美国FDA 分析方法验证指南Word格式.docx
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ii.原料药……………………………………………….
iii.制剂………………………………………………….
（2）各类检测的推荐验证项目…………………………………………..
a.鉴别………………………………………………………....
b.杂质………………………………………………………..
c.含量………………………………………………………..
d.特定实验…………………………………………………….
B．药典分析方法（21CFR211.194（a）
（2））…………………………………..
八.统计分析…………………………………………………………………….
A．基本原则………………………………………………………………
B:
对比研究…………………………………………………………………
C:
统计………………………………………………………………………
九、再验证………………………………………………………………………
十、分析方法验证资料：
内容和数据处理…………………………………….
A．分析方法验证资料…………………………………………………….
B：
样品的选择和运输…………………………………………………….
C：
各方职责……………………………………………………………….
1.申请人……………………………………………………………….
2.化学评审官………………………………………………………….
3.FDA实验室………………………………………………………….
4.检查官……………………………………………………………….
十一、方法学……………………………………………………………………
A．高效液相色谱（HPLC）………………………………………………….
1.色谱柱……………………………………………………………….
2.系统适应性研究…………………………………………………….
3.操作参数…………………………………………………………….
B．气相色谱（GC）………………………………………………………….
2.操作参数……………………………………………………………..
3.系统适应性实验……………………………………………………..
分光光度法，光谱法和相关的物理方法………………………………
D：
毛细管电泳（CE）…………………………………………………………
E：
旋光度……………………………………………………………………
F：
和粒径分析相关的分析方法……………………………………………
G：
溶出度…………………………………………………………………..
H：
其它仪器分析方法………………………………………………………
附录A………………………………………………………………………………..
附录B………………………………………………………………………………..
术语表……………………………………………………………………………….
一、绪论
本指南旨在为申请者提供建议，以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用于支
持原料药和制剂的认定，剂量，质量，纯度和效力方面的文件。
本指南旨在帮助申请者收集资料，递交样品并资料以支持分析方法。
这些建议适用于
NDA，ANDA，BLA，PLA及其它们的补充中所涉及的原料药和制剂。
这些原则同样适用于二类DMF所涉及的原料药和制剂。
如果使用了其它方法，鼓励申
请者事先和FDA药品评审中心的官员进行讨论，以免出现这种情况，那就是花了人力物力所
准备起来的递交资料后来发现是不可用的。
本指南中所述的分析方法验证的原则适用于各种类型的分析方法。
但是，本指南中特定
