洁净区间空气消毒效果及周期验证文档格式.docx
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9.2洁净车间环境确认……………………………………………………………………………5
9.3洁净车间的清洁………………………………………………………………………………5
10验证检测…………………………………………………………………………………………5
10.1生物指示剂检测……………………………………………………………………………5
10.2物体表面菌检测……………………………………………………………………………5
10.3沉降菌检测…………………………………………………………………………………5
10.4验证标准……………………………………………………………………………………6
11验证结果的综合评价……………………………………………………………………………6
12再验证周期………………………………………………………………………………………6
附件1人员资格确认表
附件2计量器具确认记录
附件3洁净车间空气消毒剂的确认记录
附件4洁净车间空气消毒剂的确认记录
附件5洁净车间熏蒸消毒方法确认记录
附件6消毒试验方法确认记录
附件7检测环境确认报告
附件8生物指示剂检测记录
附件9洁净车间消毒后物体表面菌检测记录
附件10洁净室消毒30天后物体表面菌检测记录
附件11洁净车间消毒后沉降菌检测记录
附件12洁净车间消毒后30天沉降菌检测记录
附件13验证结果
附件14验证结果分析及评价
附件15验证结论
附件16验证报告
附件17验证证书
编号
SX/YZ6.4-06
洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证
版本
2013
验证方案
页数
第1页共6页
1概述
甲醛是常用的消毒剂，其3～5%的水溶液或乙醇溶液能破坏细菌繁殖体及许多芽孢、真菌和病毒，使其蛋白质、酶类变性。
甲醛熏蒸消毒法是洁净厂房消毒灭菌的常用方法，当相对湿度在65%以上、温度在24~40℃时，甲醛的消毒效果最好。
每立方米空间用34～40%甲醛液10ml，加热熏蒸，密闭一定时间后，通风，置换室内空气中的甲醛。
2验证目的
为确认熏蒸消毒法能够对洁净室（区）空气进行有效的消毒，选择最安全合理的熏蒸时间和空气消毒周期，制定特制订本验证方案，进行验证。
3验证范围
适用于本厂洁净室（区）的空气消毒效果及周期的验证。
4验证方案制定的依据
GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准
YY0033-2000《无菌医疗器具生产管理规范》
GB\T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》
5验证人员职责分工
小组职务
岗位
职责
组长
质管科长
1.负责验证方案的审批。
2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。
3.负责验证数据及结果的审核。
4.负责验证报告的审批。
5.负责发放验证证书。
6.负责再验证周期的确认。
组员
生技科长
1.负责洁净厂房的清洁。
2.负责熏蒸消毒前物料的转移或密封。
3.负责熏蒸消毒的实施。
4.负责验证所需仪器。
办公室
1.负责对人员资质的确认。
专职检验员
1.负责验证所需的试剂、试液等的准备。
2.负责仪器、仪表、量具等的校正。
3.负责取样及样品的检验。
4.负责拟订再验证周期。
确认结果记录于附录1《人员资格确认记录》
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6验证仪器设备
6.1验证所需仪器设备仪表
温控仪（干燥箱）SX-JQ-007
温控仪（细菌培养箱）SX-JQ-009
电子天平SX-JS-001
手提式压力蒸汽灭菌器（压力表）SX-JQ-004
尘埃粒子计数器SX-JS-011
温湿度表SX-JQ-010
温湿度表SX-JQ-012
微压表SX-JQ-027
6.2仪器仪表校验记录确认。
确认结果记录于附录2《计量器具确认记录》
7验证材料
7.1消毒材料的选取
①熏蒸材料选取：
甲醛溶液与高锰酸钾
②生物指示剂挑战性试验：
黑色枯草变种芽孢杆菌
7.2材料的用量：
