航空食品冷加工车间环境微生物检验方法编制说明.docx
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航空食品冷加工车间环境微生物检验方法编制说明
《生物安全柜使用和管理规范》
编制说明
一.任务来源
本标准的制定工作由国家认证认可监督管理委员归口并提出，文件号为国认科函[2011]54号，计划编号是2011B002。
本标准的起草单位有广东出入境检验检疫局、北京出入境检验检疫局、山东出入境检验检疫局和江苏出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：
李红权、孙良娟、高璟瑜、李丹、徐金龙、吴晓薇、姚瑶、师永霞、姜英辉、梅霓。
二.制定本标准的意义
2003-2004年我国多起生物实验室感染事故的发生，使政府和广大科研工作人员对实验室中产生的生物危害有了更为深刻的认识，我国政府高度重视和关注生物安全问题，明确了使用生物安全防护设备（安全隔离装置）是实验室生物安全防护的有效措施。
生物安全柜是利用空气净化技术，实现第一道物理隔离的技术产品，有效防止气溶胶的扩散。
为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，可将操作过程中产生的感染性气溶胶局限在安全柜内，避免有害或有潜在危害的生物因子对实验人员、实验室及其周围环境和生态造成的危害或潜在危害，是生物实验室的重要安全设备之一。
检验检疫实验室大部分都属于生物安全实验室，均配备了生物安全柜，但在实际应用中还存在一些认识和管理上的误区：
如只要在安全柜内，操作就不必很小心；配备了紫外线灯，就不必清洁安全柜内的工作区域等。
在操作中也存在一些很大的安全隐患，如在安全柜中使用喷灯将严重影响运行中安全柜内的层流，导致工作区域的气溶胶扩散增加，特别是当喷灯的火苗很大，过量的热可能融化高效空气过滤器过滤膜的黏结或在过滤膜上烧出洞等。
要有效避免实验室检验操作引起的生物危害，还必须根据相关法律法规建立相应的标准规范生物安全柜的使用和管理。
当前，尽管我国制定了生物安全柜的相关标准，但是缺乏使用和管理标准，指导实验室工作人员正确操作和使用生物安全柜，指导实验室正确做好生物安全柜的安装、校准、期间核查和维护保养，才能确保生物安全柜的正常运行，才能真正起到保护实验室工作人员和环境的目的，保证实验室的生物安全。
本标准旨在制定生物安全柜的使用和管理规范，规范生物安全柜的选择、安装和校准，指导实验室工作人员按统一要求、统一标准使用生物安全柜，并作好生物安全柜的期间核查和日常维护等，确保生物安全柜的正常运行。
此外，国外具有规范的标准或程序指导实验室做好生物安全柜的使用和管理，本标准旨与国际标准接轨，符合国际标准对生物安全的要求，保证实验室的生物安全。
三.国内外现行同类标准、法规、文献情况
目前，GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》虽然涉及了设备的管理但仅是总则，没有涉及生物安全柜的具体使用和管理规范。
YY0569-2005《生物安全柜》为生物安全柜的生产制造提供了标准依据，但对实验室正确使用和管理生物安全柜的指导性不强。
本标准将填补检验检疫行业标准中生物安全柜使用和管理标准的空白。
欧洲标准的EN12469-2000《生物安全柜性能要求》（EuropeanStandardEN12469（2000）:
Biotechnology-Performancecriteriaformicrobiologicalsafetycabinets）英国标准BS5726-1992《生物安全柜》（BritishStandardBS5726（1992）:
MicrobiologicalSafetyCabinets）为生物安全柜的生产制造和性能指标检测提供了标准依据。
世界卫生组织在2004年11月出版的《实验室生物安全手册（第三版）》第三部分实验室设备第10章生物安全柜中详细生物安全柜的分类、选择、安装和使用要求。
加拿大卫生局2004年颁布的实验室生物安全导则第三版第九章生物安全柜中（TheLaboratoryBiosafetyGuidelines:
3rdEdition2004,Chapter9:
BiologicalSafetyCabinets）也规定了生物安全柜的性能、分类、安装、检定和使用程序。
美国卫生局颁布的《生物危害控制规程》（PrimaryContainmentforBiohazards:
Selection,InstallationandUseofBiologicalSafetyCabinets.）中规定了生物安全柜的选择、安装要求和使用操作程序。
香港大学颁布的《实验室安全管理手册》中《生物安全柜》规定了生物安全柜的分类、选择、使用方法和溢出物应急处置要求。
四.与国内外现行法律、法规、标准的关系
本标准通条款的表述遵循了YY0569-2005《生物安全柜》中生物安全柜分类、安装、性能指标和性能检测要求。
本标准主要参考了世界卫生组织在2004年11月出版的《实验室生物安全手册（第三版）》第三部分实验室设备第10章生物安全柜中详细生物安全柜的分类、选择、安装、使用要求和溢出物应急处置程序；加拿大卫生局2004年颁布的实验室生物安全导则第三版第九章生物安全柜中（TheLaboratoryBiosafetyGuidelines:
