F7000荧光分光光度计操作规程.docx
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F7000荧光分光光度计操作规程
日本日立F-7000荧光分光光度计基本操作规程
1、开机顺序
(1)开启计算机。
(按图中圆圈按钮)
(2)开启仪器主机电源。
按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮(POWER)。
(按下图中圆圈按钮)
(3)观察主机正面面板右侧的XeLAMP和RUN指示灯依次亮起来,都显示黄绿色。
XeLAMP灯先亮,RUN灯后亮。
2、打开运行软件。
(1)双击桌面图标
(FLSolution2.1forF-7000)。
主机自行初始化,扫描界面自动进入。
(2)初始化结束后,须预热15-20分钟(若要进行定量分析,须预热30分钟以上,按界面提示选择操作方式。
3.点击右上角Method,进行方法设置。
若要预扫描,可选择3-Dscan(如下图).设置好方法后(见下图),再点击右上角PreScan(如上图),
在InstrumentMonitor菜单(见下图)的Datamode中选择Fluorescence,在EXStartWL中输入激发波长200,EXEndWL中输入激发波长500,在EMStartWL中输入发射波长210(有利于保护检测器),在EMEndWL中输入700(nm),为节约扫描时间,扫描速度Scanspeed可设置为30000。
点击update,可知扫描需要多少时间。
EXslit和EMslit一般选择5.0(若荧光强度太弱,可提高该数值,若强度太高,可降低该数值),PMTVoltage(电压)中可选择700(若荧光强度太弱,可提高该数值,若强度太高,可降低该数值),PMTVoltage0-1000v前面的方框打勾后,可在上面的PMTVoltage中随意填写电压值。
在Response中选择Auto。
在Processing菜单中(见下图)的YAxis中的Max中填5000或10000,Min中填0。
Contour中填写10,在opendataprocessingwindowafterdataacquisitior前打勾。
再点击右上角PreScan(如下图),进行预扫描。
然后选择图谱中颜色最浓、最深、纵坐标最高的漩涡中心点,点击这个中心点,即可出现最佳激发波长、最佳发射波长及强度。
若中心点太密,看不出(如上图),可点击右键,选择scale,将contour由10.00改为100。
再点击确定。
即可出现下图情况:
点击纵坐标最高的漩涡中心,如上图和下图,在左上角即可出现最佳激发波长(EX)、最佳发射波长(EM)及强度。
待预扫描结束后,可再次点击Method,进行重新设置,在General菜单的Measurement中选择Wavelengthscan(如下图);
在InstrumentMonitor菜单(见下图)的scanmode中选择Emission,Data中选择Fluorescence,在EXWL中输入预扫描中得到的最佳激发波长,在EMStartWL中输入比最佳激发波长大10nm的数据(有利于保护检测器),在EMEndWL中输入700(nm),Scanspeed中选择240或1200,EXslit和EMslit一般选择5.0(若荧光强度太弱,可提高该数值,若强度太高,可降低该数值),PMTVoltage(电压)中可选择700(若荧光强度太弱,可提高该数值,若强度太高,可降低该数值),PMTVoltage0-1000v前面的方框打勾后,可在上面的PMTVoltage中随意填写电压值。
在Response中选择Auto,在Replicates中选择1,在Cycletime中填0。
在Processing菜单中(见下图)的YAxis中的Max中填1000或2000或10000(可根据预扫描结果的荧光强度值填写Y轴荧光强度的最大值),Min中填0。
Contour中填写10,在opendataprocessingwindowafterdataacquisitior前打勾。
4.点击右上角SampleABC,进行数据存储模式及途径设置(见下图)。
5.点击上图右上角Measure,即可对样品进行测试,测试完后在图谱右上角点击report,再点击文件菜单“另存为”,可将图谱数据另存为excel格式。
6.96微孔板的操作,先安装相关装置,安装后(见下图)图中画圆圈的支架突出部分要压住它边上按钮。
开机后在空白图谱上面可见MPR菜单(见下图),点击该按钮。
出现下图情景
点击Datasave,可设置数据格式及存储路线(如下图)。
点击上图中的Exchangeposition,放微孔板的支架会跳出来,然后可放入装有样品的微孔板,左下角为A1位置(见下图)。
选择图中有样品的比色皿,如下图,点击Sampleset,可出现黄色背景,若点击Reset,可取消设置,黄色背景消失。
可选择某一个样品进行预扫描(设置方法同上面叙述过的方法一样),根据预扫描结果,再对方法进行设置(设置方法同上面叙述过的方法一样),对批量样品进行测试。
