几种：

（1）改变测定条件或方法（如色谱法改用光谱法）；

（2）改变检测器；

（3）改变色谱柱；

（4）薄层析法；

（5）衍生化法；

（6）气-质或液-质联用技术；

（7）生化测定技术（酶抑帛法、酶联免疫法）等，可根据检测目的和待测农药种类以及实验室的仪器条件和技术专长等选择有效的确证方法。

第二部分GC6890N入门知识

一．硬件设置

1．开关机

开：

电脑—GC—工作站（2070AA）

关：

（前所有温度，不关炉子ON，否则风扇停止，FPD关FLAME）工作站—GC—电脑FPD250℃设置温度到，30MIN后通空气100H275，再用FLAME，然后APPLY点火。

2．TCP/IP

电脑、工作站：

10.10.10.1

255.255.255.255.0

GC：

10.10.10.2

3．安装工作站见教材。

4．气路

气路气化（5A分子筛吸附有机物）、ECD一定要脱氧管、脱烃类可用于空气气路，气体发生器还要考虑环境空气质量，铜管：

溶剂清洗，内壁吹干，两头封闭，待用。

每三瓶气后换脱氧管，4-6个月连接管线要紧固，防止四季温差影响密封性。

载气管路压力60~100Psi隔垫吹扫，解决鬼峰，2-3ml/min,每台仪器固定的。

流量控制模式（填充柱），压力模式（毛细管柱），针尖碰不到玻璃毛，液体在玻璃毛上汽化；

*手动进样：

按Prerun、进样、按START。

不分流进样的条件：

1.溶剂沸点在所有组分中最低，柱温起始温度小于溶剂沸点20℃2.组分沸点比溶剂高3.气体不能作不分注流。

调整分流放空时间，确保不拖尾，绘制曲线寻找峰面积稳定，溶剂峰与组分峰分开，而且是组分峰最好为BB。

装柱：

挂好柱架，柱子标牌在里面，文字目视方向正常，挂于柱架上；

卸下进样口死堵，装上螺母和石墨密封垫（柱头尽量朝下，防止碎屑进柱），柱头留4—6cm，用手拧上，再用扳手扳1/8圈。

卸下检测器（ECD）死堵，装上螺母和石墨密封垫（柱头尽量朝下，防止碎屑）

外标法ESTD内标法ISTD

单级校正

CALIBRATON

NEWCALIBRATONTABLE

⊙AUTO禁止手动

CALIBRATONSETTING（修改浓度单位ug/mL保留时间窗口少用MINUTES多用百分比，百分比的设定，最低检测浓度和最高检测浓度分别进几个标样，平均各组分的保留时间，比较同一组分的保留时间的差别，计算百分比，设定时间窗口，此后的同一组分均应落于此时间窗口内，否则异常，须重新处置），在建立校正表时选定参考峰也是解决保留时间漂移的良策。

CALIBRATONTABLE查看校正好的表，按OK退出。

多级校正

调出标准品图谱，

同一水平（浓度）取平均RECALIBRATON

不同一水平（浓度）ADDLEVEL

调出其它STD图谱。

预览前要看REPORT是否为ESTD

5.报告输出

REPORT

SPECIFYREPORT

⊙SCREENSAMPLE运行结果至荧屏。

报告格式

SHORT经济

DETAIL含校正曲线和方程

PERFORMAMCE（效率）含塔板数及分离度。

⊙ADDCHO表示打印内容有图谱。

CHOSIZE可以改变图谱大小，节约纸张。

四、维护

1．进样口

进样隔垫，一般30-50个进样换一次，新隔垫用手拧紧至C形环不跟转，切勿用扳手。

衬管，不分流，一般不用玻璃毛，不分流防止碎！

一般一个月一次，用手拧，

注意螺纹，不用扳手，最后可用扳手适当拧紧。

ALS自动进样用筒形，人工进样为锥形。

2．衬管

清洗石英衬管可用5%的稀盐酸浸泡放置超声波清洗机超20分钟，然后用脱脂棉通几次即可（注意要用蒸馏水多次冲洗、烘干）。

Liner的去活化方法论Liner的玻璃管内部，如无水质柄的棉花棒，则一般的塑胶枘的棉花棒则只可用肥皂水中刷洗，最后冲洗干净，干燥后进行去活化的步骤：

干燥后Liner先用玻璃吸管吸取甲醇冲洗，反覆数次，然后溶剂换成EA（ethylacetate乙酸乙酯），以玻璃吸管吸取冲洗Liner，最后把溶剂换成n-hexane（正已烷）重覆前面所述的步骤，要注意的是溶剂使用顺序不可以变动！

将二氯二甲基矽烷和甲苯以1:

9的体积混合，并以表面皿加盖，需注意盛世装这个混合液的玻璃容器，本身也会与前述的混合液反应，故在使用后会有一段时间其容器内部会呈现疏水性质，将前面以n-hexane洗干净的liner放入其中，要注意在liner的管壁上绝对不可以出现气泡，当所有的liner都放好后，盖上表玻璃，于通风厨中静默1-2小时，将反应完成之liner取出（每次一支，其余的浸泡在反应剂中，绝对不要一次将所有的liner拿出来暴露于空气中）。

先以n-hexane是要洗掉未反应的二氯二甲基矽烷，而最后的甲醇是要和在已经和玻璃表面反应的二氯二甲基矽烷，另外的确一个CI基反应（endcap），所以如果顺序搞错的话是很凄惨的事情……上面的步骤结束后，可以将liner置于高温烘箱中，在300度下烘一个晚上！

隔天早上取出时，须于干燥皿或烘箱中降温，而不要于空气中，这样你的liner会很快速的开始吸收水气，最后将liner置放于防潮箱中保存，反应的副产物是气态HCL，要全程在抽气厨中操作，二氯二甲基矽烷会与空气中的水分反应，注意存放的条件。

衬管填放硅