雌性生殖细胞减数分裂的分子基础文档格式.doc

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3）卵泡形成及卵母细胞生长起始的分子机制。

2、卵母细胞减数分裂DNA断裂、修复与重组的分子基础

1）DNA断裂、修复与重组的分子基础及在卵母细胞命运、卵泡形成和染色体数目稳定等方面的作用；

2）卵母细胞减数分裂DNA修复途径选择、重组位点定位和重组频率的分子基础和机制；

3）DNA断裂修复信号通路和细胞凋亡信号通路在卵母细胞发育过程中交互对话和转换的分子机制。

3、卵母细胞减数分裂阻滞与恢复调控机制

1）卵母细胞减数分裂阻滞与恢复调控新机制的发掘；

2）卵母细胞减数分裂阻滞与恢复基因调控网络；

3）颗粒细胞与卵母细胞的交叉对话在减数分裂阻滞与恢复中的作用。

4、卵母细胞减数分裂染色体精确分离调节

1）卵母细胞减数分裂过程中染色体正确分离的纺锤体检验点调节；

2）染色体交叉和粘合与染色体正确分离间的关系；

3）卵子老化非整倍性增加与纺锤体检验点及染色体粘合之间的关系。

二、预期目标

（一）本项目的总体目标

本项目以阐明雌性生殖细胞减数分裂的调控机理为目标，通过对控制雌性生殖细胞减数分裂起始、卵母细胞生长起始、DNA断裂和重组修复、减数分裂阻滞和恢复以及两次细胞分裂过程中染色体精确分离关键基因/蛋白的研究，探讨卵母细胞减数分裂正确有序发生的分子基础，为卵子发生异常相关疾病的诊治以及辅助生殖技术的完善提供理论基础。

通过该项目的开展，进一步完善我国在卵子发生尤其是减数分裂调控研究的现代化系统研究平台，培育和造就一批在国际上具有影响力、在国内具有引领作用的优秀中青年研究人才，发展成为该领域国际领先行列的研究团队，并为我国在该领域的持续发展奠定基础。

（二）五年预期目标

1）利用原始生殖细胞、颗粒细胞和卵母细胞特异基因敲除技术，发现3-5个在减数分裂启动、原始卵泡形成和卵泡募集过程中发挥关键作用的基因/蛋白，并阐明其调节机制；

2）阐明决定卵母细胞DNA同源重组修复位点和频率的分子机制及在卵母细胞命运和染色体数目稳定等方面的作用；

3）通过离体和在体研究手段解析卵母细胞减数分裂阻滞和恢复分子机制；

4）阐明控制卵母细胞（包括人卵母细胞）减数分裂染色体分离机制及影响因素，为提高卵子质量，防止或降低非整倍性卵子产生提供理论基础；

5）争取在国际一流杂志上发表6-8篇论文，在生命科学领域有重要影响的刊物或生殖生物学领域一流刊物发表论文50-80篇，申请专利4-6项；

造就一支高水平的、具有重要国际影响力的卵母细胞减数分裂科研队伍，培养博士研究生约50-60名，博士后研究人员15名左右。

三、研究方案

（一）学术思路

生殖健康是人类健康的重要内容。

雌性生殖细胞减数分裂异常和卵子质量下降是导致不孕不育及出生缺陷等诸多生殖相关疾病最主要的内在因素，因而减数分裂的精确调控是保证卵子正常发生和维持女性生殖健康的关键环节。

因此，本项目针对“减数分裂过程如何受到精确调节进而决定雌性生殖细胞的质量”这一关键科学问题，以减数分裂进程为主线，从卵母细胞减数分裂的起始、阻滞与恢复以及遗传物质稳定性维持机制等方面，研究雌性生殖细胞减数分裂调控的分子基础，以期阐明确保卵子发生过程中减数分裂各核心事件依序精确发生的重大基础科学问题，为减少由于减数分裂异常而引发的不孕不育、自发流产和出生缺陷提供新的靶点，并为辅助生殖技术的完善提供技术保障（图1）。

图1，学术思路示意图

（二）技术途径

本项目以小鼠和果蝇为主要材料，利用遗传学、生物化学、细胞生物学、基因组学和蛋白质组学等多学科交叉研究手段，围绕着卵母细胞减数分裂过程中的几个重要事件：

减数分裂起始、卵泡募集、减数分裂重组修复、减数分裂阻滞与恢复、纺锤体检验点和染色体精确分离等，在已有的前期工作基础上，发挥各自的技术特点和优势，各课题间既有侧重点又有交叉，从离体和在体两个层面系统深入地研究雌性生殖细胞减数分裂调控的分子机制以及生物世代间在遗传、进化和多样性方面的分子基础，为人类生殖和发育相关疾病诊治提供分子靶标及理论支持。

