生物材料检验复习资料.docx

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生物材料检验复习资料

生物材料检验：

分析检验生物材料中化学物质及其代谢物的含量或因化学物质引起的的生物效应指标变化。

生物材料：

是人体体液（如血液）、排泄物（如呼吸气、尿液）、毛发，指甲以及组织脏器等的总称。

生物标志物：

指生物系统接触外源性物质后出现的一种变化。

分为三类：

接触性生物标志物、效应性生物标志物，敏感性生物标志物。

生物接触限值（BEL）：

大体相当于健康人吸入接触最高允许浓度的毒物时生物材料中被测物的水平。

尿液可分为全日尿，晨尿，定时尿和随时尿。

生物半减期：

指进入生物体内的化学物质的里量通过各种途径消除一半所需要的时间，又代谢半减期。

一、检验方法的一般要求：

1.方法的一般要求1）灵敏度选择符合生物监测的基本要求2）操作简便3）试剂易得、价廉4）效率高5）符合国情，易推行、推广

2．选择和建立生物检测方法必须考虑的因素：

1）被测成分①溶解性，稳定性②含量水平高g/L水平低ug/L

二、方法研制准则的基本内容

1．取样、运输、保存的原则

1）取样：

（1）容器工具材质不干扰测定

（2）取样的操作要防止污染（3）取样时间根据半减期判断决定（4）取样的体积尿液>=50ml静脉血>=5ml末梢血500ul

2）保存时间：

一天，三天，一周，两周一般只要求两周

3）运输过程：

保证分析物稳定，必要时要冷藏和冷冻运输

4）防腐剂（尿）和抗凝剂（血）

2.样品预处理原则

1）尿液浓度按比重校正尿标准比重1.020，>1.030及<1.010的尿液应弃去

2）样品预处理的目的是消除干扰

（1）测定无机物时①用稀释液稀释后测定②混合酸消化

（2）测定有机物成分：

先水解，再分离（3）回收率>=75%

3.制定分析方法的程序

1）分析条件选择、优化

2）确定检出限

（1）影响检出限的因素：

试剂的纯度，仪器的工作状态，电源稳定性光源的温度变化、污染等不可控制的因素。

（2）检出限的确定一般用统计法，一般用空白值的3倍标准差计算；色谱法用3倍噪音水平，检出限应小于0.3倍生物接触限值。

（3）检出限的表示方法浓度或绝对量表示，用浓度表示时要说明方法取样体积。

3）精密度：

同一个人用同一方法重复测定同一均匀样品测定结果的符合程度通常在线性范围内取高、中、低三个浓度水平分别重复测定3~5次。

用RSD表示或用变异系数表示复杂方法RSD<=20简单方法<=10.

4）准确度

（1）分析高低浓度水平和国家级标准物质各一组，测定值应在标准值的不确定范围内。

（2）用接触表样品的加标回收率表示回收率>=75%若>105%表明存在明显的系统误差。

（3）用标准方法或权威方法比较：

①两个方法均值相对误差应小于10%②t检验在确定一个置信水平条件，两方法测定无明显差异

5）干扰试验：

如果有干扰，要找出消除干扰的方法

6）样品的稳定性实验：

时间：

当天，3天，1周，2周温度：

室温，普通冰箱冷藏（4℃），冷冻保存（-8℃），低温冰箱（-20℃）

4.方法的验证1）新方法的验证：

必须是另一单位①研制方提供方法所有技术材料②验证内容：

四项线性范围，精密度，准确度，样品的稳定性。

2）引进国外标准方法或权威方法，引进方就是验证方。

5.现场应用①首先要观察检出率②观察检测结果与环境污染的符合程度③同时取非接触样品进行对照

三、确定生物监测指标的依据

（一）化学物质在体内的动力学过程

1.吸收1）呼吸道吸收①气体物质通过肺泡壁及周围毛细血管吸收②固体物质，溶解时吸收的前提2）皮肤①有些有机物很容易被皮肤吸收F=C/15*（0.038-0.153p）exp（-0.016MN）F皮肤吸收量mg/㎝2/hC化学物质在水中的饱和度mg/mlP辛醇-水的分配系数MN相对分子质量②许多农药易被皮肤吸收如有机磷

