检验方法验证检验方法确认实例版GMPWord格式文档下载.doc
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4.确认起止日期
5.方法确认所需要的仪器设备及相关文件的确认
6.方法确认所需要的对照品、原辅料、检验样品的确认
7.确认项目和确认方法、确认结果
7.1【鉴别
（1）】人工牛黄薄层色谱鉴别方法确认
7.2【鉴别
（2）】甲硝唑紫外光谱鉴别方法确认
7.3【鉴别（3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别方法确认
7.4甲硝唑含量测定方法专属性确认
7.5甲硝唑含量测定方法线性关系与线性范围确认
7.6甲硝唑含量测定方法准确度确认
7.7甲硝唑含量测定方法精密度确认
7.8甲硝唑含量测定方法耐用性确认
7.9胆红素含量测定方法系统适用性确认
7.10胆红素含量测定方法专属性确认
7.11胆红素含量测定方法线性关系与线性范围确认
7.12胆红素含量测定方法准确度确认
7.13胆红素含量测定方法精密度确认
7.14胆红素含量测定方法耐用性确认
8.三批产品按本检验方法检验的结果确认
9.偏差与漏项控制
10.确认报告会审
我公司生产的品种人工牛黄甲硝唑胶囊，执行国家药监局颁布的法定药品标准，标准号为：
WS-10001-（HD-0204）-2002。
本公司前身（原广东华卫药业有限公司）按该标准生产、检验人工牛黄甲硝唑胶囊已有多年的历史。
根据GMP（2010版）第二百二十三条规定，对收入药典和其它法定标准的分析方法，应通过检验方法确认来证明该方法在本实验室条件下的适用性。
故本公司依照法定标准WS-10001-（HD-0204）-2002以及《中国药典》2015版四部附录9101：
药品质量标准分析方法验证指导原则的规定，制定本检验方法确认方案，由质量部按制定的方法进行试验，根据试验结果判断检验方法在本公司是否适用。
本产品的微生物限度检查方法验证，另行制定验证方案进行验证，不包括在本次确认。
确认该产品的检验方法在本公司检验室的适用性，保证检验结果的可靠性。
本确认方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊，进行检验方法的确认。
确认项目包括【鉴别】、【甲硝唑含量测定】、【胆红素含量测定】等。
3.组织及职责
3.1确认方案和确认报告的起草、审核、批准
确认方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。
确认方案实施完成后，由QC组负责汇总各个项目确认的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。
3.2确认方案的培训
确认方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次确认实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。
3.3确认方案实施过程中的变更和偏差
确认方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。
3.4确认工作小组成员表
负责方案制定、实施、报告及培训工作
审核确认方案、审核确认报告并协调工作
用于本次检验方法确认的三批产品是人工牛黄甲硝唑胶囊
、、
实施确认工作的起止时间是：
～
5.1.主要检验仪器设备确认表
序号
仪器设备名称
型号
编号
校准单位
校准日期
有效期至
1
电子天平
BSA124S
JY-10
2
数显鼓风干燥箱
GZX-9076MBE
JY-19
3
紫外可见分光光度计
UV-2401-PC
JY-03
4
高效液相色谱仪
LC-10AT
JY-01
5
液相色谱仪
LC-20AD
JY-02
检查人/日期：
复核人/日期：
5.2.确认所需文件的确认表
文件名称
文件编码
是否有效版本
文件保存处
《人工牛黄甲硝唑胶囊内控质量标准》
TS-QS-4002-00
□是□否
质量部
《人工牛黄甲硝唑胶囊检验操作规程》
SOP-QC-4002-00
《取样操作规程》
SOP-QA-0001-00
《紫外可见分光光度法检验操作规程》
SOP-QC-0008-00
《高效液相色谱法检验操作规程》
SOP-QC-0009-00
《薄层色谱法操作规程》
SOP-QC-0030-00
《UV-2401-PC紫外可见分光光度计操作规程》
SOP-QC-5006-00
《LC-10AT高效液相色谱仪操作规程》
SOP-QC-5005-00
《LC-20AD高效液相色谱仪操作规程》
SOP-QC-5007-00
《BSA124S电子天平操作规程》
SOP-QC-5017-00
6.1.对照品、原辅料检查表
品名
来源
批号
备注
胆酸对照品
中国药品生物制品检定所
猪去氧胆酸对照品
胆红素对照品
含量98.5%
甲硝唑原料药
湖北省宏源药业科技股份有限公司
标定含量为100.0%
人工牛黄原料药
武汉百草园生化药业有限公司
6
淀粉辅料
东莞市东岳葡萄糖厂有限公司
7
二氧化硅辅料
湖州展望药业有限公司
6.2.检验样品确认表
生产厂家
规格
是否按GMP要求生产
佛山市华普生药业有限公司
甲硝唑0.2g
人工牛黄5mg
7.确认项目及确认方法
7.1.1鉴别方法的专属性确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-（HD-0204）-2002【鉴别
（1）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：
（1）胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液：
取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：
