CD3200中文手册e第三单元Word文件下载.docx

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L用于红细胞/血小板稀释

12µ

L用于血红蛋白稀释

红细胞/血小板分析

1.稀释液/鞘状注射器将2.79mL的稀释液分配至分液阀，穿过分液阀与1.67µ

L剂量的红细胞/血小板一起被转移至红细胞混合装置内。

2.然后将片断和稀释液传送至红细胞/血小板混合装置，在那里以漩涡作用混合稀释液。

最终稀释液的比例为1:

1675。

3.样本转移泵将红细胞/血小板稀释液从红细胞/血小板混合装置中转移至光学流动池样本入口喷嘴处。

4.以恒定压力下在鞘液池内将稀释液/鞘液试剂引入激光流式细胞仪。

5.随后，样本测定注射器将24µ

L的红细胞/血小板稀释液注入流动池内，其注射压力（和速度）低于稀释液/鞘液试剂的压力（和速度）。

6.围绕在红细胞/血小板稀释液周围的鞘液速度越高，汇集红细胞/血小板稀释液的流动池的特定几何学意义越明显，因此即可以逐个计数个体流动池。

7.一束激光聚焦在流动池上。

当样本流截断激光束时，在0度、10度和90度处测量被分散的光束用于红细胞，在0度、10度处测量用于血小板。

血红蛋白分析

1.稀释液/鞘状针管将1.7mL的稀释液分配至分液阀，穿过分液阀与12µ

L剂量的HGB一起被转移至HGB流动池内。

2.在稀释液将HGB液样转移至HGB流动池后，HGB溶解针管将0.9mL的HGB溶解产物分配至行内。

HGB溶解产物的入口点位于分液阀和HGB流动池之间。

3.将片断、溶解产物和稀释液传送至HGB流动池，在那里以漩涡作用混合稀释液。

218。

4.将一个低能量发光二极管连在HGB流动池上以测量555纳米处的光吸收值。

该吸收值与样本的HGB浓度成比例。

白细胞分析

按照下列方法视觉分析白细胞：

1.白细胞溶解针管将0.973mL的白细胞溶解试剂分配至分液阀，穿过分液阀与20µ

L的白细胞液样一起被转移至白细胞混合装置。

2.然后将片断和试剂传送至白细胞，在那里以漩涡作用混合稀释液。

最终稀释液的比例为1：

50。

经稀释的样本在混合舱内停留14秒钟以供红血球溶解。

3.样本转移泵将白细胞从白细胞混合装置内转移至激光流式细胞仪样本入口喷嘴处。

5.随后，样本测定注射器将46.5µ

L的白细胞稀释液注入流动池内，其注射压力（和速度）低于稀释液/鞘液试剂的压力（和速度）。

6.围绕在白细胞稀释液周围的鞘液速度越高，汇集白细胞稀释液流的流动池的特定几何学意义越明显，因此即可以计数个体流动池。

当样本流截断激光束时，在分别位于前向（0度和10度）以及测向（90度和90度直角）位置上的四个不同的探测器测量由流动池分散的光束。

脆性与阻溶性红细胞

当在正常的患者模式下运行样本时，如果显示F白细胞报警时操作人员可能怀疑出现了脆性，或者如果显示R红细胞和N红细胞报警时操作人员可能怀疑出现了阻溶性红细胞。

在样本中含有脆性或者阻溶性红细胞的情况下，一种替代方法可以用于测量白细胞。

这种方法的结果被称为核光学计数（NOC）。

NOC测量来源于HGB稀释液，如下文所述。

附加说明请参考本单元后面段落中的“核光学计数”和“阻溶性红细胞”中的内容。

在标本类型屏幕上有两个不同的关键标签，一个用于脆性，另一个用于阻溶性红细胞。

有关可应用的标本类型讨论请参考运行菜单软键，子单元：

