夏桑菊颗粒分析报告方法确认方案设计Word文档下载推荐.docx
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夏桑菊颗粒收载于《中国药典》2015年版一部，鉴别
（1）、鉴别
（2）、鉴别（3）、指纹图谱及迷迭香酸含量测定项下的检验方法已改变，为确保方法的准确性和可行性，为日常检测方法提供依据，因此按照2010新版GMP要求，需要进行分析方法确认。
方法验证必须按照验证方案进行，此次验证方案包括：
专属性、精密度、线性、范围、准确度，本确认方案使用薄层色谱法对鉴别检验方法进行确认，再使用高效液相色谱仪对含量测定的检验方法进行确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。
1.1确认方式
按《中国药典》2015年版一部修订版及2010年版药品GMP指南质量控制实验室与物料系统分析方法确认要求进行验证。
2.确认目的
建立夏桑菊颗粒鉴别
（1）、鉴别
（2）、鉴别（3）、指纹图谱及迷迭香酸含量测定方法的确认方案，在实验过程中严格按照《中国药典》2015年版一部操作步骤实行，确保试验结果真实可信，以确认夏桑菊颗粒按《中国药典》2015年版一部测定的方法是否适用于本实验室。
3.适用范围
适用于本公司的鉴别
（1）、鉴别
（2）、鉴别（3）、指纹图谱及迷迭香酸含量测定项下的检验方法确认。
4.确认小组成员与职责
部门及职务
姓名
确认工作中职责
QC检验员
执行确认方案；
负责验证过程中相关的检验操作，收集整理数据，起草确认报告。
QA监督员
负责确认全过程的监控。
质量保证部
负责确认方案及确认报告的审核；
审核确认过程中发生偏差的解决方案，以及采取纠正措施。
QC主任
负责起草确认方案，并组织实施确认工作，及整理确认报告。
质量负责人
负责确认方案、报告的批准及确认过程中的协调工作
5、人员培训情况
序号
1
2
3
4
参与人员
是否已培训
是□否□
培训情况
合格□不合格□
确认人：
年月日
复核人：
6.1.1对照品和样品：
名称
批号
来源
储存条件
迷迭香酸对照品
蒙花苷对照品
夏枯草对照药材
野菊花对照药材
桑叶对照药材
夏桑菊颗粒
确认人
6.1.2确认前，对与此次确认相关的文件进行检查（见下表）
文件名称
文件编号
是否现行文本
检验方法验证（确认）管理规程
M/ZL-QC038-05
AE240型电子天平标准操作规程
W/SOP-ZL-QC10-023-05
AE240型电子天平维护保养及清洁标准操作规程
W/SOP-ZL-QC11-023-05
高效液相色谱仪标准操作规程
W/SOP-ZL-QC10-022-05
高效液相色谱仪维护保养及清洁标准操作规程
W/SOP-ZL-QC11-022-05
夏桑菊颗粒检验操作规程
W/SOP-ZL-06-C18-02
夏桑菊颗粒质量标准
T/ZLB-06-C18-02
确认
6.1.3试剂：
无水乙醇石油醚（30-60℃）甲醇环己烷乙酸丁酯异丙醇甲酸正己烷三氯化铝乙酸乙酯、均为分析纯。
6.1.4可接受标准：
对照品、试液、试剂与试药符合验证要求且在效期内；
所有文件都应为现行版本，且经过批准
6.2.鉴别
（1）的确认：
6.2.1专属性
6.2.1.1取本品10g，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
另取夏枯草对照药材0.5g,加水50ml，煎煮30分钟，过滤，滤液用石油醚（30-60℃）振摇提取2次，每次25ml，弃去石油醚液，水层蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作对照药材溶液。
再取迷迭香酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各2-4μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸（15：
3:
3.5:
1）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；
在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
6.2.1.2空白样品的制备：
称取未加夏桑菊稠膏的供试品0.2g，加无水乙醇30ml，充分振摇溶解，作为空白样品溶液。
同上述普通样品的制备的方法进行点板、展开剂显色。
6.2.1.3可接受标准：
普通样品的色谱图中，主成分的斑点与其它干扰物的斑点均应完全分离，互不干扰；
空白样品的色谱图中，应无其它干扰物的斑点影响。
结果见下表。
确认内容
标准要求
检测结果
结果评价
专属性
被测物的斑点应得到良好分离
6.2.鉴别
（2）的确认：
6.2.2专属性
6.2.2.1取野菊花对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理30分钟，过滤，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液。
另取蒙花苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
《照薄层色谱法操作规程试验》，吸取（鉴别1）项下的供试品溶液及上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（5:
）5℃以下放置过夜的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，挥干，在紫外光（365nm）下检视。
6.2.2.2空白样品的制备：
称取未加夏桑菊稠膏的供试品约0.2g，加无水乙醇30ml，充分振摇溶解，作为空白样品溶液。
6.2.2.3可接受标准：
6.2.鉴别（3）的确认：
6.2.3专属性
6.2.3.1取桑叶对照药材1g，加水100ml，煎煮1小时，滤过，滤液蒸至近干，残渣加无水乙醇10ml，超声处理10分钟，滤过滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液。
《照薄层色谱法操作规程试验》，吸取（鉴别1）项下的供试品溶液及上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（12:
8:
1:
）为展开剂，在相对湿度60％以下展开，取出，晾干，放置30分钟，在紫外光（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