3rdEdition2004,Chapter9:
BiologicalSafetyCabinets）也规定了生物安全柜的性能、分类、安装、检定和使用程序；美国卫生局颁布的《生物危害控制规程》（PrimaryContainmentforBiohazards:
Selection,InstallationandUseofBiologicalSafetyCabinets.）中规定了生物安全柜的选择、安装要求和使用操作程序；香港大学颁布的《实验室安全管理手册》中《生物安全柜》规定了生物安全柜的分类、选择、使用方法和溢出物应急预案。
标准中引用了：
GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》的部分术语和定义。
五.主要技术内容
本标准主要内容包括生物安全柜的选择；安装要求；使用要求，包括人员要求、物品摆放要求和操作要求；管理要求，包括检定、期间核查、维护、污染清除和记录要求；应急处置要求。
六.编制过程
2011年4-7月标准下达后，标准编制人员首先查阅了国内外现行的生物安全柜管理和使用的标准、程序等文献资料，其中国内资料20余篇，英文资料10余篇。
2011年6月，标准编制小组与参与完成单位北京出入境检验检疫局一起进行了标准开题启动会，成立了由2局人员共同组成的标准编制小组。
根据标准建议书的要求进行了任务分工。
具体分工是由广东出入境检验检疫局主持起草完成标准征求意见稿和编制说明，北京出入境检验检疫局完成部分英文资料翻译汇总，撰写生物安全柜期间核查方法及设计试验方案，以及对标准征求意见稿内容、结构等方面提出修改意见。
2011年9-12月，先后了解了检验检疫各领域实验室生物安全柜的配备情况，包括生物安全柜类型、安装环境、用途、使用率等，又到疾病控制中心、卫生监督所、国家食品安全检测中心等单位调研，了解系统外生物安全柜的使用和管理现状。
2011年8月-2012年3月，标准承担人员翻译了大量国外发达国家政府部门和高校现行的生物安全柜管理和使用的相关标准、程序文件和规定。
2012年4-6月，汇总整理现有中英文资料，完成标准初稿和编制说明。
2012年6-8月，确定生物安全柜期间核查项目、方法和判定依据，设计实验原始记录表格，并在实验室内开展实验验证。
2012年8-9月，就初稿与北京出入境检验检疫局起草人员讨论修改，并与部分生物安全柜生产厂家进行了座谈，就标准文本中生物安全柜的安装、使用、维护和期间核查等条款的可行性进行了咨询。
就反馈意见修改标准文本，修改完成标准征求意见稿和编制说明。
七.主要技术内容的确定
生物安全柜是在我国已经普遍使用的实验室生物安全防护的有效设备之一，国内现行的医药行业标准等标准中已经涉及了对生物安全柜分类、安装、性能检测的相关要求，而本标准是为实验室人员正确的使用和管理生物安全柜提供依据，为了使本标准具有统一、规范、通用的指导作用，本标准的撰写原则是遵循国内现行标准中对生物安全柜性能参数、安装条件和性能检测的基本要求，同时达到国际标准法规中对生物安全柜使用和管理的要求，本标准部分条款的确定和依据如下：
1、关于期间核查
1）、设立期间核查的标准依据
考虑到本标准是针对生物安全柜的设备管理规程，标准的条款应符合检测和校准实验室对设备管理的总体要求，在CNAL/AC01:
2005《检测和校准实验室认可准则》中的技术要求5.5设备中明确要求应开展设备期间核查。
生物安全柜是确保实验室生物全的重要设备，检验检疫是综合性的实验室涉及食品、卫生检疫、动植物检疫等多个领域，每个领域的实验室使用生物安全柜所开展的检测实验的危害等级和频次均不相同，有些领域出于实验室检测质量控制的要求还有特殊的规定，如GB/T27405-2008《实验室质量控制规范食品微生物检测》附录中要求食品微生物检测实验室需每两周进行一次生物安全柜微生物监测，即开展生物安全柜工作区洁净度检测。
可见，制订生物安全期间核查是符合实验室认可标准要求和检测质量控制需要。
2）、核查项目的确定
生物安全柜的性能指标很多，实验室内开展的期间核查应区别于全面专业的由有资质人员开展的生物安全柜的检定，选择与使用方法和频次有关的、关键的、对检测结果和生物安全防护有影响的重要指标开展核查，可以确保两次检定周期期间的设备的稳定和有效运行，降低可能存在的生物安全风险，保证实验室人员环境安全，保证检测质量。
遵循这一原则，编制小组通过广泛征集专业检定部分、设备厂家、实验室专家的意见，确定了开展期间核查的项目为垂直气流平均风速、工作窗口气流流向和洁净度。
3）、核查方法的标准依据
从经济性、实用性、可靠性、可行性等方面综合考虑，依据现有标准选择合适的期间核查方法和判定依据，撰写了附录B3生物安全柜期间核查方法和评价标准。
其中垂直气流平均风速和工作窗口气流流向的核查方法和评价标准，依据YY0569-2005《生物安全柜》中6.4和5.3部分。
生物安全柜的工作洁净度核查采用了仪器法和自然沉降法2种方法，方法依据是B3.1.2悬浮粒子法为GB50346-2004《生物安全实验室建筑技术规范》，B3.1.2沉降菌法是依据生物安全柜生产企业的进行生物安全柜出厂检验的企业标准,布点方法与仪器法相同。