第5单元“操作说明”中的标本类型。

当选择了脆性标本类型时，在数据记录器中会同时报告NOC和WOC。

NOC数值会在运行屏幕和实验室工作表上白细胞的形式报告。

当选择了阻溶性红细胞标本类型时，在数据记录器中会同时报告NOC和WOC。

NOC或者WOC会在运行屏幕和实验室工作表上白细胞的形式（取决于算法化决策）报告。

当选择了QC标本类型时，在数据记录器中会同时报告NOC和WOC。

针对脆性和阻溶性红细胞所作的分析具体如下：

1.在测量HGB样本之后（参考本单元前面所述的血红蛋白分析），样本转移泵将经过稀释的溶液从HGB流动池中转移至激光流式细胞仪样本入口喷嘴处。

2.以恒定压力下在鞘液池内将稀释液/鞘液试剂引入激光流式细胞仪。

3.随后，样本测定注射器将140µ

L的HGB稀释液注入流动池内。

4.围绕在HGB稀释液周围的鞘液速度越高，汇集白细胞稀释液流的流动池的特定几何学意义越明显，因此即可以计数个体流动池。

5.一束激光聚焦在流动池上。

当样本流截断激光束时，使用0度探测器测量被流动池分散的光束。

计数溶解细胞的核子作为NOC结果。

6.脆性和QC标本类型中的白细胞分析步骤如同本单元前面所述的白细胞分析中的内容。

7.阻溶性红细胞模式中的白细胞分析步骤如同上文白细胞分析中所述，但是不同之处在于经稀释的白细胞片断在白细胞混合装置内另外溶解15秒钟。

所显示的结果

所有数据被传送至数据模块用于分析。

结果参数的结果经计算后显示在运行屏幕上。

同时结果还被储存在称作数据记录器的记录模式中。

冲洗设备

1.吸样步骤中残留的样本片断被冲洗入2号废物舱内。

2.白细胞和红细胞混合装置内的残留的片断被冲洗入3号废物舱内。

3.送至激光流式细胞仪的片断被冲洗入1号废物舱内。

漂洗设备

1.使用稀释液/鞘液从内部和外部漂洗开放式吸样探针。

2.在关闭式模式中，使用稀释液/鞘液从内部和外部漂洗针头。

3.使用稀释液/鞘液漂洗白细胞和红细胞/血小板混合装置。

4.使用稀释液/鞘液漂洗激光流式细胞仪和样本行试管。

5.使用稀释液/鞘液漂洗HGB流动池。

流式细胞计数介绍流式细胞计数

CELL-DYN3200运用了流式细胞计数的技术分析红细胞/血小板、白细胞、和NOC总数。

本单元对流式细胞计数的原理进行了简要介绍。

流式细胞计数是一个步骤，其中在一个单一纵列内由一条液流产生的个体细胞和其他生物微粒穿过一道光束。

一个或数个传感器通过测量光束的丢失或者分散从而获得细胞或者微粒的物理或化学特点。

流式细胞计数能够对大数量的细胞进行快速筛选并且在单一细胞水平上提供定量细胞分析。

流式细胞计数的基本成分包括：

一个样本收集器和传送器

一个流动系统以汇集样本流向

一个光源和聚焦光学器件

光束收集器、信号探测器、和偏光器

数据收集和储存

数据显示和分析

1直角（90°

和90°

D）分散光探测器

2激光管

3前倾角（0°

和10°

）光探测器

4激光流式细胞仪

5激光

图3.1光工作台

使用光工作台探测

光工作台组件包括构成流式细胞计数的成分。

描述见图3.1。

光工作台的主要目的是当光束穿过流动池时探测被流动池分散的光束。

探测步骤在本单元中论述。

光源是一束垂直偏振的10mW氦氖激光，其波长为632.8nm。

该激光束穿过一个圆柱形镜头后，其形状由圆形改变为椭圆形。

然后该光束被引导并穿过一个125µ

m的裂缝，该裂缝将光束较微弱的外缘阻挡。