2.体内分压和贮存1）起始主要分布于血液中最终分布取决亲和力2）血液侧得量是反映新近吸收量或机体组织的水平3）血液中毒物或其他被测物并非均匀分布4）一般脂溶性溶剂及卤代烃会分布在脂肪组织中，乳汁是检测有机氯农药最好的样品5）体内储存毒物的形式大多为结合状态，测定尿液中的代谢物需要先水解

3.生物转化1）概念：

外源性化合物在体内经过一系列化学变化并形成其衍生物以及分解产物的过程。

2）有关生物转化的讨论①是毒物发生质的变化②生物转化的数量关系，个体差异很大③是一种动态过程，对时间的了解是确定采样时间的基础，生物半衰期。

4.排出易挥发性有机溶剂从呼吸气中排出较多。

长期蓄积的有机氯农药可从乳汁中排出及叮咛中排出，易代谢的有机毒物大多以结合态从尿中排出。

（二）、个体差异

1、毒物在生物体内的动力学过程有种属家族和个体的差异，其中生物转化过程变异极大；2、生物监测的个体差异可用监测结果的变异系数表示；

3、个体差异降低了生物监测的精确性，却可帮助检出特殊敏感人群或耐受人群。

（三）、接触水平（剂量）—效应（反应）关系

1、是确定一次生物监测指标的关键依据；

2、生物监测结果与空气毒物浓度之间的相关资料，可作为选择生物监测指标的替代依据。

四、检验指标的选择与分类

（一）、选择的基本要求1、特异性好；2、具有良好的剂量—效应关系；3、稳定性好；4、

有准确可靠的检验方法。

（二）、生物材料检验指标的分类1、化学物质原形：

①化学物质在生物体内不进行生物转化或转化速度很慢；②缺乏毒物代谢动力学资料；③代谢产物在体内没有特异性

2、化学物质代谢产物3、生物效应指标。

五、样品的采集与保存

一）、生物材料样品的选择

（一）、种类及特点

●尿液:

最常用的1）特点：

采集方便、无损伤性、采集量大2）适用性：

水溶性化学物质、代谢产物、金属等3）尿样的种类：

（1）全日尿（24h尿）收集24h内的全部尿液，通常只用于住院病人

（2）晨尿起床后、早餐前第一次排出的尿（3）定时尿：

生物半减期①班前尿：

第2个工作日上班前以内排出的尿②班中尿：

上班2~3h以后排出的尿③班末尿：

下班前1h内排的尿④班后尿：

下班以后1h以内排出的尿⑤周末尿：

连续工作第五个工作日的班末尿。

●血液1）特点：

①成分较恒定②个体差异小③取样污染机会小④损伤性采集样品⑤血样贮存条件要求较高；2）种类：

①血清：

不抗凝离心分离出的上层清夜②血浆：

加抗凝剂离心分离的上层清夜③全血④红细胞。

●呼出气1）特点①优点：

操作方便、干扰物少，非损伤性②缺点：

a、被测物的含量比较低b、肺泡气中水分对某些测定有影响c、肺部“死腔”中环境空气对肺泡气稀释不稳定，影响测定结果的解释；2）适用性①监测仅限于挥发性物质②主要用于测定化学物质原形③呼出气监测结果能反映采样期间车间空气的平均浓度；

3）呼出气的分类混合呼出气、终末呼出气（肺泡气）第一阶段呼出的是空气，第二

阶段混合呼出气，第三阶段肺泡气。

（二）、生物材料样品的选择

1、同一毒物或代谢产物在不同生物材料其生物学意义不一样，血镉代表近期接触水平、尿镉反映长期接触的浓度；

2、选择生物材料样品种类的要求：

①被测物有特异性②与外剂量有相关性③有足够的稳定④测定结果重复性好，个体差异在允许范围内⑤采样能被受试者接受；

3、尿、血、呼出气是目前较理想的生物材料样品，美国BEI55个尿58%、血27%、呼出气14%。

二）、样品采集、运输及保存

（一）、一般要求

1、采样时间：

依据生物半减期；2、采样环境：

无污染；

3、采样容器：

①测无机成分、塑料、高压聚合玻璃：

硬质、石英不锈钢含Cr、Ni、Mn（不能用于测此三种元素）使用前要求用酸液（稀HNO3）浸泡24h洗涤；②测有机物玻璃、塑料（不能用橡胶和添加染料的橡胶）冷冻保存不能用玻璃仪器；

