常用缓冲液配置.docx

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常用缓冲液配置

实验室常用缓冲液配置方案

1）1MTris-HCl（pH7>4,7.6,8、0）

组份浓度：

1MTris-HCl

配制量：

1L

配制方法：

1、称1：

121.1gTris置于1L烧杯中。

2、加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。

3、按下表量加入浓盐酸调节所需要得pH值。

PH值

浓HC1

7、4

约70ml

7、6

约60ml

8、0

约42ml

4、将溶液泄容至1L。

5、高温高压灭菌后，室温保存。

注意:

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液得pH值随温度得变化差异很大，温度每升髙1°C,溶液得pH值大约降低0、03个单位。

2）10xTEBuffer（pH7>4,7、6,8、0）

组份浓度：

100mMTris-HCl,10mMEDTA

配制量:

1L

配制方法：

1、量取下列溶液.置于IL烧杯中。

IMTris-HClBuffer（PH7.4,7、6&0）

100ml

500mMEDTA（PH8.0）

20ml

2、向烧杯中加入约800ml得去离子水，均匀混合。

3、将溶液泄容至1L后，髙温高压灭菌。

4、室温保存。

3）1.5MTris-HCl（pH8.8）

组份浓度:

1.5MTris-HCl

配制量:

1L

配制方法：

1、称量181.7gTrisft于1L烧杯中。

2、加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。

3、用浓盐酸调节pH值至8、8o

4、将溶液定容至1Lo

5、髙温高压灭菌后，室温保存。

注意:

应使溶液冷却至室温后再调左pH值，因为Tris溶液得pH值随温度得变化差异很大，温度每升髙1°C,溶液得pH值大约降低0、03个单位。

4）3M醋酸钠（pH5、2）

组份浓度:

3M醋酸钠

配制量:

100ml

配制方法：

1、称量40.8gNaAc-3H2O宜于100-200ml烧杯中，加入月40ml得去离子水搅拌溶解

2、加入冰醋酸调节pH值至5、2

3、加去离子水将溶液泄容至100ml

4高温高压灭菌后，室温保存。

5）PBSBuffer

组份浓度：

137mMNaCl,2.7mMKC1,10mMNa2HPO4.2mMKH2PO4

配制量:

1L

配制方法：

1、称量下列试剂.置于IL烧杯中。

NaCl

8g

KC1

0.2g

Na2HPO4

l-42g

KH2PO4

0・27g

2、向烧杯中加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。

3、滴加浓盐酸将pH值调肖至7、4,然后加入去离子水将溶液泄容至1L。

4、髙温高压灭菌后，室温保存。

注意:

上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要，可在配方中补充1mMCaC12与0.5mM

MgC120

6）10M醋酸技

组份浓度：

10M醋酸披

配制量:

100ml

配制方法：

1、称呈：

77、1g醋酸彼置于100〜200ml烧杯中，加入约30ml得去离子水搅拌溶解。

2、加去离子水将溶液定容至100ml。

3、使用0、22mm滤膜过滤除菌。

4、密封瓶口于室温保存。

注意:

醋酸钱受热易分解.所以不能髙温髙压火菌。

7）苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）

配制方法：

1、说明:

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

l）o氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相得分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现得气泡。

2、配制方法:

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积得氯仿/异戊醇（24:

1）混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4°C保存。

8）10%（W/V）SDS

组份浓度：

10%（W/V）SDS

配制昼100ml

配制方法：

1、称虽:

10g高纯度得SDS置于100-200ml烧杯中，加入约801111得去离子水・68°C加入溶解

2、滴加浓盐酸调节pH值至7、2

3、将溶液泄容至100ml后，室温保存。

9）2NNaOH

组份浓度：

2NNaOH

配制S：

100ml

配制方法：

1、量取80ml去离子水置于100〜200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2、称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。

3、待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积左容至100mL

4、将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10）2、5NHC1

组份浓度：

2、5NHC1

配制量:

100ml

配制方法：

1、在78、4ml得去离子水中加入21、6ml得浓盐酸⑴、6N）,均匀混合。

2、室温保存。

11）5MNaCl

组份浓度：

5MNaCl

配制量:

1L

配制方法：

1、称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml得去离子水后搅拌溶解。

2、加去离子水将溶液泄容至1L后，适量分成小份。

3、高温髙压火菌后,4°C保存。

11）20%（VV/V）Glucose

组份浓度：

20%（W/V）Glucose

配制M：

100ml

配制方法：

1、称取20gGlucose宜于100〜200ml烧杯中，加入约80ml得去离子水后，搅拌溶解。

2、加去离子水将溶液定容至100ml。

3、髙温高压灭菌后,4°C保存。

12）Solution1（质粒提取用）

组份浓度：

25mMTris-HCl（pH8.0）,10mMEDTA,50mMGlucose

配制星：

1L

配制方法：

1、量取下列溶液，置于IL烧杯中。

lMTris-HCl（PH8.0）

25ml

（）・5MEDTA（PH8、0）

20ml

20%Glucose（l.llM）

45ml

dH2O

910ml

2、髙温高压火菌后,4C保存。

3、使用前每50ml得SolutionI中加入2ml得RNaseA（20mg/ml）o

13）Solution11（质粒提取用）

组份浓度：

200mMNaOH」%（W/V）SDS

配制量:

500ml

配制方法：

1、量取下列溶液，置于500ml饶杯中

10%SDS50ml

2NNaOH50ml

2、加灭菌水泄容至500ml,充分混匀

3、室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月

注意:

SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌

14）Solution111（质粒提取用）

组份浓度：

3MKOAc,5MCH3COOH

配制量:

500ml

配制方法：

1、称量下列试剂.置于500ml饶杯中。

KOAc

147g

CH3COOH

57、5ml

2、加入300ml去离子水后搅拌溶解。

3、加去离子水将溶液立容至500ml。

4、高温髙压火菌后,4C保存。

15）0・5MEDTA（pH8、0）

组份浓度：

0.5MEDTA

配制量：

1L

配制方法：

称取186、1gNa2EDTA・2H2O,置于1L烧杯中。

2、加入约800ml得去离子水，充分搅拌。

3、用NaOH调节pH值至8、0（约20gNaOH）。

注意:

pH值至8、0时,EDTA才能完全溶解。

4、加去离子水将溶液泄容至1L。

5、适量分成小份后，高温高压灭菌。

6、室温保存。

16）1MDTT

组份浓度：

1MDTT

配制量:

20ml

配制方法：

1、称取3.09gDTT,加入到50ml塑料离心管内。

2、加20ml得0、01MNaOAc（pH5、2）,溶解后使用0、22mm滤器过滤除菌。

3、适量分成小份后,-2（TC保存。

17）10mMATP

组份浓度:

10mMATP

配制量:

20ml

配制方法：

1、称取121mgNa2ATP・3H2O,加入到50ml塑料离心管内。

2、加20ml得25mMTris-HCl（pH8、0）,搅拌溶解。

3、适量分成小份后,-20°C保存。

一、常用贮液与溶液

lmol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量得水中，使终体积为10ml.分装成小份贮存于-20°C。

lmol/L精胺（Spermine）:

溶解3.48g精胺于足量得水中，使终体积为lOrnL分装成小份贮存于-20C。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）:

将77.lg乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0、22um孔径得滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血淸蛋白（BSA）:

加lOOmg得牛血淸蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9、5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不就是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血淸蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水建容到10ml,然后分装成小份贮存于-20°Co

lmol/L二硫苏糖醇（DTT）:

在二硫苏糖醇5g得原装瓶中加32、4ml水，分成小份贮存于-20°C。

或转移lOOmg得二硫苏糖醇

至微量离心管，加0、65ml得水配制成lmol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）:

?

^解78.5g乙酸钾于足量得水中，加水立容到100ml。

lmol/L氯化钾（KC1）:

溶解7.46g氯化钾于足量得水中，加水定容到lOOmL

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）:

溶解40.8g得三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液得pH至5、2,再加水定容到lOOmL

0、5mol/LEDTA:

配制等摩尔得Na2EDTA与NaOH溶液（0、5mol/L）.混合后形成EDTA得三钠盐。

或称取186.1g得Na2EDTA-2H2O与20g得NaOH.并溶于水中,上容至1L。

lmol/LHEPES:

将23、8gHEPES溶于约90ml得水中，用NaOH调pH（6、8-8.2）,然后用水左容至100ml9

1mol/LHC1:

加8、6ml得浓盐酸至91、4ml得水中。

25mg/mlIPGT:

溶解250mg得IPGT（异丙基硫代半乳糖昔）于10ml水中，分成小份贮存于-20*C。

lmol/LMgC12:

溶解20.3gMgC12-6H2O于足量得水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF:

溶解、174mg得PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量得异丙醇中旋容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20°C。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）:

将200mg得蛋白酶L加入到9、5ml水中，轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水左容到10mL然后分装成小份贮存于-20°Co10mg/mlRnase（无DNase）（DNase—freeRNase）:

溶解10mg得胰蛋白RNA酶于lml得lOnunol/L得乙酸钠水溶液中（pH5、0）。

溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。

用lmol/L得Tris-HCl调pH至7、5,于・20°C贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）:

溶解29.2g氯化钠于足量得水中，左容至100ml.

ION氢氧化钠（NaOH）:

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水得烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水泄容至lLo

10%SDS（十二烷基硫酸钠）:

称取lOOgSDS慢慢转移到约含0.9L得水得饶杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水泄容至1L.

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）:

溶解36.4g山梨（糖）醇于足呈:

水中使终体积为100ml。

100%三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA得试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2、5%X-gal（5-^-4-氯一3」引喙一》半乳糖苛）:

溶解25mg得X-gal于1ml得二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管,贮存于-20°C0

lOOxDenhardt试剂（Denhardt'sregent）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分得用量

2%聚蔗糖（Ficoll.400型）

2%聚乙烯毗咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）

2g

2g

2g

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中泄容。

过滤除菌及杂质,分装成小份于・2（rc贮存。

10x标准DNA连接酶缓冲®（standardDNAligasebuffer）（粘端.平端连接）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分得用量

0、5mol/LTris-HCl

100mmol/LMgC12

100mmol/LDTT

2mmol/LATP

5mmol/L盐酸亚精胺（可选）

0、5mg/mlBSA（组分V）（可选）水

5ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

200ul100mmol/L贮液50uI1mmol/L贮液

0、5ml10mg/mL贮液

2x25ml

将配制好得缓冲液分装成小份,贮存于・20°C.

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80°C可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液

成分及终浓度

配制20ul溶液各成分得用量

lOmmol/LdATP

2ul100mmol/LdATP贮液

lOmmol/LdCTP

2ul100mmol/LdCTP贮液

lOmmol/LdGTP

2ul100mmol/LdGTP贮液

lOmmol/LdTTP

2ul100mmol/LdTTP贮液

水

12ul

20%PEG8OOO/2.5MNaCl

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分得用量

质量浓度为20%聚乙二醇

2、5mol/L氯化钠水

20g

50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠得烧杯中，加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解'

20xSSC

成分及终浓度

配制1L溶液各成分得用量

300mmol/L柠檬酸三钠（二水）

88.2g

3mol/L氯化钠

175.3g

水

补足IL

溶解柠檬酸三钠（二水）与氯化钠于约0.9L水中,加几滴IONNaOH溶液调pH为7、0.用水补足体积至1L.

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加］OOulDEPC于100ml水中，使DEPC得体积分数为0、1%。

在37C温浴至少12h撚后在15psi条件下髙压火菌20min.以使残余得DEPC失活-DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）

直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺得玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌lh.可去除甲酰胺中得离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）

按照下表所给左得体积，混合1mol/L得磷酸二氢钠（单碱）与lmol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液,获得所需pH得磷酸缓冲液。

配制1mol/L得磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液:

溶解138g于足量水中，使终体积为IL;lmol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L

磷酸二氢钠（ml）

1mol/L磷酸氢二钠（ml）

最终pH值

877

123

6、0

850

150

6、1

815

185

6.2

775

225

6.3

735

265

6.4

685

315

6、5

625

375

6、6

565

435

6、7

510

490

6、8

450

550

6、9

390

610

7、0

330

670

7、1

280

720

7、2

TE（用于悬浮与贮存DNA）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分得用量

lOmmol/LTris一HC1

1mmol/LEDTA

水

1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0.25°C）200U10.5mol/LEDTA（pH8.0）