这一过程产生了一个波长大约为80µ

m、强度均匀的光束，使池流可以轻度徘徊在流动池内但是仍然暴露在相同的光照强度下。

一个成像镜头将聚焦激光束集中在石英流动池上。

样品转运注射器将不同的样本稀释液注入激光流式细胞仪内的鞘液流中。

以液体流动学的方式将样本聚焦于直径大约为30µ

m的小液流中。

这一经过聚焦的液流使经过稀释的池排列成单一的纵列穿过光束，这样就可以在探测器的传感区域内一次一个地探测细胞。

由于小池的平均直径小于经过聚焦的光束，所以小池不会过多分散激光束。

如果残留的未经分散的光束可以达到0°

（前倾）探测器，那么它将使电子饱和。

因此，一个遮蔽条阻挡了0°

–1°

前倾未经分散的光束。

前倾的分散角被引入一个穿孔镜。

0°

（1°

–3°

）分散光穿过镜子达到0°

硅光敏二极管探测器。

10°

（7°

–10°

或者更窄的角度）分散光经镜子折射偏离到达10°

直角分散光被引入至一个700µ

m的裂缝，该裂缝阻挡了来自于流动池壁的分散光。

然后，一个光束分离器将直角分散光分成两份。

一份光被引入至90°

PMT。

剩余部分被引入穿越一个水平偏振器。

只有改变了偏振作用（去偏光）的光方可穿过偏光器到达90°

DPMT（使用PMT是因为相对于此角度没有光线分散）。

每个探测器收集的光信号被转化为电子信号或者脉冲。

这些脉冲根据强度进行数字化处理后被分类为256个通道供每个角度的光束测量之用。

如果一个脉冲超出了0°

和10°

探测器的硬件阈值区间，那么池计数器会计数该脉冲并储存以供进一步评估之用。

低于该阈值区间的脉冲不包括在计数之内。

来自于每个探测器上的信息以列表模式被收集。

这种格式储存了来自于每个通道的四维信息。

然后，该数据用于测定WOC鉴别和红细胞、血小板、以及NOC计数。

以列表模式的格式存储在软盘上的数据可以随时被修改为分散点图或者经修改后以不同的运算法则分析。

激光流式细胞仪

在流式细胞计数中，细胞悬浮液经由一个样本试管从混合装置内被转移至一个特殊的带有小型开启顶端的流动舱内。

然后，悬浮液被注入一股快速移动、不含细胞的液体（鞘液）中。

由于不同的液体流动速率不同，因此它们彼此不会混合。

流动细胞的特定几何学以及鞘液的流速迫使细胞进入单一的纵列中。

这一过程叫做流体动力学聚焦。

（激光流式细胞仪见图3.2）

当细胞进入视野剂量（特定的观测区域）时，它们截断了激光束。

不同类型的细胞以不同的角度分散光束，从而生成有关细胞大小、内部结构、粒度和表面形态学方面的信息。

由细胞产生的光学信号经过探测后被传送至电子脉冲，后者被计算机储存并分析。

流式细胞计数通常测量两个分散角度。

前倾角光分散测量细胞的大小。

侧角（直角）光分散测量细胞表面和内部结构，但是最主要地还是测量内部粒度。

结合来自于这两种分散测量方法的信息所获得的细胞种属间的鉴别要比单一地使用其中任何一种方法更加精确。

（图3.3为CELL-DYN3200测量的光分散举例）

1进样口

2鞘液流

3样本流

4聚焦激光束

5不同角度的分散光

图3.2激光流式细胞仪

白细胞测量

光学通道用于测定白细胞数据。

在样本吸收过程中，20µ

L的样本在分液阀中被分割以供白细胞测量。

白细胞针管将0.973Ml的白细胞溶解产物分配至分液阀。

然后将样本和溶解产物转移至白细胞混合装置内，在那里以漩涡作用混合稀释液，结果稀释液比例为1:

样本转移泵将白细胞稀释液从混合装置中转移至激光流式细胞仪内的样本入口喷嘴处。

同时，以恒定压力下在鞘液池内将鞘液试剂引入激光流式细胞仪内的进鞘液口处并且注入池内。

在此同一时刻，样本测定注射器将46.5µ

L的白细胞稀释液注射入鞘液流中。

然后样本流以流体动力学的方式聚焦细胞，使其排列成单一的纵列穿过光学流动池，后者是一个在光学上清澈透明的石英舱。

一束垂直偏振的氦氖激光作为光源。

设备测量：

●两种类型的前倾角光分散（1°

至3°

，参考为0°

，7°

至11°

，参考为10°

或更窄的角度）

●两种类型的直角（侧）光分散（70°

至110°

，参考为90°

，70°

去极化，参考为90°

D）

本方法参考MAPSS™（针对多角度偏振分散分离）技术。

这四种测量方法的不同组合可以用于分类白细胞亚群并提供形态学报警。

1.聚焦激光束

2.0°

分散

3.10°

4.90°

5.90°

D分散

图3.3白细胞光分散

图3.3举例说明了在白细胞光学测量步骤中分散光的测量。

通过列举0°

通道内超过硬件阈值范围发生数目从而测定白细胞计数。

来自于所有四个测量方法中的信息用于将白细胞分成五个亚群：

嗜中性粒细胞

淋巴细胞

单核细胞

嗜曙红细胞

嗜碱性粒细胞

按照分散点状图以图像的形势呈现白细胞数据。

按照操作人员的要求，还可以两种柱状图的形式呈现白细胞数据。

白细胞试剂

与CELL-DYN3200设备一同使用的白细胞试剂是CELL-DYN白细胞溶解产物。

它是白细胞分析的完整部分之一。

稀释于试剂中的白细胞包含接近于其自然状态下的细胞完整性。

由于嗜碱性颗粒的吸湿特点嗜碱性结构会有轻度改变。

该试剂同样可以改变红细胞。

红细胞的渗透压高于该试剂的渗透压。

因此，红细胞中的血红蛋白从细胞中弥散出来，而试剂中的水分弥散入细胞内。

细胞膜仍保持完整，但是现在红细胞具有与鞘液相同的折射指数，所以使其在激光下无法辨认。

白细胞鉴别

光分散信息以绘图的形式呈现在分散点状图表格中。

（还可以按照要求，以柱状图的形式呈现数据。

）每一个经过分析的细胞以点的形式呈现在分散点状图中。

通过在指定的X和Y轴的通道信息交会部位描绘出测定时刻的点。

例如：

如果一个细胞落在X轴的通道50上和Y轴的通道50上，那么该点即为这两个通道的交会点。

可以不同的结合方式描绘分散信息以产生不同的信息。

CELL-DYN3200使用了分散点状图以将白细胞鉴别为五个亚群：

图3.4单核–分叶核分散

单核–白细胞的光散射分离

分散信息描绘在Y轴的90°

分散和X轴的10°

分散之内。

（90°

/10°

分散点状图显示在图3.4中。

）两种细胞被清晰地显示出来。

单核细胞落在分散点状图左下角群落中，而分叶核细胞落在该群落的上方和右侧。

该设备使用了一种动态阈值以测定两种种群间的最佳分离。

然后每个细胞被鉴别为单核或者分叶核。

一旦每个细胞经过鉴别后，无论其出现在其他分散点状图的任何部位，它都将保留其分类。

图3.5嗜中性粒细胞–嗜曙红细胞分散

嗜中性粒细胞–嗜曙红细胞分离

分散信息描绘在Y轴90°

D分散和X轴90°

分散上。

D/90°

分散点状图显示在图3.5中）只有分叶核细胞被描绘在这张分散点状图中。

单核细胞已经被鉴别出来，因此不会干扰分叶核细胞的进一步分类。

分叶核细胞的两个亚群被清晰地显示出来。