6.2.3.2空白样品的制备：
称取未加夏桑菊稠膏的供试品约0.2g，加无水乙醇30ml，充分振摇溶解，作为空白样品溶液。
6.2.3.3可接受标准：
6.3.指纹图谱照《高效液相色谱法操作规程》测定。
6.3.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以乙腈为流动相A，以1%醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；
流速为每分钟0.9ml；
柱温为35℃；
检测波长为320nm。
理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于20000。
时间（分钟）
流动相A（%）
流动相B（%）
0～508→3392→67
50～5133→867→92
51～60892
6.3.2参照物溶液的配制取绿原酸对照品，迷迭香酸对照品和蒙花苷对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含绿原酸25ug迷迭香酸15ug和蒙花苷25ug的溶液，即得。
6.3.3测定法分别精密吸取参照物溶液和（含量测定）项下的供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录60分钟色谱图，即得。
6.3.4.结果判断：
供试品指纹图谱中，应分别呈现与参照物色谱保留时间相应的色谱峰。
按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算5～60分钟的色谱峰，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90。
结果见下表
检测项目
标准要求
测试结果
结果评价
备注
指纹图谱的相似度
相似度应大于0.90
附图谱图
6.4含量测定（迷迭香酸）
6.4.1回收率试验
1）色谱条件：
色谱柱：
C18柱；
以乙腈：
1%醋酸（19：
:
81）为流动相；
检测波长为329nm。
理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于5000。
2）对照品溶液的制备：
取迷迭香酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25ul的溶液，即得。
3）供试品溶液的制备：
取同一批已知含量的供试品，研细，共称取6份，每份称取样量为规定
取样量的约50%（约0.62）g，精密称定，置具塞锥形瓶中。
再分别精密加入迷迭香酸对照品约
3.0mg（直接加入），精密加入75%甲醇25ml，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，
放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
4）测定法：
分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul,注入液相色谱仪，测定。
试验结果见下表：
5）可接受标准：
将实测值与理论值比较，计算回收率。
要求：
各浓度下的平均回收率均为98.0%～
102.0%，6个回收率数据的相对标准差（RSD）应≤2.0％。
回收率=
检出率–样品含量
×
100%
对照品取样量
迷迭香酸回收率试验结果
编号
取样量（g）
样品含量（mg）
对照品加入量（mg）
检出率（mg）
回收率（%）
平均回收率（%）
RSD（%）
5
6
确认
6.4.2.重复性
1）供试品的制备：
取100%处方量的供试品取约1.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中。
精密加入75%甲醇25ml，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
2）测定法：
吸取供试品溶液10ul,注入液相色谱仪，按上述色谱条件中连续进样6次，测定其峰面积，计算其相对标准偏差。
试验结果见下表。
3）可接受标准：
采用6次的测定结果进行评价，其相对标准偏差应不大于2.0%.
序号
主份名
峰面积
平均值
RSD%
迷迭香酸
综合评价
6.4.3.稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，分别于0、1、3、7、13小时进样，按上述色谱条件测定。
结果见下表附图：
放置时间
平均峰面积
RSD（%）
0小时
1小时
3小时
7小时
13小时
6.4.4专属性
1）普通样品的制备：
取重复性项下处理得的样品作为的供试品溶液。
2）空白样品的制备：
称取未加迷迭香酸的供试品约1g，按上述供试品的制备方法进行处理样品。
3）测定法：
按上述色谱条件进行测定，吸取普通样品和空白样品各20ul,各进样1次，注入液相色谱仪中，进行测定。
4）可接受标准：
色谱图中，各主份应分离良好，空白样品无干扰。
色谱峰应分离良好，无干扰
6.4.5线性关系考察分别精密量取迷迭香酸对照品mg/ml甲醇溶液（1、2、3、4、5、6mL），分别加入75%甲醇制备成浓度为、、、、、ug/mL的对照品溶液。
各精密吸取10uL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。
以迷迭香酸对照品的浓度（ug/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
可接受标准：
相关系数R应大于0.999。
结果见下表附标准曲线表。
浓度（ug/mL）C
峰面积A
回归方程为A
相关系数R
确认过程中应严格按照本确认方案执行，出现个别项目不符合标准结果时，应按偏差管理规程进行处理，有异常事项未解决时，不得进行下一步的工作。
由质量保证部和检验室主任对分析方法确认的结果进行审核，检查所有测试项目已经完成；
变更和偏差都已经得到解决和批准；
每个项目均应符合它们的确认可接受标准；
确认记录完整。
由检验室填写确认报告，由确认组长在报告中签署评审结论，提交确认总负责人进行批准。
9、再验证周期
（1）生产工艺发生改变。
（2）检查方法发生改变
10、参考文献
10.1《药品GMP指南》2010年版
10.2《中国药典》2015年版一部
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