7、关机顺序(逆开机顺序实施操作):
(1)关闭运行软件FLSolution2.1forF-7000。
(2)关闭仪器主机电源。
(3)关闭计算机。
注意事项
(1)注意开机顺序。
步骤1-
(2)若是未先开主机,则程序会抓取不到主机讯号。
(2)注意关机顺序。
(3)为延长仪器使用寿命,扫描速度、负高压、狭缝的设置一般不宜选在高档。
(4)关机后必须半小时(等氙灯温度降下)方可重新开机。
F-7000荧光分光光度计使用操作步骤
1、开机:
(1)开启计算机。
(2)开启仪器主机电源。
按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮(POWER)。
同时,观察主机正面面板右侧的XeLAMP和RUN指示灯依次亮起来,都显示绿色。
2、计算机进入WindowsXP视窗后,打开运行软件(如图1)。
(1)双击桌面图标
(FLSolution2.1forF-7000)。
主机自行初始化,扫描界面自动进入。
(2)初始化结束后,须预热15-20分钟,按界面提示选择操作方式。
图1FLSolution2.1扫描界面
3、测试模式的选择:
波长扫描(wavelengthscan)
(1)点击扫描界面右侧“Method”
。
(2)在“General”选项中的“Measurement”选择“wavelengthscan”测量模式,如图2。
图2Method--“General”选项的界面
(3)在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数,如图3。
图3Method---“Instrument”选项设置界面
主要参数选项包括:
1选择扫描模式“ScanMode”:
Emission/Excitation/Synchronous(发射光谱、激发光谱和同步荧光)。
2选择数据模式“DataMode”:
Fluorescence/Phosphprescence/Luminescence(荧光测量、磷光测量、化学发光)。
3设定波长扫描范围。
A、扫描荧光激发光谱(Excitation):
需设定激发光的起始/终止波长(EXStart/EndWL)和荧光发射波长(EMWL);
B、扫描荧光发射光谱(Emission):
需设定发射光的起始/终止波长(EMStart/EndWL)和荧光激发波长(EXWL);
C、扫描同步荧光(Synchronous):
需设定激发光的起始/终止波长(EXStart/EndWL)和荧光发射波长(EMWL)。
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Attention:
激发光终止与起始波长差不小于10nm。
4选择扫描速度“ScanSpeed”(通常选240nm/min)。
5选择激发/发射狭缝(EX/EMSlit)。
6选择光电倍增管负高压“PMTVoltage”(一般选700V)。
7选择仪器响应时间“Response”(一般选Auto)。
8选择光闸控制“□ShutterControl”打√,以使仪器在光谱扫描时自动开启,而其他时间关闭。
9选择“Report”设定输出数据信息、仪器采集数据的步长(通常选0.2nm)及输出数据的起始和终止波长(DataStart/End)。
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!
Attention:
DataStart/End需与“Instrument”选项中设置一致,否则所得到的数据点会逐渐减少,而无法作图。
(4)参数设置好后,点击“确定”。
4、设置文件存储路径
(1)点击扫描界面右侧“Sample”
,如图4。
图4Sample选项的界面
(2)样品命名“Samplename”。
(3)选中“□AutoFile”,打√。
可以自动保存原始文件和TXT格式文本文档数据。
(4)参数设置好后,点击“OK”。
5、扫描测试
(1)打开盖子,放入待测样品后,盖上盖子。
(请勿用力)。
(2)点击扫描界面右侧“Measure”
(或快捷键F4),窗口在线出现扫描谱图。
6、数据处理
(1)选中自动弹出的数据窗口,如图5。
(2)选择“Trace”
,进行读数并寻峰等操作。
图5扫描谱图窗口
(3)上传数据。
3、关机顺序(逆开机顺序实施操作):
(1)关闭运行软件FLSolution2.1forF-7000,弹出窗口,如图6。
(2)选中“○Closethelamp,thenclosethemonitorwindows?
”,打“⊙”。
(3)点击“Yes”。
窗口自动关闭。
同时,观察主机正面面板右侧的XeLAMP指示灯暗下来,而RUN指示灯仍显示绿色。
图6关闭运行软件
(2)约十分钟后,关闭仪器主机电源,即按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮(POWER)。
(目的是仅让风扇工作,使Xe灯室散热)。
(3)关闭计算机。