脐血单个核细胞的免疫学研究进展Word格式.docx

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单位数量脐血中CFUGM的含量高于动员后的外周血12～16倍，相当于或超过骨髓；

脐血中的BFUE、红系集落形成单位（CFUE）的数量也高于成人外周血及骨髓。

另外，脐血样本形成的集落也比骨髓形成的集落大，显示脐血CD34+CD38-细胞群克隆形成能力较成人外周血及骨髓强。

研究发觉，尽管脐血中HLADR+和HLADR-两群细胞有97%的细胞处于G0或G1期，但两群细胞增殖专门快，经含细胞因子液体培育36h后仅有50%的细胞处于G0或G1期，而骨髓中80%HLADR+细胞和90%HLADR-细胞处于G0或G1期，经36h培育后仍有80%处于G0或G1期。

说明脐血中CD34+CD38-细胞对集落生长刺激因子具有更高的灵敏性，细胞生长周期更短。

端粒是在所有真核生物染色体结尾的富含G′C的重复DNA序列，在细胞割裂期间端粒重复序列的丢失被以为可能是细胞衰老的机制。

应用DNA印迹法、荧光原位杂交法研究发觉，脐血干细胞的端粒平均长度明显较骨髓干细胞的端粒长。

另外，脐血HSPC的端粒酶活性高于骨髓及外周血HSPC，脐血HSPC低表达甚或不表达细胞凋亡配基CD95/Fas,因此脐血的造血增殖潜能要高于骨髓，其移植存活期比骨髓更长、更稳固。

2脐血T淋巴细胞的免疫学特性

脐血T淋巴细胞在移植物抗宿主病（GVHD）、移植物抗白血病（GVL）和免疫调剂中发挥重要作用。

研究说明，脐血T淋巴细胞在表型、功能、免疫效应分子及许多膜受体的表达等方面，与成人外周血T淋巴细胞存在许多不同。

脐血成熟T细胞数量不足，T细胞表面抗原标记和T细胞亚群发育不成熟，且呈异质性［3］。

脐血CD4+、CD8+、CD3+淋巴细胞绝对数量低于成人外周血，而CD4+/CD8+比值较外周血高，CD8+T细胞数低于外周血。

体外去除CD8+T细胞，定量输入CD4+T细胞的供体淋巴细胞能够有效地介导针对慢性粒细胞性白血病（CML）的GVL，使BMT后复发的病人达到再次诱导减缓的成效，而GVHD的发生率较低［4］。

这提示CD8+T细胞在介导人类GVHD中最为重要，而CD4+T细胞那么可能有GVL效应。

因此脐血CD8+T细胞数较低可能是脐血移植后GVHD发生率低、程度轻的缘故之一。

CD45RA+T细胞是未经抗原刺激的原始T细胞，在受抗原刺激后转化为经历性细胞，即CD45RO+T细胞。

文献报导脐血中以CD45RA+T细胞为主，而CD45RO+T细胞显著低下。

CD45RA+T细胞没有辅助功能，要紧起免疫抑制作用。

致使脐血移植后GVHD发生率低，但同时有可能降低GVL。

CD26是T细胞的活化抗原，现已知脐血中以CD26+CD45RA+T细胞为主（超过88%），而CD26+CD45RO+T细胞不到2%，成人外周血中CD26+CD45RA+T细胞占34%，而CD26+CD45RO+T细胞占48%。

SEIJI等［5］的研究说明，CD26与CD45RA的共调剂可能致使脐血T细胞通过CD26的活化能力下降。

脐血T细胞与成人外周血T细胞免疫功能相差专门大。

脐血中的T淋巴细胞受1次、2次和3次异体抗原刺激后，相应的细胞毒活性比成人T细胞活性低，而且愈来愈低，而成人T细胞那么慢慢增高。

在最初的混合淋巴细胞培育中，脐血和成人T细胞均能产生很强的增殖反映，受第2次刺激后，脐血T细胞显现无反映状态，其增殖反映、细胞毒效应均较成人外周血T细胞弱，而活化诱导的细胞凋亡反映较强［6］，提示脐血中T细胞关于异体抗原能产生耐受性。