主要研究路线见图2。

图2，项目总体技术路线图

（三）创新点与特色

1、科学问题的前沿性：

本项目以我国人类生殖健康的重大需求为导向，瞄准国际科学前沿，凝练研究目标，集中开展卵母细胞减数分裂关键调控分子研究，发掘鉴定一系列在卵母细胞减数分裂起始、卵泡募集、重组修复、阻滞恢复和染色体精确分离相关的基因/蛋白，这不仅对于我们加深对减数分裂调控这一基本生物学现象的认识具有重要意义，还可能为改善人类的生殖健康开辟新的途径。

2、研究方法的先进性：

本课题组既有成熟的分子及细胞水平研究平台，也有独特的卵母细胞研究平台，是国际上少数几个具有卵母细胞/卵巢过表达技术、RNAi技术、突变mRNA、Morpholino和抗体注射技术以及各种表型分析技术的实验室之一。

此外，研究团队拥有完善的蛋白组和转录组分子技术，还建立了高度特异性的卵母细胞和颗粒细胞基因敲除小鼠模型，使我们不仅在细胞及分子水平对卵母细胞减数分裂调控进行研究，而且还可以利用动物模型明确它们在生理状态下的功能，从而可以为人类生殖和发育相关疾病诊断治疗提供分子靶标以及理论支持。

3、研究体系的独特性：

本项目具备独特的小鼠卵母细胞体外发生体系、卵巢体外培养及RNA干扰体系和卵泡体外重组体系，可采用卵母细胞特异性基因剔除技术（ZP3-Cre、GDF9-Cre），结合活细胞观察等技术研究卵母细胞减数分裂的调控机制。

本项目组还具备原始生殖细胞特异性基因剔除小鼠模型（TNAP-Cre、Vasa-Cre）和高度特异性的卵泡颗粒细胞基因敲除小鼠模型（Cyp19-Cre、Amhr2-Cre）。

目前已经有转基因小鼠、基因剔除小鼠、Flox小鼠以及果蝇在体基因敲除等30多种模型。

利用这些实验动物模型，将对阐述常规实验无法进行研究的新机制具有重要作用。

此外，还将探讨人卵母细胞减数分裂中染色体分离是否受到检验点调节，因而可以直接分析人卵母细胞随年龄增加染色体分离异常升高的原因。

（四）可行性分析

1、研究队伍方面

本项目所汇集的研究队伍包含了国内从事卵母细胞减数分裂研究的最具活力的科学家，包括长期从事哺乳动物卵母细胞减数分裂研究的国家杰出青年基金获得者（孙青原），2009年从美国NIH全职回国工作的中科院“百人计划”入选者（李卫、李磊），2010年从美国贝勒医学院和Anderson癌症中心全职回国工作的浙江大学特聘教授（范衡宇、黄俊），2010年刚以第一作者发表Science、Cell论文的年轻教授（张美佳、夏来新），长期在国内从事卵母细胞分化和成熟研究的教授（谭景和、沈伟），以及减数分裂研究领域和人类辅助生殖领域国际知名的兼职科学家（HOWARDCOOKE、杨树标）。

该团队成员包括具有丰富积累、长期从事卵母细胞和减数分裂研究的科学家，更多的是最近几年本领域崭露头角的优秀青年科学家。

2、研究基础方面

主持人孙青原研究员、参加人HOWARDCOOKE与谭景和教授在哺乳动物生殖细胞减数分裂领域已有几十年的研究经历，在国内、外生殖生物学领域具有重要影响。

杨树标教授长期从事人类辅助生殖研究，具备人类卵母细胞研究很好的基础和平台。

范衡宇教授和张美佳教授分别在2009年和2010年以第一作者在Science杂志发表有关卵母细胞减数分裂恢复、卵母细胞成熟和排卵调节机制的论文；

夏来新博士2010年以第一作者在Cell杂志发表有关生殖细胞命运决定的论文。

李磊研究员最近以第一和通讯作者在DevelopmentalCell、Development等领域知名期刊发表有关卵母细胞母源因子调控早期胚胎发育的论文。

沈伟教授是国际上为数不多可以把有丝分裂卵原细胞体外培养为减数分裂卵母细胞的科学家之一。

减数分裂过程中发生非姐妹染色单体之间的交换，卵母细胞在长达几十年（人类）的减数分裂停滞中DNA损伤修复的机会很多，黄俊教授近年来在DNA重组、损伤和修复领域发表了一系列第一作者论文，回国后已经以通讯作者在Science杂志发表论文，他在DNA重组、损伤和修复领域的专长，与卵母细胞减数分裂研究可形成交叉优势。

