两种检测苏丹红方法的比较.pdf

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两种检测苏丹红方法的比较两种检测苏丹红方法的比较ComparisonComparisonbetweenbetweentwotwomethodsmethodsaboutaboutanalysisanalysisofofcolorantscolorantssudansudan张全美1王守卿2王循广1ZHANGQuan-mei1WANGShou-qing2WANGXun-guang1（1.淄博市产品质量监督检验所，山东淄博255033；2.莱阳农学院，山东青岛266109）（1.ZiboInstitueofProductQualitySupervisionandInspection,Zibo，Shandong255033，China;2.LaiyangAgricultureCollege,Qingdao,Shandong266109，China）摘要：

摘要：

以酱瓜为材料，比较两种分离检测苏丹红方法的优与劣。

实验结果表明：

国标法不能回收检测出标样苏丹红3号，欧盟法可以较好的回收检测出标样苏丹红3号的含量。

关键词：

关键词：

酱瓜；苏丹红；国标法；欧盟法Abstract:

Inthisstudy,twomethodsofanalyzingcolorantssudanwerecompared.TheresultsshowedthatteststandardofChinacannottestsudan,butteststandardofEuropeanCommissioncanbettertestsudan.KeywordsPickledcucumbers;Sudan;TeststandardofChina;TeststandardofEuropeanCommission苏丹红是一种人工合成的偶氮类、亲脂性的化工染色剂，常见有4种，其中2号（Sudan）、3号（Sudan）和4号（SudanIV）均为1号的化学衍生物。

苏丹红1号为暗红色；2号为红色；3号（SudanIII）为有绿色光泽的棕红色；4号为深褐色。

化学名称分别为1-苯基偶氮-2-萘酚（1-phenylazo-2-naphthalenol）、1-（2,4-二甲基苯）偶氮-2-萘酚（1-（2,4-dimethylphenyl）azo-2-naphthalenol）、14-（苯基偶氮）苯基偶氮2-萘酚（14-（phenylazo）phenylazo）-2-naphthalenol）、12-甲基-4-（2-甲基苯）偶氮苯基偶氮2-萘酚（12-methyl-4-（2-methylphenyl）azophenylazo）-2-naphthalenol）。

1896年科学家达迪将其命名为苏丹红并沿用至今。

苏丹红被大量地用在工业、化学和医学领域，用于机油、汽车蜡和鞋油等工业产品，以及生化毒理学研究的着色剂等。

由于“苏丹红1号”是具有较强毒性的致癌物，国际癌症研究机构（IARC）将其归为三类致癌物1。

1995年，欧盟和其他一些国家已开始禁止在食品中添加苏丹红1号；我国1996年出台了食品添加剂使用卫生标准，禁止将苏丹红1号作为食品添加剂用于食品生产。

在我国将苏丹红列为食品禁用物之后近10年，中国从来没有查过苏丹红，连认定苏丹红的方法和标准都没有。

2005年2月18日，英国食品标准局披露，359个品牌的食品因被怀疑含有致癌色素“苏丹红1号”而从各大超市和商店下架，至此，我国掀起了追缴苏丹红的风暴。

但直至3月底，我国才紧急出台了苏丹红的检测标准（GB/T19681-2005）2。

文章就此标准和欧盟的苏丹红检测标准3在分析效率和分析成本方面做了比较。

作者简介：

作者简介：

张全美（1979-），女，淄博市产品质量监督检验所助理工程师、硕士。

E-mail:

收稿日期：

收稿日期：

2005-09-161材料与方法材料与方法1.1仪器设备与试剂仪器设备与试剂苏丹红标准品：

安谱科学仪器有限公司；乙腈、甲醇、丙酮：

色谱纯；甲酸、乙酸、正己烷、无水碳酸钠、氯仿：

分析纯；层析氧化铝：

中性100200目；waters高效液相色谱（配紫外检测器）、超声振荡器、超真空过滤器、离心机。

1.2色谱条件色谱条件色谱柱：

symmetryC185m4.6mm150mm；国标法1流动相：

溶剂A：

0.1%甲酸的水溶液：

乙腈=85：

15；溶剂B：

0.1%甲酸的乙腈溶液：

丙酮=80：

20；时间程序：

开始时A25%，第10min时A25%，第25minA0%，第32minA0%，第35minA25%，第42minA25%。

流速：

1mL/min；柱温：

30，基线稳定后开始进样；欧盟法2流动相：

溶剂A：

酸性水溶液（165mL乙酸溶于1000mL水中）；溶剂B：

乙腈；时间程序：

开始时A30%，第20min时A5%，第30minA0%，第42minA0%，第45minA30%，第50minA30%，流速：

0.7mL/min；柱温：

30，基线稳定后开始进样。

检测波长：

苏丹红1号478nm；苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号520nm；于苏丹红1出峰后切换。

进样量10L。

1.3样品处理样品处理1.3.1国标法样品处理氧化铝处理：

105干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中分别加入1，2，3，4，6mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。

样品处理：

取粉碎样品20g（准确至0.01g）于三角瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆5min，滤出清液，再以20mL正己烷2次匀浆，过滤。

合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。

控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用1030mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45m有机滤膜过滤后待测。

1.3.2欧盟法样品处理样品处理：

称取20g（准确至0.01g）粉碎样品于三角瓶中，用量筒加入100mL乙腈。

之后用漩涡混合器充分混合数分钟，再于振荡器上振荡1h后经0.45m滤膜过滤于三角瓶中。

1.4标准曲线标准曲线国标法1：

标准样品处理：

称取苏丹红1号、2号、3号、4号各5mg，乙腈溶解并转移于100mL容量瓶中定容，再从中取0,0.4,0.8,1.6,3.2mL分别移入50mL容量瓶中以乙腈定容，此时标准系列的浓度分别为0,0.4,0.8,1.6,3.2g/mL。

欧盟法：

标准样品处理：

称取苏丹红1号、2号、3号、4号各30.0mg，乙腈溶解并转移于100mL容量瓶中定容，再从中取0,0.1,0.3,0.6,0.9mL移入100mL容量瓶中以乙腈定容，此时标准系列的浓度分别为0,0.3,0.9,1.8,2.7g/mL。

2结果与分析结果与分析2.1标准样品谱图标准样品谱图从图1、图2可看出，欧盟法2的出峰时间比国标法1晚，国标法24min完成一个样品，欧盟法233min完成一个样品。

但两种方法都能将四种物质分开，分离效果没有明显差别。

从使用的有机流动相来看，国标法1使用丙酮、乙腈、正己烷，欧盟法2仅使用一种有机流动相乙腈，试剂准备过程相对容易。

国标法1需要使用10种试剂，而欧盟法2仅需要5种试剂。

AU0.0000.0050.0100.015Minutes0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.00苏丹1-6.080苏丹2-8.846苏丹3-10.302苏丹4-23.107图1国标法标准样品谱图AU0.0000.0100.0200.030Minutes0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.00苏丹1-13.72016.948苏丹2-21.282苏丹3-26.779苏丹4-32.852图2欧盟法标准样品谱图2.2回收实验比较回收实验比较2.2.1国标法1中曾注明不同厂家不同批号的氧化铝活性有差异，需根据购置的氧化铝产品做活度调整。

因此本实验根据标准做了5个活度实验，即105干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中分别加入1,2,3,4,5mL水降活，混匀后密封，放置12h后检验其活度，见表1。