的建议可能不适用于有些产品所用的特殊分析方法，如生物药，生物技术药，植物药或放射
性药物等。
比如说，许多生物分析是建立在动物挑战模式，免疫原性评估或其它有着独特特性的免
疫分析基础上的，在递交分析方法和分析方法验证资料时需考虑这些独特的性质。
而且，许多原料药和制剂的界定和质量控制所需的生物和免疫化学检测并不在本指南的
范围之内。
尽管本指南并不专门叙述原料，中间体，赋形剂，包装材料及原料药和制剂生产中所用
的其它物料的分析方法及分析方法验证资料的递交，但是应该应用验证过的分析方法来分析
检测这些物质。
对于本指南中未提及的关于分析方法验证和资料提交方面的问题，请向FDA相关的化学
评审人员咨询。
本指南，一旦定稿，将取代FDA于1987年2月份发布的工业指南：
分析方法验证所需提
交的样品和分析资料。
二、背景
每个NDA和ANDA都必需包括必要的分析方法以确保原料药和制剂的认定，剂量，质量，
纯度和效力，还包括制剂的生物利用度（21CFR314.50（d）
（1）和314.94（a）（9）（i））。
FDA验证文件现场备查，可以不与DMF一起交。
必须要有资料来论证所用的分析方法是符合一定的准确度和可靠性标准的。
分析方法验证是论证某一分析方法适用于其用途的过程。
分析方法的验证过程是从申请
者有计划地系统性收集验证资料以支持分析方法开始的。
审评化学家会对NDA或ANDA中的分析方法和验证资料进行评审。
一旦FDA有要求，则NDA或ANDA的申请者必须提交制剂，原料药，非药典对照品和空
白以使FDA实验室能对申请者所用分析方法进行评审（21CFR314.50（e）and
314.94（a）（10））。
FDA实验室的分析会论证该分析方法在实验室内是可以重现的。
审评化学家和实验室分
析家会从法规的角度确定该分析方法的适用性。
FDA检查官会对分析实验室进行检查确保用于放行和稳定性实验的分析方法符合现行
的GMP（21CFRpart211）和GLP（21CFRpart58）。
每个BLA和PLA都必须要有详细的生产工艺描述，包括分析方法，以说明所生产的产品
是符合规定睥安全，纯充和效力标准的（21CFR601.2（a）and601.2（c）
（1）（iv））。
必须要有资料证明所用的分析方法是符合一定的准确度和可靠性要求的（21CFR81211.194（a）
（2））。
对于BLA，PLA及它们的补充，在所提交的许可证申请中应当要有分析
方法和方法验证这部分的资料，审评委员会会对这部分资料进行评审。
需提供代表性样品及该样品所代表批号的检测结果总结（21CFR601.2（a）and601.2（c）
（1）（vi））。
评审委员会主席会要求CBER实验室的分析人员进行分析实验对申请者
的分析方法进行评估，并确认其分析结果。
从验证的角度来看，所有的分析方法有着同样的重要性。
一般来说，应当要应用已验证
过的分析方法，而不论其是被用于过程控制，放行，合格或稳定性实验。
高等每个定量分析
方法时都应当要减少其分析误差。
分析方法和验证资料应当摆在申请的分析方法和控制章节中提交。
本指南的第III到
IX章和XI章给出了所需提供资料方面的建议。
向FDA实验室提供样品和递交NDA和ANDA
中的分析方法验证资料的信息见第X章。
三、分析方法的类型
A.法定分析方法
法定分析方法是被用来评估原料药或制剂的特定性质的。
USP/NF中的分析方法是法定
的用于药典项目检测的分析方法。
为了确认符合法规，需使用法定分析方法。
B.替代分析方法
替代分析方法是申请者提出用于代替法定分析方法的分析方法。
只有当一替代分析方法
相当于或优于法定分析方法时，才可以应用验证过的替代分析方法。
如果提交了替代分析方法，申请者还应当提供其理由，并标明其用途（如，放行，稳定性实
验），验证资料及其与法定分析方法的对比资料。
C.稳定性指示分析
稳定性指示分析是能检测出原料药或制剂的某些性质随着时间的延长而出现的变化的