李卫研究员在蛋白泛素化及降解方面以第一作者在Nature、PNAS、PlosGenetics等杂志发表论文，而卵母细胞减数分裂各关键环节的调节都与蛋白泛素化及蛋白降解有关，可以发挥交叉优势。

3、研究平台方面

项目组包括计划生育生殖生物学国家重点实验室、合肥微尺度物质科学国家实验室、农业生物技术国家重点实验室、浙江大学生命科学研究院、青岛农业大学生殖细胞生物学重点实验室、山东省动物生殖与育种重点实验室等。

实验室装备先进，具备课题实施需要的所有大型仪器，建立了保证实验开展所需要的下述技术平台。

1）活细胞工作站，可用于长时间地追踪观察细胞分裂、增殖和染色体分离过程以及卵母细胞与颗粒细胞间的相互作用；

2）小鼠卵原细胞向卵母细胞转化的体外体系及卵泡体外重组体系；

3）体外培养卵巢的RNA干扰体系；

4）减数分裂进程、DNA断裂修复、联会复合体形成和同源重组的检测平台；

5）离体卵母细胞减数分裂研究平台，可以通过过表达、RNAi、Morpholino和抗体注射等技术研究特定基因或蛋白在卵母细胞减数分裂过程中的作用；

6）基于Cre/loxp系统的小鼠特异条件性基因敲除平台，可用于小鼠原始生殖细胞、卵母细胞和颗粒细胞中相关基因的特异性敲除。

总之，该团队是结构合理的、以青年科学家为主体的、充满活力的优秀科研团队，掌握并拥有实验涉及的所有先进技术和技术平台，能确保研究方案的顺利实施，并有能力做出国际前沿水平的工作。

（五）、课题设置

围绕我们要解决的关键科学问题和达到的研究目标，本项目设置了4个课题：

1.卵原细胞减数分裂启动及卵母细胞生长起始调节机制；

2.卵母细胞减数分裂DNA断裂、修复与重组的分子基础；

3.卵母细胞减数分裂阻滞与恢复的控制机制；

4.卵母细胞减数分裂染色体精确分离的调节机制。

卵母细胞的减数分裂在时空上是受到精确控制的，上述环节对卵子发生来说缺一不可，因而这四个课题之间相互交叉，互相渗透，密切合作，形成一个统一的整体。

挖掘控制以上过程的关键基因并明确其生物学功能，阐述这些基因/分子之间的作用网络及共性和特性，能够帮助我们更深地了解和认识卵母细胞减数分裂调控的分子机理。

其中许多分子在调控减数分裂过程中并不局限在某一个环节，而是在多个环节中发挥作用，例如减数分裂前的DNA复制就与减数分裂过程中程序性的DNA双链断裂密切相关；

重组修复又与染色体的配对和其后的精确分离相关联；

减数分裂恢复是染色体分离的前提。

因而在项目实施的过程中课题之间需要相互渗透、合作和交叉，有机结合在一起，才能获得突破性进展（图3）。

图3，各课题间关系示意图

课题一卵原细胞减数分裂启动及卵母细胞生长起始调节机制

研究目标：

完成3-4个与卵原细胞减数分裂起始相关关键基因/蛋白质的功能研究；

探讨卵原细胞从有丝分裂进入减数分裂、前颗粒细胞包裹卵原细胞形成原始卵泡及卵母细胞生长起始的分子机制。

研究内容：

卵原细胞减数分裂启动和卵母细胞生长起始是卵子发生的开始阶段，对于卵母细胞减数分裂后续过程的正常实现至关重要。

因此，充分解析卵原细胞从有丝分裂进入减数分裂、卵母细胞生长起始这两个生物学过程，理解相关基因产物的功能及相互作用机理，以期建立有关卵母细胞早期发育的调控网络，可为相关生殖疾病研究提供可靠的理论指导。