分别取本品3批的内容物约0.95g（约相当于人工牛黄20mg），研细，加氯仿15ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
（3）人工牛黄阴性样品溶液：
按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑原料0.80g，淀粉0.08g，二氧化硅0.04g共置量瓶中，加氯仿15ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为人工牛黄阴性样品溶液。
试验方法：
照薄层色谱法（中国药典2015年版四部0502）试验，吸取上述溶液各4µ
l,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（20：
25：
2：
3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟至斑点显色清晰，日光下或置紫外光灯（365nm）下检视。
7.1.2方法确认接受标准：
显2个主斑点；
在与对照品色谱相应位置上，显同颜色斑点；
在与对照品色谱相应位置上，不显斑点。
7.1.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平型号编号，数显鼓风干燥箱型号编号
硅胶G薄层板批号，来源
（2）胆酸对照品称样量，稀释倍数
猪去氧胆酸对照品称样量，稀释倍数
（3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：
批号，称样量；
批号，称样量；
批号，称样量；
（4）项目确认结果
【鉴别
（1）】人工牛黄薄层色谱鉴别---方法专属性确认结果
测试样品
胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液
人工牛黄阴性样品
20151201批
20151202批
20151203批
薄层色谱
显2个主斑点
与对照品色谱相应位置显同颜色斑点
与对照品色谱相应位置不显斑点
项目确认结果:
□通过□不通过
复核人/日期：
7.2.1鉴别方法的专属性确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-（HD-0204）-2002【鉴别
（2）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：
（1）甲硝唑对照品溶液：
取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解，稀释至刻度，摇匀；
精密量取5ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
分别精密取本品3批的内容物约59mg（约相当于甲硝唑50mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约80ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
（3）甲硝唑阴性样品溶液：
按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除甲硝唑不称取外，称取淀粉10mg，二氧化硅5mg、人工牛黄3mg置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）160ml微温，放冷后稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
照分光光度法，取上述各种溶液扫描紫外吸收光谱
7.2.2方法确认接受标准：
在277±
2nm的波长处有最大吸收；
在241±
2nm的波长处有最小吸收；
2nm的波长处无最大吸收；
2nm的波长处无最小吸收。
7.2.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平型号编号，紫外分光光度计型号编号
（2）甲硝唑对照品称样量20.1mg
【鉴别
（2）】甲硝唑紫外光谱鉴别---方法专属性确认结果
甲硝唑对照品
甲硝唑阴性样品
最大吸收
277±
2nm
2nm无最大吸收
最小吸收
241±
2nm无最小吸收
复核人/日期
7.3.1鉴别方法的专属性确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-（HD-0204）-2002【鉴别（3）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：
（1）胆红素对照品溶液：
取胆红素对照品约10.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀，精密量取1.0ml置25ml棕色量瓶中,加氯仿-甲醇-水-盐酸（90：
10：
0.3：
0.03）混合液稀释至刻度，制成每1ml中含胆红素约4μg的溶液，即得。
（2）样品提取溶剂：
氯仿-甲醇-水-盐酸（90：
10:
0.3:
0.03）的混合液
（3）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：
取20151201批本品的内容物约1.7g（约相当于胆红素0.2mg），精密称定，置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-水-盐酸（90：
0.03）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
。
（4）人工牛黄阴性样品溶液：