嗜中性粒细胞落在两个群落的靠下方位上。

嗜曙红细胞落在群落较上方的位置。

该设备使用了动力学阈值以测定两个亚群间最佳的分离。

然后每个细胞被分类为嗜中性或者嗜伊红。

所有细胞分散特定数量的90°

D光。

嗜曙红细胞比其他细胞分散更多的90°

D光，因为它们所包含的颗粒具有独特的特点。

嗜曙红细胞的这一特性用于对其地阳性确认，并且因此将其明确地与嗜碱性粒细胞群鉴别开来。

单核分离

分散信息描绘在Y轴0°

分散和X轴10°

（0°

分散点状图显示在图3.6中）单核细胞被描绘在这张分散点状图中。

运算法则同时运用了嗜中性粒细胞群落的定向以协助分类单核细胞。

三个种群的单核细胞被清晰显示出来。

由于嗜碱性粒细胞包括在单核群落中，因此有三种类种群的单核细胞。

从特点上看，嗜碱性粒细胞是颗粒状细胞，因此比单核细胞更加复杂。

但是，嗜碱性颗粒溶于水，并溶解在白细胞溶解试剂中。

因此，失去颗粒的嗜碱性粒细胞的复杂性降低并落入单核细胞群落中。

淋巴细胞落在下方较大的群落中。

（淋巴细胞下方的小型细胞群落包含微粒，它们不大可能是白细胞）嗜碱性粒细胞落在群落的上方并且略微靠近淋巴细胞的右侧。

单核细胞落在淋巴细胞和嗜碱性粒细胞群落的上方。

该设备使用了动力学阈值以测定这三种主要种群之间的最佳分离。

然后，每个细胞被分类为淋巴细胞、单核细胞或者嗜碱性粒细胞。

最后，设备评估位于淋巴细胞群落下方但是高于硬件阈值（通道23）之间的区域。

任何落在这个区域内的微粒经由动力学阈值从淋巴细胞中分离出来。

下列细胞类型可能呈现在这个区域内：

N红细胞

未溶解的红细胞

巨大血小板

血小板丛

此区域内的所有微粒都被排除在白细胞和鉴别群之外。

其他分散点状图

90°

/0°

分散信息被描绘在Y轴90°

分散和X轴0°

D/0°

D分散和X轴0°

D/10°

D分散和X轴10°

所有分散点状图都可以根据操作人员的要求显示和打印。

核光学计数

由于在测量过程中细胞快速衰退，因此包含脆弱白细胞的样本很难被精确测量。

为了获得精确的白细胞计数，一种应用HGB片断（不是白细胞片断）的替代方法被用于测量包含脆弱白细胞的样本。

HGB样本片断在HGB流动池内经过测量之后被转移至光学流动池，而不是按照正常的患者周期被送至废物舱。

在HGB流动池内，HGB试剂溶解白细胞的胞质膜，但是允许单核细胞膜完好无损。

这样使样本中的白细胞稳定性更高。

HGB片断在被送至激光流式细胞仪之前被溶解大约15秒钟。

当HGB片断穿过激光流式细胞仪时，计数细胞的核子。

这种测量方法的结果被储存在数据记录器中，名为NOC。

阻溶性红细胞

当在常规患者模式中运行含有阻溶性红细胞的标本时，白细胞溶解试剂中的细胞溶酶剂可能在计数白细胞的所定时间内不够用于溶解“阻溶性”细胞。

因此，未溶解的红细胞可能错误地包括在白细胞计数之内，并导致一个虚假的评估数值。

当发生这种情况时，必要数量的基质将被呈现在0º

/10º

分散点状图白细胞动力学阈值下方的N1区域内。

当在阻溶性红细胞模式下二次运行这些类型的标本时，在混合装置内白细胞样本的稀释时间要比常规患者模式长15秒钟。

这一额外的溶解时间用于分解（溶解）阻溶性红细胞并防止它们干扰白细胞计数与鉴别。

在阻溶性红细胞标本类型下运行标本可能会出现较高的假阳性带报警的发生率。

白细胞柱状图

图3.7白细胞柱状图