①甲醛（40%）10毫升／立方米、高锰酸钾5克／立方米计算用量
②生物指示剂：
注挤吹车间、中转库、组装车间远离风口处各两组。
7.3材料的主要用途：
①甲醛（40%）：
对细菌、病毒、霉菌、芽孢有强大的杀灭作用。
验证对耐受菌种的杀灭作用。
7.4材料的确认：
应对消毒品种的合格供方、产品牌号等进行确认，见附件3《洁净车间消毒剂确认记录》。
8验证方法
8.1熏蒸消毒方法
1.根据洁净区待消毒区域的空间容积，计算消毒剂用量并准确称量。
2.关闭洁净室与外界联系的全部门和传递窗，并确认洁净室调配室人员全部撤离，停止空气净化系统运转。
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3.熏蒸前对检查洁净室关键房间的温湿度，应达到甲醛消毒的最佳条件。
4.先将甲醛倒入容器中，后加入高锰酸钾，人立即离开。
5.对房间进行熏蒸消毒。
启动空调机，使甲醛气体循环约30分钟，关闭空调机，熏蒸试验时间为10小时。
6.启动空调机，25%氨水加入组合风柜排风口内不锈钢容器中，总用量为12.5L/次，打开送排风系统排风中和12小时。
记录见附件4《洁净车间熏蒸消毒方法确认记录》。
8.2熏蒸参数
版本
验证参数
2011版验证
2013版再验证
熏蒸时间
8~10小时
8~10小时（选取10小时为例）
消毒周期
30天
药品计量
甲醛（35%--40%）15ml/m³
高锰酸钾7.5g/m³
高锰酸钾7.5g/m³
枯草黑色变种芽孢生物指示剂七组（一组阳性对照）
温湿度
相对湿度在65%以上、温度在24~40℃
8.3熏蒸时间与周期：
本次再验证选取熏蒸10小时并通风12小时后；
下个消毒周期30分钟前的2种情况下进行生物指示剂试验（只做消毒后）、物体表面菌和沉降菌检测，对消毒效果及周期进行再验证。
8.4生物指示剂试验方法：
在消毒前将枯草黑色变种芽胞生物指示剂放入注挤吹塑车间、中转库、组装车间远离风口各两处。
在消毒结束，新风循环12小时后，检验人员将菌片放入培养液中（培养液浸透菌片）。
然后置37℃48小时培养，另取一支未经消毒的指示剂作阳性对照。
8.5物体表面菌试验方法：
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在达到设定的熏蒸消毒时间（10小时），通风12小时后分别对洁净室（区）的各种表面进
行取样、培养，检测是否有菌生长。
8.5.1取样点：
分别包括设备、操作台、墙壁、地面等的开放表面与死角、缝隙处。
8.5.2准备：
灭菌的生理盐水、灭菌的1ml刻度吸管、灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、无菌的棉签、试管、酒精灯。
8.5.3取样方法：
将内径为5cm×
5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次（往返计为1次），将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水的采样管中。
8.5.4阴性对照的确认
将本次未用完的，稀释液、棉拭子、培养基等分别设阴性对照，按规定方法进行接种并培养。
8.6沉降菌试验方法：
在达到设定的熏蒸消毒时间（10小时），通风12小时候将制备好的营养琼脂培养基平皿按洁净室（区）沉降菌日常监测布点图放置，打开培养皿盖，暴露30分钟后，盖好皿盖倒置装入密封装置后转至培养室，将培养皿倒置于恒温培养箱内，在30～35℃中培养48小时。
8.6.1准备：
灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、酒精灯、恒温培养箱、高压灭菌锅。
8.6.2取样方法
测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经规定时间内，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度是否符合标准要求。
8.7试验方法确认
对生物指示剂消毒方法、物体表面菌试验方法、沉降菌试验方法进行确认，见附录5《消毒试验方法确认记录》
9验证环境
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9.1无菌实验室检测环境确认