实验结果表明，活度实验2对苏丹1、2、4的回收最好，但5个活度实验都不能回收苏丹3号。

回收实验见图3，它同国标法标准样品谱图（图1）相比，在15.6min处多了一个峰。

表1回收率%国标法活度实验回收率欧盟法活度实验1活度实验2活度实验3活度实验4活度实验5回收率苏丹173.02.188.01.786.32.568.31.547.01.787.71.5苏丹278.02.185.01.583.61.574.31.217.62.183.71.2苏丹30.00.00.00.00.00.00.00.00.00.082.31.5苏丹472.02.584.02.082.31.253.62.324.02.679.72.1数值为平均值标准差AU0.0000.0010.0020.003Minutes0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.00苏丹1-6.101苏丹2-8.93515.469苏丹4-23.975图3国标法回收谱图2.2.2欧盟法回收实验分别称取20g（准确至0.01g）酱瓜于三角瓶中，加入苏丹红1、2、3、4号各50g，搅拌均匀，放置过夜后用量筒加入100mL乙腈回收提取。

图4表明回收率高于78%，回收效果较好。

AU0.0000.0010.0020.0030.004Minutes0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.00苏丹1-13.711苏丹2-21.272苏丹3-26.778苏丹4-32.888图4欧盟法回收实验谱图2.3酱瓜中苏丹红含量酱瓜中苏丹红含量国标法1，见图5。

测的苏丹红1、2、4号的含量分别为0.69,1.07,0.29mg/kg，欧盟法2见图6。

测的苏丹红1、2、4的含量分别为0.69,1.09,0.31mg/kg。

二者测的结果没有明显差异。

AU0.0000.0010.002Minutes0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.00苏丹1-6.248苏丹2-9.07416.169苏丹4-25.547图5国标法测酱瓜谱图AU0.00000.00050.00100.00150.0020Minutes0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.001.927苏丹1-13.72516.594苏丹2-22.257苏丹4-32.891图6欧盟法测酱瓜谱图2.4检出限检出限本实验结果表明两种方法的检出限没有差异，均为10g/kg。

3结论结论本实验从两种方法使用的流动相、样品的回收率来比较了二者的分离分析效率，以探讨二者的优与劣，实验结果表明，两种方法各有其优缺点。

国标法1的谱图出峰时间较快，每完成一个样品比欧盟法2提早9min，但测样品时往往因为氧化铝的原因不能测出苏丹红3号，每换一批次的氧化铝就得做回收率实验，有时换好几个批次也不一定成功，两种流动相需由四种物质不同比例配成，而欧盟法2的流动相相对简单，只用一种有机溶剂，不用做繁杂的氧化铝柱实验。

对于含复杂基质本底的样品来说，过氧化铝柱后有可能将干扰物质除去，欧盟法2有可能因为干扰而无法定性定量其中的苏丹红4,5。

由此可见，氧化铝在国标法1中起了重要作用，因此，提高氧化铝回收效果的研究就显得尤为重要。

综合考虑，目前来说，还是欧盟法2的效率较高。

从分析成本考虑，有机溶剂价格较高，色谱纯的更贵，国标法1中需大量使用有机溶剂，还需要其它的多种试剂，因此，欧盟法2分析成本相对低廉。

国标法1的紧急出台为我国检测苏丹红提供了重要的技术支持，但是它存在的弊端不容忽视，在目前快速发展的社会经济条件下，快速高效检测方法的出台更为必要，这还有待于广大研究者们的共同努力。

参考文献参考文献1ShigekiHatakeyama,YayoiHayasaki,MakihikoMasuda,etal.MechanismformousestraindifferencesintheprotectiveeffectofSudanIIIagainsttheinvivogenotoxicityofdimethybeznzJ.AnthraceneToxicologyLetters,1996（89）：

231239.2GB/T19681-2005，食品中苏丹红染料的检测方法-高效液相色谱法s.国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会,2005.303/99，新方法声明-辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析s.欧盟委员会,1999.4AGhanadzadeh,MSZakerhamidi,HTajalli.ElectricLineardichroismstudyofsomeSudandyesusingelectroopticandspectroscopicmethodsJ.JournalofMolecularLiquids,2004（109）：

143148.5FCapitan,LFCapitan-Vallvey,MDFernandez,etal.DeterminationofcolorantmattersmixturesinfoodsbysolidphasespectrophotometryJ.AnalyticaofChimicaActa,1996（332）：

141148.