TheCELL-DYN3200能够以两种柱状图的方式呈现白细胞分散信息：

N白细胞–LYM–MONO（N-L-M）和Mono–Poly（M-P）。

NOC（核光学计数）数据也可以呈现为柱状图的形式。

（参考图3.7）这些柱状图可以根据操作人员的要求显示并打印。

N白细胞–LYM–MONO柱状图

分散信息被描绘在一个柱状图的格式中，其Y轴是相对细胞数目，X轴是N白细胞、淋巴细胞、单核细胞尺寸分布数据。

MONO–POLY柱状图

分散信息被描绘在一个柱状图的格式中，其Y轴是相对细胞数目，X轴是单核细胞和分叶核细胞尺寸分布数据。

NOC柱状图

NOC数据被描绘在一个柱状图的格式中，其Y轴是相对核子数目，X轴是尺寸分布数据。

白细胞参数

图3.8白细胞数据和分散点状图

白细胞数据通常如图3.8中的描述显示。

所有数字和图像数据都自动显示在选定模式中的运行屏幕上。

当描绘完白细胞分散信息并且细胞已经被分类入五个亚群后，运算法则接下来测定白细胞和每个亚群中细胞百分数。

一旦测定完白细胞计数后，每个亚群中细胞的绝对数字乘以白细胞计数的百分数。

结果按下列方式表示：

白细胞#xK/µ

L

NEU#xK/µ

L和%

LYM#xK/µ

MONO#xK/µ

EOS#xK/µ

BASO#xK/µ

针对绝对数目和百分数，显示屏上的小数点后保留三位有效数字。

通过下列颜色进一步鉴别白细胞亚群：

嗜中性粒细胞—黄色

淋巴细胞—蓝色

单核细胞—紫色

嗜曙红细胞—绿色

嗜碱性粒细胞—白色

嗜碱性粒细胞显示为白点，但是在彩色打印输出上显示为黑点。

白细胞分散信息通常以如图3.8所示的两种分散点状图显示：

尺寸/复杂性尺寸（0°

分散）信息描绘在Y轴上，复杂性（10°

分散）描绘在X轴上。

粒度/小叶性粒度（90°

D分散）信息描绘在Y轴上，复杂性（90°

分散）信息描绘在X轴上。

白细胞报警

白细胞报警信息请参考本单元中“操作信息与数据报警”子单元。

红细胞/血小板测量

光学通道用于测定红细胞和血小板数据。

在吸样过程中，1.67µ

L的样本在分液阀处被分割用于红细胞/血小板测量。

稀释液/鞘液针管将2.79mL的稀释液分配至分液阀。

然后样本和稀释液被转移至红细胞/血小板混合装置，在那里以漩涡作用混合，最终稀释液的比例为1:

1,675。

样本转移泵将红细胞/血小板稀释液从混合装置转移至激光流式细胞仪内的进鞘液口处。

样本测定注射器将24µ

L的红细胞/血小板稀释液注入鞘流中。

然后样本流以流体动力学的方式聚焦细胞，使其排列成单一的纵列穿过激光流式细胞仪，后者是一个在光学上清澈透明的石英舱。

共有256个尺寸通道用于每个参数，每个红细胞尺寸通道相等于1Fl，每个血小板尺寸通道相等于0.137fL。

使用0°

、10°

、和90°

传感器数据计算红细胞参数，使用0°

传感器数据计算血小板参数。

红细胞参数

图3.9红细胞数据与柱状图

所有数字和频率尺寸分布数据自动显示在选定格式内的运行屏幕上。

数据以柱状图的形式显示针对于红细胞的尺寸分布数据。

尺寸分布数据描绘在X轴上。

细胞的相对数目经标准化后描绘在Y轴上。

红细胞数据显示在图3.9中。

红细胞计数

直接测量红细胞计数，并以下列方式表达：

红细胞=#xM/µ

低于1.0xMµ

L的计数显示为小数点后三位数。

校准红细胞计数的重叠率和白细胞干扰。

MCV

平均细胞容积是个体红细胞的平均体积