定量分析方法。
稳定性指示分析能不受降解产物，工艺杂质，赋形剂或其它潜在杂质的影响而准确测定
其中的活性成分。
如果申请者递交了用于放行检测的非稳定性指示分析方法，则应当要有能定性和定量地
监测杂质，包括降解产物，的分析方法对其进行补充。
稳定性试验中所用的含量分析方法应
当要有稳定性指示能力，除非有科学的理由能证明其合理性。
四、标准品
A．标准品的类型
可以从USP/NF处或其它官方（比如说，CBER，21CFR610.20）获得标准品（也就是一级
对照品）。
如果不能确定一标准品的来源是否会被FDA认为是官方来源，申请者应当要向适
当的化学评审人员咨询。
如果没有官方来源，则被用来作标准品的物质应当要有尽可能高的
纯度，并得到充分界定。
工作对照品（也就是内部标准品或二级标准品）是根据一级对照品标定的，并用来代替一
级对照品的。
B．分析报告单
对于非官方标准品，在申请的分析方法和控制章节中应当要提供该标准品的分析报告
单。
对于从官方获得的标准品，用户应当要确保标准品的适用性。
应当正确储存标准品并在
已确定的时间段内使用该标准品。
C．标准品的界定
从USP/NF及其它官方来源获得的标准品是不需要进一步界定的。
非官方对照品要有尽
可能高的纯度，并进行充分地界定以确保其结构，剂量，质量，纯度和效力。
用于界定标准品的定性和定量分析方法应当要不同于用于控制原料药或制剂的结构，剂
量，质量，纯度和效力的分析方法，要比它们更深入。
用于标准品界定的分析方法不应仅仅
是和先前的指定标准品进行比较实验。
一般来说，界定资料应当要包括：
标准品的简单工艺描述，如果其生产工艺是否于其相应的原料药的话。
应当要叙述制备标准
品时所用的补充精制过程。
相关光谱图，色谱图，TLC照片及其它仪器输出的清晰复印件。
建立纯度的资料。
应当
要应用适当的检测方法来获得这些资料，比如说TLC，GC，HPLC，相溶解分析，适当的热分
析方法及其它必要的分析方法。
适当的化学性质资料，比如结构式，经验式和分子量等。
结构确证资料应当要包括适当
的分析测试，比如元素分析，IR，UV,NMR和MS，及适用的官能团分析。
还应当要提供具体
的结构解析资料。
物理性质的描述，包括颜色和物理形态。
适当的物理常数，比如说熔程，沸程，折射
率，离解常数（pK值）和旋光度。
用于界定标准品的分析程序的详细叙述。
至于生物技术/生物产品的标准品，应当要考虑上述建议，可能可以应用。
然而，其它
确定物理化学性质，结构特性，生物活性和/或免疫化学活性的补充检测和/或其它检测将是
非常重要的。
物理化学性质包括异构体，电泳和液相色谱行为及光谱性质等。
结构界定可能包括氨基
酸序列，氨基酸组成，缩氨酸图和碳水结构。
确定生物和/或免疫化学活性的分析方法应当
要和用来确定产品效力的分析方法一样。
这些分析方法可以包括基于动物的，细胞培养的，生物化学的或配位体/接受体螯合的分
析方法。
如果这些检测需用于某些标准品的界定，生物和免疫化学检测的分析方法验证方面
的特殊建议并不在本指南的范围之内。
五、IND中的分析方法验证
对于IND而言，每个阶段的研究都需要有足够的资料以确保合适的认定，质量，纯度，
剂量和/或效力。
所需的分析方法和方法验证方面的资料会随着研究的阶段变化而变化（21
CFR312.23（a）（7））。
关于在第1阶段研究所需提交的分析方法和方法验证资料方面的指南，发起人可以参考
FDA的指南：
药品（包括结构确定的，有疗效的，生物技术产品）第1阶段研究的IND申请
的内容和格式（1995年11月）。
第2和第3阶段研究所需提交的分析方法和方法验证资料方面的指南，发起人将可以参
考FDA的指南：
药品（包括结构确定的，有疗效的，生物技术产品）第1阶段研究的IND
申请的CMC内容和格式（草案，1999年4月）。
