罗丹明B最新检测方法.doc
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罗丹明B最新检测方法
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罗丹明B检测套装：
固相萃取柱：
HiCapt罗丹明B专用柱（500mg/6mL，订货号：
25-05006）
液相色谱柱：
HisepC18-T 150mm×4.6mmi.d.,5μm（订货号：
0246150）
罗丹明B又称玫瑰红B,是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。
曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明B会致癌，现在已不允许用作食品染色。
然而,仍有不少食品生产企业将其作为食用色素。
因此，建立快速可靠的检测方法非常重要。
维泰克科技成功开发了罗丹明B专用SPE柱，建立了罗丹明B的快速检测方法和实验室液相色谱检测方法，该方法快速、简单、溶剂用量少，回收率稳定重现，克服了传统方法中氧化铝固相萃取柱活性不易控制，方法回收率难以保证等缺陷。
方法的优势：
·专利创新的罗丹明B专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰
·回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷
·方法简单、快速、节省溶剂
现场快速检测
1.样品提取：
1.1 辣椒粉 取辣椒粉一小勺（约1g）放入10mL离心管中，加入6mL提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:
1，v/v）），涡混1分钟，静置，待上层液较为清澈，取上清液3mL，准备过SPE柱。
1.2 辣椒油 取辣椒油一小勺（约0.5g）放入5mL离心管中，加入3mL提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:
1，v/v）），涡混1分钟，准备过SPE柱。
2.过固相萃取（SPE）柱：
HiCapt罗丹明B专用SPE柱（500mg/6mL）
将1.1或1.2中准备的样品慢慢倒入小柱中，然后取3mL甲醇慢慢倒入小柱，含罗丹明B的样品在柱上部会出现红色条带，在紫外灯照射下为颜色明亮的桃红色荧光色带，条带边缘清晰，粉红色随含量的增加而加深和加宽，不含或者含量极低（低于0.1μg/g，罗丹明B的着色下限）的罗丹明B的样品，提取液不会出现粉红色条带。
发现罗丹明B的阳性样品需进行液相色谱实验确证。
液相色谱检测方法
1实验部分
1.1液相色谱条件
色谱柱：
HiSepC18（4.6mmX15cm，5μm）
流动相：
甲醇/20mM甲酸铵溶液（用甲酸调pH2.5）=7/3（v/v）
流速：
1mL/min 进样量：
20μL
检测器:
紫外UV/VIS）检测器 检测器波长：
550nm
1.2标准溶液的配制
称取50mg罗丹明B于50mL棕色容量瓶，用甲醇定容，即为1mg/mL。
接着取母液500μL于50mL棕色容量瓶，用提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:
1，v/v））稀释到50mL，即为10μg/mL，作为储备液于4℃避光保存，且每周重新配制。
每天所用的溶液是将储备液稀释为0.2-5μg/mL。
1.3样品前处理
1.3.1样品提取：
1.3.1.1辣椒粉 取辣椒粉1.0g，放入10mL离心管中，加入6mL的提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:
1，v/v）），涡混1分钟，超声10分钟，接着10000r/min离心5分钟，取上清液3mL，准备过SPE柱。
1.3.1.2辣椒油 取辣椒油0.5g，放入5mL离心管中，加入3mL的提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:
1，v/v）），涡混1分钟，准备过SPE柱。
1.3.1.3腊肠、果脯等食品将食品切成小丁，再称取1.0g,放入10mL离心管中，然后步骤同2.3.1.1。
1.3.2固相萃取柱净化：
HiCapt罗丹明B专用柱（500mg/6mL）
（1）活化：
在HiCapt罗丹明B专用柱中依次加入2mL提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:
1，v/v））活化。
（2）萃取：
将待净化液加入柱中，再用200μL提取液（乙酸乙酯/环己烷（1:
1））淋洗样品管，一并加入SPE柱中，让其自然地流过萃取柱。
流出液弃去。
（3）清洗：
待上样液完全流出后，用3mL甲醇淋洗，淋洗液弃去。
（4）解吸：
3mL5%氨水的甲醇溶液解吸，用5mL的小样品管收集解吸液。
（5）吹干及定容：
解吸液50℃氮气吹干，加入200μL流动相溶解并定容。
2结果与讨论
2.1标准曲线与检出限
将10μg/mL的罗丹明B储备液用流动相逐级稀释，配制1、0.5、0.2、0.1、0.05μg/mL标准溶液，制作标准曲线。
由表1可见，罗丹明B的线性关系良好，相关系数的平方为0.99999。
以性噪比的3倍和10倍分别计算检出限（LOD）和定量限（LOQ）,分别为16ng/g和53ng/g。
表1线性回归方程、LOD及LOQ
分析物
线性范围
线性回归
LOD[ng/g]
（S/N=3）
LOQ[ng/g]
（S/N=10）
a
b
r2
罗丹明B
0.05-2
237178.95
-1088.02
0.99999
16
53
*y=ax+b,y=peakarea,x=massconcentration[μg/mL]
2.2回收率和精密度
分别加入低、中、高3种质量浓度的罗丹明B标准溶液于辣椒油样品中，然后按照本实验方法进行测定，回收率为84.14%-88.23%（见表2）。
图1为添加罗丹明B的辣椒油样品的色谱图。
从该图可以看出，没有杂质干扰。
且该方法具有较好的日内及日间精密度（见表2），其标准偏差分别小于4.73%和3.47%。
表2方法的回收率和日内、日间精密度
分析物
添加水平（μg/g）
回收率（%）
RSD%
日内（n=5）
日间（n=3）
罗丹明B
0.02
85.54
4.73
3.47
0.1
84.14
1.71
1.33
0.5
88.23
1.61
1.71
图1.经固相萃取净化后的加标辣椒油的色谱图
（a.空白辣椒油；b.辣椒油中添加0.02μg/g罗丹明B；c.辣椒油中添加0.1μg/g罗丹明B；d.辣椒油中添加0.5μg/g罗丹明B）
2.3实际样品分析
按本方法测定不同来源的辣椒粉、辣椒油、香肠、果脯、甜辣酱等共17件。
其中从b辣椒粉中检出罗丹明（图2），经LC-MS/MS检测，确证为阳性。
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