与成人T细胞相较，脐血T细胞受刺激后分泌更高水平的IL10，可是分泌较低水平的许多其他细胞因子，包括IL二、IL4、IL八、IFNγ、TGFβ和TNFα［7］。

脐血IL二、IL4、IL8和IFNγ等细胞因子含量较低，提示脐血中幼稚、未分化成熟的免疫细胞不能产生足量的细胞因子。

脐血淋巴细胞产生细胞因子的细胞群要紧为CD4+CD45RA+，而外周血那么为CD4+CD45RO+和CD8+CD45RO+细胞群。

实验说明，脐血T细胞对细胞因子或化学因子刺激应答反映较迟缓，且分泌细胞因子的能力较成人外周血明显低下。

这主若是脐血T细胞的蛋白合成能力、细胞因子mRNA丰度和转录速度较成人T细胞低。

脐血T细胞其他免疫效应分子含量亦与外周血T细胞不同，穿孔素是细胞毒性T细胞发挥细胞毒作用的重要效应分子，文献报导脐血T淋巴细胞穿孔素的含量与成人外周血T细胞相较显著下降。

SATO等［8］研究结果说明，脐血T细胞和成人外周血T细胞对细胞因子反映性不同可能由于它们的受体不同。

HODGE等［9］在研究T细胞IL2产生的同时研究IL2R表达情形，发觉脐血T细胞和成人外周血T细胞IL2Rα和IL2Rγ比例无不同，但脐血T细胞表现出低IL2Rβ表达，且上调延迟。

有研究证明，脐血T淋巴细胞不表达IL1R。

另外，在T细胞亚群中有一类特殊的细胞亚型，它具有自然杀伤（NK）细胞受体和T细胞受体且显示NK细胞和T细胞两方面的性质，能恒定表达Vα24JαQTCR及识别CD1d表达的糖酯，这确实是NKT细胞。

NKT细胞依托其同意多克隆激活后产生的IL4［10］，在抑制TH1细胞介导的自身免疫性疾病和GVHD中起重要作用。

与成人外周血相较，脐血中NKT细胞的含量显著减少［6］。

脐血中的NKT细胞具有较低的免疫原性和较高的分化潜能。

成人的NKT细胞有经历力，呈寡克隆增生，在第一次刺激后产生T0型因子。

尽管脐血中的NKT细胞也表现出经历性表型（CD45RO+CD62L-），但有其自身的免疫学特性：

①表现活化的标志，如CD25；

②是多克隆性的；

③在第一次刺激后不产生细胞因子［11］。

可见，尽管脐血NKT细胞也表现出经历性，但功能仍不完善。

脐血T淋巴细胞的上述免疫学特性决定了脐血的免疫功能，尤其是特异性细胞免疫功能是不成熟的。

3脐血B淋巴细胞的免疫学特性

与成人外周血相较，脐血B淋巴细胞的表型、功能相对不成熟。

脐血中B细胞约50%为原始型，由于宫内隔间环境长期缺乏特异抗原的刺激，不能转化为产生抗体的浆细胞，亦几乎不能产生IgG和IgA，只能产生必然量的IgM和IgD。

CD5+、CD19+是脐血B细胞不成熟亚群标志，CD10是初期B细胞的免疫标志。

研究显示，脐血B淋巴细胞数量与成人外周血相当，但不成熟亚群CD5+CD19+和CD10+CD19+的比例显著比外周血高。

正常情形下，成人外周血B细胞仅少量表达CD1C、CD3八、CD五、CD23抗原，而这些抗原在脐血B淋巴细胞均高表达。

功能分析显示，脐血B淋巴细胞受IL二、IL3、有丝割裂原等刺激后的增殖反映较弱。

脐血缺乏表达膜IgG和IgA的循环B淋巴细胞；

脐血B淋巴细胞所有类型重链的mRNA表达水平仅为成人外周血细胞的1/10，提示脐血B淋巴细胞不能形成IgG和IgA型浆细胞，可能是因为缺乏适合的前体细胞。

另外，脐血B淋巴细胞CD27表达缺点及没有适合T细胞辅助可能也是其功能不成熟的缘故。

由此可见，脐血的体液免疫功能也是不成熟的。

4脐血NK细胞和LAK细胞的免疫学特性

NK细胞是脐血移植后第一恢复的细胞群之一［12］。

宿主NK细胞介导抗移植物反映，而供体NK细胞的异基因反映降低了白血病的复发率［13］，并爱惜病人免于GVHD的损害［14］。

脐血淋巴细胞绝对数比成人外周血高2～3倍，大颗粒淋巴细胞（80%～90%是NK细胞）绝对数也明显增高。

COHEN等［15］研究发觉，脐血富含原始的CD16+CD56+NK细胞，其具有重要的增殖能力与细胞毒活性，能被IL12或IL15诱导增殖，以达到强有力的移植物抗白血病效应。