在递交NDA，ANDA，BLA或PLA时，所有的分析方法都应当要开发出来，并得到验证。
六、NDA、ANDA、BLA和PLA中分析方法的内容和格式
NDA，ANDA，BLA和PLA中所提交的任一分析方法都应当要有详细的描述，以使合格的
分析人员能重现出所需的实验条件并获得和申请者相当的实验结果。
应当要叙述分析方法中
需要特殊注意的地方。
如果所用的分析方法是USP/NF或其它FDA认可参考文献（如，<
<
AOAC国际方法汇编>
>
）
中且所参考的分析方法未经过修改的话，则需提供该分析方法的参引，而不用提供该分析方
法的描述（21CFR211.194）。
对于从其它公开发表的文献上获得的分析方法，应当要对其进行叙述，因为评审官可能
并不能很方便的获得这些文献。
分析方法描述中需要包括的典型内容如下所示：
A．基本方法
HPLC进行分离的，检测器为UV检测器。
B．取样
需要叙述的有：
所选样品的数目（比如，瓶，片等），它们是如何使用的（也就是，单
独的或是混合样品），每个样品分析的重复次数。
C．仪器和仪器参数
需要的有：
仪器列表（比如，仪器类型，检测器，柱子类型，尺寸等）和仪器参数（比
如，流速，温度，运行时间和设定波长等）。
如果必要的话，还要提供实验结构示意图（比
如，阐述喷洒式分析方法的位置）。
D．试剂
试剂列表及其相应的规格（比如：
USP/NF，美国化学社（ACS）分析试剂）。
如果使用的是自制试剂或更改过的商业试剂，则应当要有其制备方法。
对于不稳定的或有潜
在危险的试剂，应标明其储存条件，安全使用说明和使用周期。
E．系统适应性实验
系统适应性实验参数和合格标准是建立基础是：
仪器，电子元件，分析操作和待测样品
是个不可分割的整体。
系统适应性实验确保系统在样品分析的时候能很好地运行。
在分析方
法中应当要包括适当的系统适应性合格标准。
所有的色谱分析方法都应当要有系统适应性实验及相应的合格标准。
CDER评审官指南<
色谱分析方法的验证>
（1994年11月）对用于评估系统适应性的典型参数进行了定义和讨
论。
建议系统适应性实验应成为所有分析方法的一部分，而不仅仅是色谱分析方法。
无论是
哪类分析方法，都要采用实验来证实该系统能不受环境条件的影响而正确地运行。
比如说，
滴定法一般来说需要进行空白实验。
F．标准品的制备
要有所有标准品溶液（比如，储备液，工作对照品溶液，内部对照品溶液）的配制方法。
G.样品的制备
单项检测所需的样品制备应作清晰的描述。
非常规样品的制备（比如，固相提取，衍生
法制备）应有详细的细节描述。
H.操作过程
应当要按操作步骤对操作过程进行逐步叙述。
叙述应当要适当包括如下信息：
平衡时间，
样品进样顺序和系统适应性或启动参数。
非正常不可预测因素也应标明。
I．计算
应当要提供代表性计算公式，并要列表说明所有符号和数字系数，及计算降解产物和杂
质的特殊使用说明。
所有用于数据分析的数学转换或公式应详细描述。
这些包括对数转换以
获得指数数据的线性关系，或多元回归分析的使用。
J.结果报告
1．通则
应该规定关键计算步骤中的数字单位（例如，‘标签’标示量的百分比，W/W，W/L，ppm
等）
2．杂质分析规程
在有关原料药和产品的杂质检测规程中，应当包括杂质的名称和检测位/标志（例如，
保留时间RT，相对保留时间RRT），以及杂质的种类（比如工艺降解产物，赋形剂降解产物），
如有可能，还应当指明检测限DL或定量限QL。
也可以在原料药检测中设置DL和QL。
有机杂质的报告中，应当包括：
1、有记载的已经过确认的杂质的名称；
2、有记载但未经过
确认杂质的（检测）位/标志；
3、所有的没有记载的杂质，以及；
4、总杂质。
总有机杂质
是指所有达到或超过其自身定量限度的杂质的总量。
在这里可以参考FDA杂质指南文章中有
关判定定量限度的内容（看后面的参考）。
无机杂质和溶剂的残留，也应该被提到。