本项目拟利用小鼠胚胎卵巢体外培养模型、原始卵泡体外重构模型、卵原细胞体外发育模型和果蝇卵母细胞发育在体模型，结合组学技术、蛋白免疫电泳、免疫组化、酵母双杂交、转基因和条件基因敲除等研究手段，重点研究哪些基因或因子参与了卵原细胞从有丝分裂到减数分裂的转变、原始卵泡形成和卵母细胞生长起始，具体包括：

1）卵原细胞减数分裂启动的关键调控元件及调节途径。

研究和建立雌性生殖细胞从有丝分裂向减数分裂转变的关键调控单元及其信号调控网络，筛选控制雌性生殖细胞减数分裂启动的关键因子，阐明Dazl、stra8、Fmrp等关键基因对雌性生殖细胞减数分裂启动的影响。

2）表观修饰在减数分裂启动过程中的作用。

雌性生殖细胞减数分裂启动过程也是生殖细胞基因组表观修饰重建的重要时期。

我们将系统比较雌性生殖细胞减数分裂启动前后表观修饰模式的改变，阐明关键表观修饰包括DNA甲基化、组蛋白修饰、蛋白泛素化以及SUMO化修饰等对雌性生殖细胞减数分裂启动的影响。

3）卵泡形成及生长募集分子的机制。

卵泡形成需要卵母细胞和卵泡颗粒细胞共同作用来完成。

本课题拟研究卵泡形成过程中卵母细胞与前颗粒细胞的相互识别机制，以及生殖细胞合胞体解聚过程中的凋亡与自噬机制；

筛选关键转录因子FIGLA下游调控的参与卵泡形成的关键基因，研究关键基因在卵泡形成中的功能和作用机制；

利用转基因和条件基因敲除等手段，发现控制卵泡生长募集的关键分子。

经费比例：

32.8%

承担单位：

中国农业大学、中国科学院动物研究所、青岛农业大学

课题负责人：

张美佳

技术骨干：

李磊、夏新来、沈伟

课题二卵母细胞减数分裂DNA断裂、修复与重组的分子基础

利用基因敲除/转基因小鼠模型研究卵母细胞减数分裂DNA断裂、修复和重组的分子基础；

了解修复尤其是重组修复异常对卵母细胞命运、卵泡形成和同源染色体分离的影响及机制。

阐明卵母细胞减数分裂过程中遗传物质稳定传递的分子基础。

围绕着这个科学问题，拟在已建立的动物模型的基础上深入研究影响断裂、修复与重组的基因/蛋白质的功能，从而阐明卵母细胞减数分裂遗传物质稳定传递的分子机理。

围绕以下4个内容进行研究：

1）利用TAP纯化（Tandemaffinitypurification，串联亲和纯化）和质谱分析技术，建立控制卵母细胞减数分裂过程中DNA断裂、修复和重组的关键分子库。

2）制备卵母细胞减数分裂相关的基因敲除/转基因小鼠模型，揭示染色体复制、重组和分离对卵母细胞DNA稳定性的影响及其机制，从而探讨DNA断裂、修复与重组在卵母细胞命运、卵泡形成和保证物种染色体数目稳定方面的作用。

3）利用不能自发产生DNA双链断裂的Spo11基因敲除小鼠模型和多种DNADSB修复缺陷小鼠模型（如DMC、Hop2等），从DNA断裂的发生（自发或诱发以及发生的位点等）、修复蛋白的加载等过程着手，探讨决定卵母细胞减数分裂DNA修复途径选择、重组位点定位和重组频率的分子基础与机制。

4）研究DNA断裂修复信号通路和细胞凋亡信号通路在卵母细胞发育过程中的交叉对话（cross-talk）及转换的分子机制。

21.4%

浙江大学、中国科学技术大学

黄俊

HOWARDCOOKE

课题三卵母细胞减数分裂阻滞与恢复的控制机制

从LH诱导卵泡颗粒细胞中重要信号通路的激活和这些信号通路对卵母细胞减数分裂成熟的特殊时空控制入手，了解促性腺激素和卵巢局部信号分子控制卵母细胞阻滞与恢复的分子机制，并探讨是否可以通过调控重要信号通路及其相关转录因子，提高卵母细胞质量，为人类辅助生殖技术的改进和生殖疾病治疗提供理论指导。