4、样品的运输与保存；

5、采样记录①编号②检验项目③受试者信息④采样信息：

时间、地点、环境、过程。

⑤采样人及记录人信息

（二）样品采集与保存

1、尿样

1）尿样的校正：

（1）比重校正法标准比重1.020校正公式C校正=（1.020-1.000）/（d-1.000）*c=kcd的使用范围1.010～1.030

（2）肌酐校正法.尿中被测物浓度（mg/g肌酐）=实测浓度（mg/L）/肌酐浓度（g/L），肌酐含量

2）采样.采集尿液不少于50ml,用顶空分析法测定挥发性物质时.收集尿样的容器要充满尿样并知道体积，记录2人上次排光膀胱的时间及采集样的终点时间。

3）储存.贮存一般2周.反腐加酸.氯仿.冷藏测尿中汞或挥发性有机物要尽快测定要保存5天以上的，最好冷冻

2、血样

1）采集

（1）、全血；要抗凝

（2）、血清（血浆）或红细胞

2）注意事项采集过程避免污染.毛细管血防止溶血.金属针头（取下）再挤出针管时不能太快取末梢血要避免挤压采集部位，自然流出弃去第一滴血④有三种情况不宜采集毛细管血a血液量超过5ml.b采集环境有外源性化学物质存在c测定挥发性成分

3）血样的运输与保存避免振动和温度的改变血样冷冻肯定溶血采集血清或血浆时，应分离再保存临时存放4℃过夜，长时间保存要冷冻④测酶活性要采集后尽快分析

3.呼出气.

1）采集方法：

先深呼吸2~3次，再恢复正常呼吸时采集呼出气采集肺泡气只收集末端呼出气

2）注意事项：

受检者必须时肺功能正常者要选择对被测物吸附小的容器要在正常呼吸状态下收集样品呼出过程不能有阻力④采样的时机要依被测物代谢速度决定

三、生物材料样品的预处理原则

（一）无机物分析的样品处理

1、稀释法.

1）.常用的稀释剂;1）稀硝酸液（尿），2）TntonX—100表面活性剂3）基体改进剂溶液

2）.常用机体改进剂：

硝酸盐（NH4+Ni2+Ca2+）磷酸盐（Na+NH4+）

3）.应用实例:

磷酸铵，硝酸铵和TritonX-100可改善血清中铜锌的测定磷酸氢胺，硝酸铵测定血铅可提高灰化温度至1000℃硝酸镍可使测定砷和Se的灰化温度到1000℃④磷酸铵可使测定Cd的灰化温度增至800℃

2、酸提取法1.硝酸提取，测定血铅.6mol/L硝酸离心取上清液。

标准物质被测成分的含量是已知的2，盐酸提取3，三氯乙酸（固体）。

铁（有效）提取+2价铁

3、矿物化法（无机法处理）

（二）有机物分析的样品处理（p11）

第五节铅

一、接触途径：

铅矿，开采，冶炼

二、代谢物和生物监测指标

（一）动力学过程.