检查并确认无菌实验室检测环境应符合YY0033-2000标准的相应的洁净要求。
见附件6《无菌实验室检测环境确认记录》。
9.2洁净车间环境确认
检查并确认洁净车间环境应符合YY0033-2000标准的相应的洁净要求。
见附件见附件6《无菌实验室检测环境确认记录》。
9.3洁净车间的清洁
熏蒸消毒前，将净化车间内物料转移或密封，进行清洁，减少药物对产品的污染，见附件6《无菌实验室检测环境确认记录》。
10验证检测
10.1生物指示剂检测：
经48小时培养后，若培养液变浑浊，颜色由红色变黄判为阳性。
培养液澄清，颜色不变为阴性，继续培养至七天。
见附录7《生物指示剂检测记录》
10.2物体表面菌检测：
将每个采样管振打80次，混匀，10倍递减稀释，对每个稀释度（取3个稀释度），分别用灭菌的刻度吸管取1ml将浸出液放于灭菌的培养皿（每个稀释度2个平皿）,并注入20ml的40-45℃的普通营养琼脂培养基，待凝固后，在30-35℃下倒置培养24小时,观察结果，取菌落数为30-300的平板计算，求出平均菌落数。
平均菌数×
稀释倍数
采样面积（cm2）
结果计算：
菌数/cm2=
见附录8-1《洁净车间消毒后物体表面菌检测记录》；
8-2《洁净室消毒30天后物体表面菌检测记录》。
10.3沉降菌检测：
10.3.1沉降菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）温、湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
10.3.2平皿进入被测房间前要先灭菌，采样时使用规定为Φ90mm×
15mm培养皿；
由微生物检测员按《培养基配制》的要求配制营养琼脂培养基，培养基于121℃湿热灭菌30分钟，冷却
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至45℃后灌注培养皿内，培养24h观察是否无菌；
检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用,将带培养基的培养皿密封转至监测区域（密封装置应进行消毒）。
10.3.3进入洁净室（区）监测时，采样者必须穿戴与被测洁净区域相应的工作服，操作人员将制备好的营养琼脂培养基按采样点布点（沉降菌采样点分布图）位置离地0.8～1.5m处放置，打开培养皿盖，暴露30分钟，检测人员及时填写记录，记录房间温湿度，压差及测试状态。
10.3.4盖好皿盖倒置装入密封装置后转至培养室，将培养皿倒置于恒温培养箱内，在30～35℃中培养48小时，并用3只培养皿作对照。
10.3.5用肉眼直接观察平皿计数，若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；
由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或下面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，
必要时用显微镜鉴别。
10.3.6结果计算
计算平均菌落数=（M1＋M2……＋Mn）／n，
式中M1：
1号培养皿菌落数，
M2：
2号培养皿菌落数，n：
培养皿数。
见附录9-1《洁净车间消毒后沉降菌检测记录》；
9-2《洁净车间消毒后30天沉降菌检测记录》。
10.4验证标准
A生物指示剂培养七天后仍无菌生长为消毒合格。
B物体表面细菌总数≤20cfu/cm2。
C沉降菌：
①百级操作台：
沉降菌≤1个/皿。
②一万级区域：
沉降菌≤3个/皿。
③十万级区域：
沉降菌≤10个/皿。
④三十万级区域：
沉降菌≤15个/皿。
见附录10《验证结果》
11验证结果的综合评价
对工位器具清洗消毒效果及周期验证的结果进行分析与综合评价，详见附录12《验证结果的分析及评价》、《验证结论》附录13《验证报告》、附录14《验证证书》。
12再验证周期
12.1当更换消毒剂时应进行再验证。
12.2当沉降菌和物体表面菌超过标准规定要求时应进行再验证。
附件1天台县双星医疗器械厂
人员资格确认表
NO.001
验证目的：
确认参加验证的人员具备正确从事验证活动的资格
验证要求：
1、至少有两人经培训合格的验证人员。
2、参与验证的人员与培训记录或相关证书相符。
验证依据：
YY0033-2000无菌医疗器具生产管理规范.