卵母细胞减数分裂阻滞与恢复是雌性生殖细胞减数分裂过程中的一个独特的事件。

减数分裂阻滞失败会导致卵巢早衰，而恢复失败则会直接导致无法排卵进而不育。

本课题将围绕卵母细胞减数分裂的阻滞与恢复，采用小鼠卵母细胞成熟的离体与在体模型，探讨其精确调控的分子机制，以进一步加深我们对雌性生殖力维持的认识。

具体包括如下几方面：

1）卵母细胞减数分裂阻滞与恢复调控新机制的发掘：

拟进一步利用卵母细胞特异性基因剔除技术，结合目的基因关键位点突变和过表达功能恢复实验，发掘控制减数分裂阻滞与恢复的新的调节因子，以期获得对调控该事件进程信号通路的完整认识。

2）卵母细胞减数分裂阻滞与恢复基因调控网络：

一方面拟利用多种具有排卵和卵母细胞减数分裂缺陷的条件基因敲除小鼠模型，分析关键基因（如ERK1/2等）缺失以后，在生理环境下对卵母细胞成熟分裂的影响，进而研究排卵前LH峰通过怎样的信号转导过程，使卵母细胞得以恢复减数分裂并发育成熟。

另一方面，我们还将通过基因芯片分析，在卵泡颗粒细胞中发现新的LH靶基因，特别是那些对调节卵母细胞成熟和排卵具有重要影响的转录因子。

3）颗粒细胞与卵母细胞的交叉对话在减数分裂阻滞与恢复中的作用：

拟利用颗粒细胞条件基因敲除小鼠模型，研究颗粒细胞相关因子在生理条件下对卵母细胞减数分裂成熟的调节作用，阐明卵泡早期生长发育过程中卵母细胞和颗粒细胞之间的分子对话机制。

17.4%

浙江大学、山东农业大学

范衡宇

谭景和

课题四卵母细胞减数分裂染色体精确分离的调节机制

了解卵母细胞减数分裂中同源染色体和姐妹染色单体精确分离的控制机制，阐明影响减数分裂染色体分离的分子以及卵子老化非整倍性增加与纺锤体检验点功能之间的关系，为卵子质量提高和辅助生殖技术改进奠定基础。

人类辅助生殖能否成功的关键决定因素是卵子质量，而非整倍性是导致卵子质量下降的关键因素。

非整倍性主要来源于卵母细胞两次减数分裂过程中染色体分离异常。

了解卵母细胞减数分裂染色体分离控制机制，对于改善卵子质量，改进和完善辅助生殖技术具有重要意义。

本课题将以动物和人卵母细胞为模型，结合小鼠卵母细胞条件基因敲除体系，探讨卵母细胞减数分裂过程中纺锤体检验点功能和染色体分离调节机制。

具体包括以下四方面的内容：

1）卵母细胞减数分裂中期/后期转化纺锤体检验点控制：

拟利用卵母细胞特异性基因剔除技术，结合目的基因关键位点突变和过表达功能恢复实验，研究纺锤体检验点通路在卵母细胞减数分裂中发挥的功能。

揭示检验点通路不同分子之间的相互作用及它们向着丝点募集和离开着丝点的控制机制。

2）卵母细胞减数分裂过程中染色体正确分离的时空调节：

减数分裂染色体分离调节比有丝分裂复杂得多。

维持姐妹染色单体连接的粘连素环在正确的时间和空间被降解是其中关键。

我们将主要研究Shugoshin及PP2A的定位和活性调节，进而正确地实施对着丝点粘连素的保护，保证减数分裂过程中同源染色体和姐妹染色单体的正确分离。

3）卵子老化非整倍性增加的原因探讨：

研究老化卵子及衰老个体卵母细胞中检验点蛋白表达、迁移、定位等与卵子非整倍性之间的关系以及染色体重交叉和粘合变化等与非整倍性卵子之间的关系。

4）人卵母细胞染色体分离的调节机制：

通过与生殖医学临床合作，合法途径获得少量人类卵母细胞，利用活细胞观察技术、带标签的mRNA显微注射技术、Morpholino注射技术等，研究人类卵母细胞染色体分离是否受到纺锤体检验点调节，并研究妇女年龄增加后卵母细胞的SAC蛋白功能是否下降，为减少非整倍性卵子产生提供思路。