1、吸收1）呼吸道：

铅尘烟蒸汽2）消化道：

铅尘3）皮肤，无机物不吸收有机铅化合物可被吸收（四乙基铅）

2、分析：

起始分布在血中有95%与红细胞结合最终主要以磷酸盐沉积于管中，其次是肝肾脑等

3、生物效应：

抑制血红蛋白的合成

1）抑制5—氨基乙酰丙酸脱水酶，导致血尿中δ-ALA增加

2）抑制粪川啉元氧化酶

3）抑制亚铁螯合酶

4、排除：

吸收的铅主要经尿排出，尿铅生物半减期较长。

（二）铅接触的生物监测指标

1、血铅：

直接反映近期接触铅的情况

2、尿铅：

反应机体中铅的负荷量，是铅中毒的辅助诊断指标

3、生物效应指标：

1）尿中σ—ALA2）血中铅原卟啉

三、样品的采集与保存——用于尿铅血铅的测定

1.尿样.①采样时间的限定②随即采集一次尿样③按1%比例加HNO3，4℃可保存两周。

2.血样.1）末梢血40μL2）静脉血

四、尿铅和血铅的测定——石墨炉原子吸收法

（一）尿铅的测定

1、原理：

尿样用基体改进剂液稀释后直接进行测定，基体改进剂液NH4H2PO4+抗坏血酸

2、石墨炉升温程序——适用涂铜石墨管①干燥~70℃,40S②灰化450℃,30S③原子化2000℃5S（停气）④清除2200℃3S

3、石墨管涂钼处理，向石墨管中加20μL钼酸铵液，石墨炉升温程序①~③并重复10次升温，石墨管内壁呈灰白色

4、标准系列液配置①铅标准系列液②基体改进剂液（混合液）③正常人混合尿：

没有接触铅的健康人的尿，取2份，一份比重小于1.020，一份比重大于1.020，混合成比重为1.020的尿液

5、说明：

1）基体改进剂液的作用：

本法选用4%磷酸二氢铵-6%抗坏血酸作为基体改进剂，能有效地克服基体干扰

2）背景吸收的扣除①背景校正器扣除背景吸收，氘灯背景校正②石墨管涂钼可降低背景吸收

（二）血铅的测定

1、样品处理：

全血用TritonX-100液稀释，稀HNO3酸化，进样测定

2、石墨炉升温程序:

①干燥：

75℃-100℃,10S（斜坡升温）②灰化450℃-500℃30S保持10S（斜坡）③原子化2400℃7S④清除2500℃3S

3、标准系列液：

①铅标准液②TritonX-100液③正常人血

五、生化指标的测定

（一）尿中σ—ALA的测定

1、原理：

①σ—ALA可与乙酰乙酸乙酯缩合生成吡咯化合物②用乙酸乙酯萃取吡咯化合物③显色，加对一二甲氨基苯甲酸生成红色化合物λmax=554nm

2、操作要点：

①两份经稀释尿样——加PH=6缓冲液②样品管加乙酰乙酸乙酯③尿样空白管补充缓冲液④各沸水浴10min⑤各加4mL乙酸乙酯萃取⑥离心、静置、分层⑦取清夜显色10min后测定