验证（操作）人员姓名：
人员专业：
√操作人员√检验人员√文件管理√计量器具管理
验证项目：
确认记录
1、文件管理□合格□不合格
1、计量器具管理□合格□不合格
2、检验员资质□合格□不合格
验证方法：
1.检查相关文件是否完整。
2.检查相关计量器具是否符合要求。
3.检查检测人员的培训记录或证书
不合格描述：
无
验证结论：
□合格□不合格
验证人：
日期：
审核结论：
审核人：
日期：
附件2：
天台县双星医疗器械厂
计量器具确认记录
仪器、仪表名称
编号
检定日期
有效期
校验结果
温控仪（干燥箱）
SX-JQ-007
2010年11月16日
1年
合格
温控仪（细菌培养箱）
SX-JQ-009
电子天平
SX-JS-001
手提式压力蒸汽灭菌器（压力表）
SX-JQ-004
2010年12月13日
尘埃粒子计数器
SX-JS-011
2010年10月29日
温湿度表
SX-JQ-010
2010年12月02日
SX-JQ-012
2010年03月17日
微压表
SX-JQ-027
2010年11月29日
结果评价
确认人：
附件3-1：
洁净车间空气消毒剂的确认记录
序号
确认名称
检查结果
结论
1
消毒剂名称
甲醛
符合规定
2
供方
杭州富强化工仪器有限公司
3
牌号
和为
4
主要成分及含量
分析纯
5
用途
熏蒸、消毒
6
使用方法
熏蒸
附件3-2天台县双星医疗器械厂
高锰酸钾
99.5%
附件4天台县双星医疗器械厂
洁净车间熏蒸消毒方法确认记录
熏蒸消毒方法与确认（确认结果打勾或者填写）
确认记录：
待消毒空间体积；
高锰酸钾重量；
甲醛溶液体积；
2.关闭洁净室与外界联系的全部门和传递窗，并确认洁净室调配室人员全部撤离，停止空气
净化系统运转。
门窗关闭□人员撤离□空气净化系统停止运转□
2.熏蒸前对检查洁净室关键房间的温湿度，应达到甲醛消毒的最佳条件。
温度；
湿度。
3.先将甲醛倒入容器中，后加入高锰酸钾，人立即离开。
操作顺序与方法□
4.对房间进行熏蒸消毒。
（1）启动空调机，循环气体30分钟□开启时间：
（2）关闭空调机，熏蒸10小时□关闭时间：
5.启动空调机，25%氨水加入组合风柜排风口内不锈钢容器中，总用量为12.5L/次，打开送排风系统排风中和12小时。
（1）启动空调机，排风口不锈钢容器中加25%氨水，用量12.5l/次□
（2）打开送排风系统排风中和12小时□开启时间：
确认结果评价：
操作人：
附件5天台县双星医疗器械
消毒试验方法确认记录
生物指示剂试验方法确认：
1.采样方法：
在消毒前将枯草黑色变种芽胞生物指示剂放入注挤吹塑车间、中转库、组装车间远离风口各两处，在消毒结束，新风循环12小时后，检验人员将菌片放入培养液中（培养液浸透菌片）。
然后置37℃48小时培养
2.阴性对照确认
物体表面菌试验方法确认：
在达到设定的熏蒸消毒时间（10小时），通风12小时候分别对洁净室（区）的各种表面进
1取样点：
2准备：
3取样方法：
4阴性对照的确认
沉降菌试验方法：
1准备：
灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、酒精灯、恒温培养箱、高压灭菌锅。
2取样方法：
方案确认：
方案符合GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准
年月日
附件6天台县双星医疗器械厂
检测环境确认报告
确认项目
检测结果
确认结论
室
百级操作台
洁净车间
温度
符合□不符合□
湿度
压差
沉降菌
换气次数
风速
尘埃粒子
清场记录：
熏蒸消毒前，将净化车间内物料转移或密封，进行清洁
确认者：
确认日期：
检测日期
报告日期
检验依据
GB15980-1995、YY0033-2000
检测区域
升级会员 