28.4%

中国科学院动物研究所

孙青原

李卫、杨树标

四、年度计划

研究内容

预期目标

第

一

年

1．建立和完善小鼠胚胎卵巢体外培养模型、原始卵泡体外重构模型、卵原细胞体外发育模型和果蝇卵母细胞发育在体模型；

利用MicroRNA技术和双向电泳分离技术，分别找出在雌性生殖细胞从有丝分裂向减数分裂转变过程中特异表达的基因和蛋白质；

在小鼠胚胎卵巢体外培养的基础上，通过RNAi技术确定与减数分裂起始密切相关的基因和蛋白质的功能；

以小鼠和果蝇为模式生物，进一步确定雌性生殖细胞减数分裂起动中的关键基因/蛋白质。

2、利用TAP蛋白纯化系统（TandemAffinityPurification，串联亲和纯化）纯化并进行质谱测序得到在卵母细胞减数分裂过程中特异表达的参与DNA重组、损伤与修复的关键分子；

验证这些分子是否参与卵母细胞减数分裂过程中的DNA断裂、修复与重组；

利用细胞培养分析这些分子在卵母细胞减数分裂过程中的作用，并初步阐明这些分子参与卵母细胞减数分裂过程中的DNA断裂、修复与重组的具体分子机理。

3、利用条件基因敲除小鼠模型，分析关键基因（如ERK1/2等）缺失以后，在生理环境下对卵母细胞成熟分裂的影响。

另一方面，通过基因芯片分析，在卵泡颗粒细胞中发现新的LH靶基因，特别是那些对调节卵母细胞成熟具有重要影响的转录因子。

4、利用卵母细胞特异性基因剔除技术，研究卵子减数分裂纺锤体组装、染色体与微管相互作用、纺锤体迁移及染色体分离调节。

1、建立雌性生殖细胞减数分裂启动的mRNA和蛋白质组普，为进一步研究奠定基础；

建立离体小鼠胚胎卵巢蛋白质功能研究模式系统，确定与减数分裂起始密切相关的基因和蛋白质的功能，初步了解卵原细胞减数分裂启动的关键调控元件及调节途径；

2、、在分子水平上阐明参与卵母细胞减数分裂DNA断裂、修复与重组的一些关键分子的作用机理。

3、了解排卵前LH峰如何通过ERK1/2信号转导过程，使卵母细胞得以恢复减数分裂并发育成熟。

4、了解在缺乏典型中心体的条件下，卵母细胞如何组装纺锤体，并完成不对称减数分裂，使染色体精确分离。

5、在国际重要期刊发表论文5-10篇。

二

1、利用小鼠胚胎卵巢体外培养模型、原始卵泡体外重构模型以及结合果蝇整体发育模型，研究Dazl、stra8、Fmrp等关键基因与已筛选的控制雌性生殖细胞减数分裂启动的关键因子之间的相互关系，建立雌性生殖细胞从有丝分裂向减数分裂转变的复杂调控网络；

研究stra8等关键基因是如何调节减数分裂进程的；

比较雌性生殖细胞减数分裂启动前后表观修饰模式特征，阐明表观修饰包括DNA甲基化、组蛋白修饰、蛋白泛素化以及SUMO化修饰等对雌性生殖细胞减数分裂启动的影响。

2、找出并建立控制卵母细胞减数分裂过程中DNA断裂、修复和重组的关键分子并建立关键分子库；

构建、引进和繁殖卵母细胞减数分裂过程中特异参与DNA重组、损伤与修复相关基因敲除小鼠模型；

对已有的基因敲除小鼠模型进行表型分析，探讨这些已有的基因在卵母细胞减数分裂中的DNA断裂、修复与重组中的功能。

3、利用Erk1-/-;

Erk2fl/fl;

Gdf9-Cre小鼠，研究ERK1/2的缺失对卵母细胞减数分裂进程的影响；

研究束缚应激对卵母细胞减数分裂恢复前后MPF和MAPK水平的影响及对减数分裂恢复的影响；

研究DNA甲基化、组蛋白磷酸化、组蛋白乙酰化与GV染色质构型转变和染色体凝集关系及捕食者心理应激对卵母细胞染色体倍性影响；

4、研究SET、BUB1等蛋白如何与Shuogoshin及PP2A相互作用，进而正确地实施对着丝点Cohesin的保护，保证减数分裂过程中同源染色体和姐妹染色单体的正确分离。

1、证明关键基因/蛋白质与stra8在减数分裂进程中作用关系，阐明雌性生殖细胞从有丝分裂向减数分裂转变的分子机理；

建立蛋白质表观修饰鉴定技术系统，确定雌性生殖细胞减数分裂启动前后的特异表观修饰模式，阐明