（二）全血中游离原卟啉的测定

1、原理：

①用乙酸-乙酸乙酯破坏红细胞②盐酸萃取原卟啉，测定荧光强度

2、样品处理：

1）样品：

20μL血+0.1mL生理盐水2）加硅藻土悬浮液，乙酸乙酯—乙酸液、振摇、破坏红细胞3）离心，取上清液加盐酸萃取

第三节、镉

一、接触途径：

①锌矿的开采及冶炼②工业上含镉材料的生产③农业上也有镉化合物的应用

二、代谢和生物监测指标

（一）代谢1.吸收、呼吸道和消化道2.生物效应急性中毒靶器官：

肺慢性中毒靶器官：

肺、肾、骨3.排出少量由尿排出，属于蓄积性元素

（二）生物监测指标1、尿镉：

只反映长期接触情况2血镉：

只反映近期接触情况

三、镉接触指标的测定——石墨炉原子吸收法

（一）尿镉的测定

1、原理：

用磷酸氢二铵液稀释，直接标准曲线法定量

2、石墨炉升温顺序1）干燥0~100℃30S（斜坡）2）灰化100~200℃20S（斜坡）400℃10S（阶梯）3）原子化1800℃5S4）清除2000℃3S

3、标准系列液：

①镉标准液②空白尿液③基体改进剂液④1%NH3

（二）血镉测定

1、原理：

血样加稀HNO3离心，取上清液测定，标准曲线法定量

2、标准系列液①镉血标准液：

抗凝小牛全血+镉标准液②4%HNO3

第七节：

汞

一、接触机会①矿的开采与冶炼②电器和仪表制造③化学工业

二、代谢和生物监测指标

（一）动力学过程1.吸收主要是呼吸道2.分布无机汞主要是肾、其次肝、脑有机汞主要是脑其次肝、胃3.排出尿汞生物半减期2~3个月

（二）生物监测指标1.血汞：

反映近期接触无机汞的量2.尿汞：

用于诊断汞中毒观察驱汞疗效

三、样品采集、保存1.尿样：

①随机取一次尿样②加碱NaOH使浓度达到40g/L，4℃可保存2周2.血样①周末血②抗凝4℃可以保存数天

四、尿汞的测定——冷原子吸收法

（一）碱性氯化亚锡还原法

1.原理：

在碱性条件及有Cd+存在条件下，高浓度的SnCl2将有机汞及无机汞还原成元素，用测氯仪测定

2.标准系列液的配置①汞标准液②基体尿液正常人混合尿③NaOH液④DL-半胱氨酸

3.测定将上述标准系列液加1滴磷酸三酯，加SnCl2-CdSO4液立即通入空气测定（载气）

4.说明：

①磷酸三酯消泡②Cd2+催化作用③DL-半胱氨酸起稳定剂的作用，防止无机汞吸附挥发；还可使有机汞不分解④测定读数：

读取最大吸光度值

（二）酸性SnCl2还原法

1.原理：

用KMnO4和浓H2SO4分解尿样，使汞都转化成Hg2+，用SnCl2还原成Hg，吹空气导入测汞仪

2.测定：

尿液和标准系列液同样用KMnO4和浓H2SO4分解

3.说明：

1）KMnO4和浓H2SO4加入的顺序：

先加KMnO4液再加浓H2SO42）测定前先对气路系统进行净化；加SnCl2（酸性）测定空白水、吹气观察到仪器的响应值为零为止每次测定都使响应值为0再测第二份

第三章：

非金属化合物及其代谢产物

第一节：

CO

一、代谢及生物监测指标

1.吸收：

呼吸道

2.生物效应：

进入机体与血红蛋白结合形成碳氧血红蛋白（HbCO）形式导致机体组织缺O2

3.分布：

血液中HbCO形式

4.排出呼出气约有1%被氧化成CO2

5.生物监测指标1）血中碳氧血红蛋白2）呼出气中CO

三、样品的采集与保存

1.呼出气：

1）采集班中（3h后）或班末呼出气2）收集终末呼出气

2.血液：

1）采集班中（3h后）或接触最高浓度时的血2）抗凝3）密闭保存4℃11周4）最好取静脉血5）受试者不抽烟

四、血中碳氧血红蛋白的测定——分光光度法

1、原理：

1）血中血红蛋白的四种成分：

Hb、HbO2、HbCO、HbMet

2）HbCO，HbMet

Hb3）测定Hb和HbCO吸光度，最大吸收波长分别为432nm和420nm

2、测定方法：

1）摩尔吸光系数的测定：

用吸光系数代替

（1）过饱和HbO2液的制备，血样用水和Tris液适量稀释通入O230min

（2）饱和HbO2液的制备：

取

（1）中2份通入N2

（3）饱和HbCO液制备取

（1）中2份，通入CO10min

（4）HbCO和Hb液制备在

（2）和（3）的溶液中加Na2S2O4固体

（5）分别测定420nm和430nm吸光度作为吸光常数（有四个值）

2）血样测定

分别测420nm和430nm的吸光度

3．计算：

A420：

血样在420nm吸光度；A430血样在430nm吸光度

K1、K2是HbCO在420nm、430nm的吸光常数

K3、K4是Hb在420nm、430nm的吸光常数

4.注意事项：

（1）所用氮气和氧气应为高纯度氮和高纯度氧，不纯氮和氧气中含微量的CO，能干扰测定结果

（2）连二亚硫酸钠遇水易分解，在空气中容易被氧化失效，应以小瓶分装使用，避免接触空气和水分

（3）测定吸光系数必须采用新鲜血液，一次测定值在仪器波长稳定的情况下可以使用一段时间，但还应定期核检。