对于产品以及原料药的工艺杂质也可以不包括在报告中，除非分析规程和控制环节中描叙了
一个可以被接受的原则，那么，在产品制造和包装过程中（包括贴签）产生的杂质就要被提
到。
并不是所有产品（比如，生物制剂、生物工艺制剂、植物制剂、放射制剂）的报告都必
须严格按照以上谈到的内容来写，但是所有关键的工序以及产品相关的杂质都要有检测和报
告。
七、NDA，ANDA，BLA和PLA中的分析方法验证
A．非药典分析方法
在NDA，ANDA，BLA或PLA中，应当要递交资料以说明检测中所用的分析方法是满足适
当的准确度和可靠性要求（21CFR211.194（a）92））。
分析方法验证是个论述分析方法是适用
于其拟定用途的过程。
在递交资料时，NDA，ANDA，BLA或PLA中应当要包含分析方法验证
资料以支持分析方法的准确度。
ICH指导原则Q2A：
分析方法验证（1995年3月）和Q2B：
分析方法验证：
方法学（1996
年11月）给出了分析方法验证的建议。
对于超出ICH指导原则范围的分析方法也是需要验
证的。
1.验证项目
申请者应当要送交其所拟定分析方法的验证项目方面的信息（见ICHQ2A和ICHQ2B）。
尽管不是对于所有类型的分析方法都需要进行所有的验证项目（见第VII.A.3章），但还是
有典型的验证项目，如：
准确度
精密度（重复性和中间精密度）
专属性
检测限
定量限
线性
范围
耐用性
2.其它验证资料
分析方法验证资料还应当要包括：
说明所有分析制备样品在完成分析所需的时间内的稳定性的资料。
清晰可读的仪器代表性输出和记录资料（如色谱图）和原始资料输出（积分面积）。
安
慰剂，对照品和样品的仪器输出也都是需要提供的（见第VII.A.2.c章）。
代表性计算公式，以表明原料药中的杂质是如何计算的。
（见VII.A.2.b章）。
对于杂质
分析方法，要标明杂质的名称和位置标识符（如，色谱中的相对保留时间RRT）。
对于原料药：
（1）讨论可能会形成的异构体并讨论异构体的控制。
对每个有机杂质进行适当的标识和界定。
不是所有的产品（如，植物药）都需要这些资
料的。
对于其它杂质（如无机杂质，残留溶剂），应当要进行说明并定量分析。
FDA的指导文件，如比ICH指导原则Q3A新原料药中的杂质（1996年1月）。
已知杂质列表，包括工艺杂质，降解产物和可能的异构体。
如果知道结构的话，也需提供。
对于制剂：
原料药在制剂中可能的降解途径。
通过准确度实验论证的样品回收率资料。
要有资料论
证无论是新制的安慰剂还是分解了的安慰剂都不会影响活性成分的定量分析。
ICHQ2A和
ICHQ2B几乎对所有的验证参数都进行了论述。
下面论述的是那些还需要更详细地进行论
述的方面。
a.耐用性
ICHQ2A和ICHQ2B对耐用性是有论述的，它衡量的是分析方法在细微的变化下不受
影响的能力。
该实验应当是在分析方法开发过程中进行的，对实验结果进行讨论和/或递交。
如果观察到有影响，需提供代表性仪器输出（如色谱图）。
b.强降解实验
FDA很多关于药品稳定性的指导原则都对强降解实验进行了论述。
在申请的稳定性一章中应当要提供的资料有：
强降解实验设计和实验结果。
而代表性仪器输
出（如：
色谱图）和/或其它资料（强降解实验中所得的降解信息）应当要提供在分析方法
和控制一章中。
c.仪器输出/原始资料
i.有机杂质
应当要提供代表性资料以支持有机杂质的评估。
一般来说，是不需要残留溶剂的代表性
资料的。
仪器输出和原始数值（比如，峰面积）及合适的标记和标注（比如，色谱峰的保留
时间，核磁共振的化学位移和耦合常数）都应当要提供。
根据所提供的定量限和仪器输出对
杂质情况进行评估。
还应当要提供其它资料以确认杂质情况得到了充分地界定。
比如说，比
如说，代表性图谱选用的检测波长是205nm，则可以将拟定的运行时间延长至两倍以支持分
析方法的专属性。
在定量分析时，原料药的响应
升级会员 