按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑1.45g，淀粉0.145g，二氧化硅0.072g共置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-10%盐酸（50：
50:
0.3）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
7.3.2方法确认接受标准：
（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液主峰保留时间与胆红素对照品溶液主峰保留时间一致（相对偏差不超过0.5%）；
（2）人工牛黄阴性样品溶液、样品提取溶剂在胆红素峰保留时间处均应为平直基线，无吸收峰。
7.3.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平型号编号，高效液相色谱仪型号编号
（2）胆红素对照品称样量：
9.90mg
批号20151201，称样量
【鉴别（3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别---方法专属性确认结果
成品
样品提取溶剂
胆红素峰保留时间
7.183min
7.170min
在胆红素峰保留时间处为平直基线，无色谱峰。
7.4.1甲硝唑含量测定方法的专属性确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-（HD-0204）-2002【含量测定甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行方法专属性的确认：
照分光光度法，取上述各种溶液扫描紫外吸收光谱，并读取吸收峰处的吸收度。
7.4.2方法确认接受标准：
2nm的波长处基本无吸收，吸收度A值接近0。
7.4.3方法确认记录与确认结果
甲硝唑含量测定---方法专属性确认结果
2nm有最大吸收
2nm基本无吸收，吸收度A=0
7.5甲硝唑含量测定方法的线性关系与线性范围确认
7.5.1甲硝唑含量测定方法的线性关系与线性范围确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-（HD-0204）-2002【含量测定甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行线性关系与线性范围的确认：
（1）甲硝唑对照品贮备液：
取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解，稀释至刻度，摇匀。
精密量取6ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
（2）线性关系测试溶液：
分别精密量取甲硝唑对照品贮备液4ml、5ml、6ml、7ml、10ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀得系列浓度的测试溶液。
照紫外-可见分光光度法，在277nm的波长处测定上述系列溶液的吸收度。
计算出各个测试溶液的甲硝唑浓度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，计算线性回归方程、回归系数R2、线性范围。
7.5.2方法确认接受标准：
（1）测试溶液的甲硝唑浓度与吸收度之间呈良好线性关系，回归系数R2：
0.995≤R2≤1；
（2）甲硝唑浓度线性范围：
应涵盖人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-（HD-0204）-2002【含量测定甲硝唑】项下样品溶液中甲硝唑浓度12.5μg/ml的80%～120%，即结果的线性范围应涵盖10.0μg/ml～15.0μg/ml。
7.5.3方法确认记录与确认结果
（2）甲硝唑对照品称样量20.1mg
（3）项目确认结果
甲硝唑含量测定方法-----线性关系与线性范围确认
对照品浓度（ug/ml）
8.04
10.05
12.06
14.07
20.10
277nm的A值
0.313
0.389
0.464
0.544
0.783
线性回归方程
y=0.039x-0.0037
回归系数R2
R2=0.9998
线性范围
甲硝唑浓度
8.04ug/ml～20.10ug/ml
7.6甲硝唑含量测定方法准确度确认（回收率试验）
7.6.1甲硝唑含量测定方法的准确度确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-（HD-0204）-2002【含量测定甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行方法准确度的确认：
（1）甲硝唑阴性样品溶液：
按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，精密称取人工牛黄25.0mg，淀粉100.0mg，二氧化硅50.0mg共置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀即得。
（2）回收率测试溶液：
精密称取甲硝唑工作对照品约50mg，置100ml量瓶中，精密加入甲硝唑阴性样品溶液5ml，再加盐酸溶液（9→1000）约75ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在277nm的波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算甲硝唑加入量，计算加样回收率。
（3）甲硝唑工作对照品：
采用依照中国药典2015年版“甲硝唑”项下进行全检合格，标定纯度的甲硝唑原料药。
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