与骨髓来源的NK细胞比较，脐血NK细胞与LAK细胞有以下特点：

①脐血NK细胞对Daudi靶细胞的致死毒性作用强；

LAK细胞有相当高的诱导YAC1靶细胞凋亡的毒性，而骨髓源的LAK细胞无此作用［16］；

②新分离的脐血NK细胞能够裂解肿瘤细胞，在多种细胞因子作用下能够分化成LAK细胞，尽管脐血NK细胞产生的细胞毒性低于成人外周血NK细胞，但结合K562细胞的能力相当；

③加入IL2或IL2R进行培育，脐血NK细胞活性可达到外周血NK细胞水平，且可增加穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B的mRNA表达，从而产生LAK细胞［17］，进行Westernblotting证明骨髓的NK细胞无颗粒酶B蛋白的表达；

④脐血NK细胞能够激活颗粒酶/穿孔素溶解途径及Fas/FasL活动，这被以为与脐血移植后急性GVHD的低发生率有关［12］；

⑤研究说明，脐血诱导产生的LAK细胞可裂解新鲜的白血病细胞；

⑥脐血NK细胞杀伤性抑制性受体（KIR，包括CD158+a/CD158+b）CD158+b表达明显低于外周血NK细胞［18］。

有学者以为脐血的细胞毒作用要紧由NK而非CD8+T细胞介导。

另外，BERTHOU等研究发觉，穿孔素在脐血CD8+T细胞中表达量极低，而要紧表达在CD3+NK细胞和其他不成熟NK细胞亚群，并以为脐血细胞毒作用要紧由穿孔素阳性NK细胞，而非CD8+T细胞介导。

由此可见，在脐血干细胞移植（UCBSCT）后的GVL作用中，免疫系统非特异反映细胞——NK细胞起重要作用[19]。

5脐血抗原提呈细胞的免疫学特性

树突状细胞（DCs）是至今所知的功能最强的专职脐血抗原提呈细胞（APC），但DCs在组织中含量甚微，仅占外周血单个核细胞的1%以下。

目前，DCs要紧由CD34+HSPC或CD14+单个核细胞在细胞因子作用下诱导取得。

人DCs的要紧特点性标志为CD1a、CD11c及CD83，DCs还表达MHCⅡ分子，共刺激分子CD80及CD86，黏附分子CD54等。

脐血DCs的经典培育方式是用GMCSF/TNFα诱导CD34+HSPC生成。

SORG等［20］研究说明，脐血中DCs占单个核细胞的%～%，要紧表达HLADR、CD4、CD11a、CD45RA、CD50、CD54、和CD123，低表达CD5八、CD10二、CD116，而不表达CD11c、CD80和CD86，显示脐血中DCs数量少，并呈现不成熟细胞表型。

但是亦有研究显示，新鲜脐血与外周血比较，其CD34、CD3八、CD1a阳性细胞数明显高于外周血，CD83、CD11c、CDw123等抗原阳性细胞数亦高于外周血。

提示新鲜脐血中含有更多的CD34+细胞和DCs，体外应用细胞因子诱导将可能产生更多的功能性DCs。

ZHENG等［21］研究结果说明，GMCSF和IL4诱导脐血和外周血的增殖能力是相同的，但脐血取得高表达CD80、CD83、CD1aDCs时刻要较外周血早。

更多的研究说明，脐血来源DCs同外周血及骨髓来源DCs一样，具有较强的刺激同种异体T淋巴细胞增殖及激发T淋巴细胞抗肿瘤免疫反映的功能。

除IL1外，APC产生的细胞因子的量明显低于成人细胞。

脐血来源的单核细胞IL1mRNA、IL1蛋白产量与成人细胞一致；

巨噬细胞被脂多糖激活后，IL二、IL15mRNA转录、翻译速度虽与成人细胞一致，可是脐血APC产生的IL二、IL15蛋白量却不如成人血相应细胞。

因此，由于共刺激因子产生不足，脐血APC的抗原提呈能力较成人APC明显低下。

综上所述，由于脐血HSPC含量丰硕、细胞较原始、增殖分化能力较强，移植后能够长期重建造血。

CBMNC的免疫原性较弱，致使UCBSCT后GVHD发生率低且程度轻，而GVL作用那么因存在NK、LAK活性而保留。

事物总存在两面性，也正是由于CBMNC的上述特性，UCBSCT后有造血与免疫重建延迟的缺点。

相信随着研究的进一步深切，UCBSCT将扬其长而避其短，有着加倍广漠的前景。

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