生物安全柜工作区的洁净度评价标准分别是GB/T16292-2010《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》和国家药品监督管理局1999年8月1日发布实施中国药品生产洁净室（区）的空气洁净度标准。
4）、实验室内实验验证情况
鉴于标准中工作洁净度核查方法中B3.1.2沉降菌法的检验方法是依据企业标准，需要对检验步骤的可行性开展实验验证。
编制小组分别选取本实验室正常工作的经检定合格的从事食品中致病微生物检测、媒介生物样品解剖和分子生物学RNA提取3台不同用途、不同使用频次的Ⅱ级A2型生物安全柜，使用B3.1.2沉降菌法开展了工作洁净度检测，具体检测数据如下：
生物安全柜工作区洁净度检测记录—沉降菌法
A.验证实验一
型号
Labconco-logicA24-F00-4
出厂编号
D045925
使用年限
4
使用频率
5天/周
实验日期
2012．8.29
项目
沉降菌数
个/皿
沉降菌数平均值
个/皿
1
2
3
采样点
1
0
0
1
0.2
2
1
0
0
3
0
0
0
4
0
0
0
5
0
1
0
对照皿
1
0
2
0
评价结论：
☑合格□不合格
□合格
□不合格
注：
用于致病微生物检测
B.验证实验二
型号
Labconco-logicA24-F00
出厂编号
3849701
使用年限
4
使用频率
5天/周
实验日期
2012．9.3
项目
沉降菌数
个/皿
沉降菌数平均值
个/皿
1
2
3
采样点
1
0
0
0
0
2
0
0
0
3
0
0
0
4
0
0
0
5
0
0
0
对照皿
1
0
2
0
评价结论：
☑合格□不合格
□合格
□不合格
注:
用于分子生物学RNA提取
C.验证实验三
型号
LabconcoClassⅡ
出厂编号
040520477
使用年限
8
使用频率
3天/周
实验日期
2012．9.19
项目
沉降菌数
个/皿
沉降菌数平均值
个/皿
1
2
3
采样点
1
0
0
0
0
2
0
0
0
3
0
0
0
4
0
0
0
5
0
0
0
对照皿
1
0
2
0
评价结论：
☑合格□不合格
□合格
□不合格
注：
用于媒介生物样品解剖
检测结果显示，不同用途、不同使用频次的Ⅱ级A2型生物安全柜的检测结果间不存在差异，检测结果均符合评价标准要求。
表明所检测方法步骤合理、有效，可应用于生物安全柜工作洁净度的检测。
2、关于应急处置
生物安全柜是实验室的生物安全防护设备，GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》中规定实验室应制定处理生物性紧急情况的应急措施和程序。
世界卫生组织出版的《实验室生物安全手册（第三版）》第三部分实验室设备第10章生物安全柜中也规定了生物安全柜操作过程中时应急处置程序。
本标准遵循了上述标准和法规的要求制定了应急处置要求，指导实验室有效处理生物安全柜操作过程中发生的溅洒和溢洒等突发情况，避免生物危害的扩散，以及对实验室环境的污染和人员健康的危害。
八．协同验证实验情况
针对生物安全柜期间核查中的工作区洁净度检测-沉降菌法开展了协同验证实验，共有东城区疾病预防控制中心、国家食品安全检测中心、二连浩特出入境检验检疫局、海南出入境检验检疫局技术中心、深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心、广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心、山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心、江苏国际旅行卫生保健中心太仓分中心。
8家单位按照本标准中附录B3.1.2的要求参加了此次协同验证实验，8家单位均按照本标准提供的方法完成了验证实验，实验期间未出现检测步骤不明确，实验材料不易取得等无法进行验证实验的现象，验证实验涉及了不同使用年限、不同型号和多种用途的生物安全柜。
验证结果显示：
所有生物安全柜均符合百级洁净度的要求。
说明本标准制定的核查方法能够完成对生物安全柜使用期间对微生物落菌情况的有效监测，能够起到在检定周期中有效核查生物安全柜洁净度的作用，本方法步骤清晰、操作简单、结果准确是在标准中推广使用。
九．拟达到的目标
1、使本标准成为适用于检验检疫系统各专业领域检测和校准实验室的生物安全柜使用和管理的指导性文件，可以有效避免因为检测人员认识和使用上的误区，以及管理不当所造成生物安全危害。
2、通过本标准实施可使检验检疫各实验室按统一要求、统一程序、统一方法、统一标准使用和管理生物安全柜，同时符合国际上对生物安全的管理要求。
3、考虑到检验检疫各专业领域间生物安全柜的使用用途、频次等方面的差异以及部分领域的特殊要求如微生物检测实验室，各实验室可以依据本标准制定适用于本实验室的作业指导书作为本标准的补充，但其中不应包含本标准中未包含的附加通用要求。
二〇一二年九月二十一日
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