（4）测试液应尽量避免接触空气，及时测定，否则会造成结果偏低

第二节CS2

二、代谢及生物监测指标

（一）代谢

1、吸收：

呼吸道、皮肤2、生物转化

1）吸收后约70~90%转化为多种代谢产物

2）目前，接触者中尿中已确认的有3种：

TTCA、2-巯基-2-噻唑啉酮-5，硫脲（其中TTCA研究较少，生减期为2h）

3）排出：

a.代谢产物随尿排出b.约20~30%以原形从呼吸道排出c.约1%以原形从尿中排出

（二）生物监测指标

1、尿中TTCA：

班末尿

2、呼出气中CS2,目前研究较少

三、样品采集与保存

四、尿中TTCA的测定——HPLC法

1、样品的处理：

A、取离心后的尿样B、稀HCL酸化：

乙醚提取C、离心分层，去上层醚液于试管中D、40℃用N2吹干加20ul甲醇定容

2、说明：

A、尿样经离心后取上层尿液，易于分离B、此法从国外引进，将原来的梯度洗脱改为等度洗脱。

国外的梯度洗脱是用两种配比的流动相切换洗脱C、TTCA纯品需自己纯化

五、呼出气中CS2测定

（一）GC法

1、样品处理：

（1）、呼出气中CS2浓度在测定范围内不需要处理，直接进样

（2）、呼出气中CS2低于测定浓度范围需富集，用TenronGC管富集

2、色谱条件：

固定相：

OV-17；检测器：

火焰光度检测器

3、说明：

（1）采集终末呼出气，最后呼出的100ml

（2）TenronGC管：

2,6-二苯基对苯醚的多孔聚合物，用于捕集/热解吸（3）富集测定要求做富集空白测定：

用180ml气体（冲洗气）注入空白TenronGC管中，热解吸后测定

（二）检气管法：

快速检测法

1、根据检气管中形成色带长度，粗略估计浓度

2、特点：

操作简单、快速、成本低、精度差，相对偏差达20%-30%以上

第四章芳香烃及其代谢产物

第一节苯

一、代谢及生物监测指标

1、吸收：

主要是呼吸道，其次是皮肤

2、代谢与排泄

1）吸入的苯约50%以上以原形从肺中排出，约10%以原形储存在有机组织中

2）约40%进入血液循环，在肝中代谢，代谢产物50%-70%的苯酚，6%为间苯二酚，2%为对苯二酚，还有极少量的粘糖酸等都以结合态从尿中排出

3）有极少量的苯以原形从尿中排出

3、生物检测指标：

1）尿酚A、因正常人尿中很有酚且个体差异大B、尿酚不是特异性指标C、仅用于群检

2）呼出气中的苯：

在测定尿酚以后，测定呼出气中苯作为确认试验

3）尿苯：

1993年有人提出用尿苯作苯接触的生物接触指标，目前，还没纳入生物监测指标

二、呼出气中苯的测定——GC法

（一）原理：

用塑料袋或采样管收集呼出气，呼出气用N2吹入活性炭管吸附（-78℃）280℃热解吸，用载气（N2）导入色谱仪，FID检验，通过六通阀切换完成

（二）苯标准气的配制：

注入20ul苯于100ml玻璃配气瓶中，临用时从中抽取一定体积注入另一配气瓶中稀释成20ng/ml的苯标准气

（三）测定：

1）取苯标准气（0.5、1.0、2.0ul）和样品分别注入呼吸气的采样管中2）将采集管37摄氏度恒温2h3）一端与六通阀连接，一端接N24）吹入冷阱（-78℃）中的活性炭管5）热解吸导入色谱仪

三、尿酚的测定——GC法

1、原理：

尿样加盐酸加热（90℃水浴）水解，再用乙醚萃取苯酚

2、尿样采集与保存：

班末尿50ml4℃2周

3、样品处理与测定：

1）5.0ml尿样，1ml浓盐酸于具塞试管中，90℃水浴1h2）、用3.0ml乙醚振摇萃取3）取上层醚液注入GC仪

4、标准曲线：

苯酚标准系列液用3ml乙醚提取

4、色谱条件

（1）液晶柱分离分离苯酚和邻间对甲酚。

（2）FFAP柱，分离苯酚和对甲酚

5、说明：

（1）3ml乙醚萃取要避免乙醚挥发，分层后不是3ml，加乙醚补至3ml

（2）可用内标志法定量

四、甲苯、二甲苯

（一）代谢及生物监测指标

1）代谢

（1）甲苯①约15%~25%以原型呼出约1%从尿中排出②约80%代谢甲苯→[O]苯甲酸→马尿酸马尿酸排出的半减期为2~3人。

（2）二甲苯①约5%原形从肺中呼出②60%~80%生物转化主要终产物是甲基马尿酸

2）生物监测指标

（1）甲苯①尿中马尿酸非特异性对群体判断有一定的定义②呼出气体中甲苯作为确认

（2）二甲苯：

尿中马尿酸正常人尿中无甲基马尿酸特异性指标

（二）、尿中马尿酸的测定—比色法（喹啉苯磺酰氯比色法）

（1）原理

（2）样品采集两天后班末尿，按100+1体积比加氯仿

（3）样品处理与测定

（4）注意事项：

1、试剂加入顺序不能颠倒

2、日光对显色有破坏作用要避光放置（加入苯磺酰氯后）

第四节乙苯

一、代谢及生物监测指标

（一）代谢与排泄1、只有少部分以原形从呼吸道排出。

2、70%以上代谢后随尿排出，主要代谢产物为扁桃酸60%苯酰甲酸25%

（二）监测指标