98、8ml

Tris缓冲液（Tris-HClbuffer）

将12lg得Tris緘溶解于约0.9L水中，再根据所要求得pH（25°C下）加一上量得浓盐酸（11、6N）・用水调整终体积至lLo

浓盐酸得体积（ml）

pH

8、6

9、0

14

8、8

21

8、6

28、5

8、4

38

8、2

46

8、0

56

7、8

66

7、6

71、3

7、4

76

7、2

2.电泳缓冲液、染料与凝胶加样液

电泳缓冲液

50xTris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分得用量

2mol/LTris碱lmol/L乙酸100mmol/LEDTA水

242g

57、1ml得冰乙酸（17、4mol/L）200ml得0、5mol/LEDTA（pH8.0）补足IL

SxTris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

配制IL溶液各成分得用量

445mmol/LTris碱

445mmol/L硼酸盐

10mmol/LEDTA

水

54g

27.5g硼酸

20ml得0、5mol/LEDTA（pH8、0）补足IL

染料

1%澳酚蓝（bromophenolblue）

加lg水溶性钠型渓酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1%二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）

溶解lg二甲苯青FF于足量水中,左容到lOOmlo

10mg/ml得漠化乙锭（ethidiumbromide）

小心称取lg浪化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解°用铝箔包裹装液管，于4°C贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）

6x碱性凝胶丄样液（童温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、3N氢氧化钠

6mmol/LEDTA

18%聚蔗糖（400型）

0、15%浪甲酚绿

^）、25%二甲苯青FF

300ul10N氢氧化钠

120U10.5mol/LEDTA（pH8>0）

1.8g

15mg

25mg

水I补足到1乔?

6x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、15%浪酚蓝

0、15%二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

15%聚蔗糖（400型）水

1、5ml1%浪酚蓝

1、5ml1%二甲苯青FF

lOOulO、5mol/LEDTA（pH8.0）l・5g

补足到10ml

6x漠酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、25%浪酚蓝

0、25%二甲苯青FF15%聚蔗糖（400型）水

2、5ml1%浪酚蓝

2、5ml1%二甲苯青FF

l・5g补足到10ml

6x甘油凝胶上样液（49贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、15%?

臭酚蓝

0、15%二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

50%甘油

水

1、5ml1%浪酚蓝

K5ml1%二甲苯青FFlOOulO.5mol/LEDTA（pH8>0）3ml

3、9ml

6x蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、15%浪酚蓝

0、15%二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

40%聚蔗糖

水

1、5ml1%淚酚蓝

1、5ml1%二甲苯青FF

100U10.5mol/LEDTA（pH8.0）

4g

补足到10ml

10x十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、2%浪酚蓝

0、2%二甲苯青FF

200mmol/LEDTA

0.1%SDS

50%甘油

水

20mg

20mg

4mlOx5mol/LEDTA（pH8、0）

lOOul10%SDS

5ml

补足到10ml

三、常用培养基

1）LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白陈

log

酵母提取物

5g

氯化钠

10g

如果需要用INNaOH（〜lml）调整pH至7。

再补足水至1L。

注:

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,

上层琼脂平板添加琼脂粉7g/Lo

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白腺

20g

酵母提取物

5g

氯化钠

0.5g

1mol/L氯化钾

2、5ml

用水补足体枳到1L.分成100ml得小份，髙压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml得小份中加1ml灭过菌得lmol/L氯化镁。

2）SOC培养基

成分、方法同SOB培养基得配制，只就是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml得小份中加lml火过菌得lmol/L氯化镁外，再加2ml火菌得lmol/L匍萄糖（18g匍萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml,用0、22um得滤膜过滤除菌）。

3）TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白腺

12g

酵母提取物

24g

甘油

4ml

各组分溶解后高压火菌。

冷却到60°C,再加100ml火菌得170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4得溶液（2、31g得KH2PO4与12、54gK2HPO4溶在足呈:

得水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0、22um得滤膜过滤除菌）。

4）2xYT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白陈

16g

酵母提取物

10g

氯化钠

4ml

如果需要用INNaOH（〜lml）调整pH至7、0,再补足水至1L。

注:

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L.上层琼脂平板添加琼脂粉7g/Lo

5）YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白陈

20g

酵母提取物

10g

匍萄糖

20g

用水补足体积为1L后，髙压火菌。

建议在髙压火菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1、6g色氨酸，因为YPD培养基就是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在髙压火菌前加入20g琼脂粉。

四、常用抗生素

1）氨节青霉素（ampicinin）（100mg/ml）

溶解lg氨节青卷素钠盐于足量得水中，最后沱容至10