细胞及细胞工程实验.docx
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细胞及细胞工程实验
实验一细胞的凝集反应
1、实验目的
了解细胞膜的表面结构；
2、实验原理
凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。
3、实验用品
1．器材:
显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架
2．材料:
土豆块茎、2％鸡血红细胞
3．试剂:
抗凝血剂（3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH7.40.2mol/LNa2HPO449ml+0.2mol/LNaH2PO451ml,PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。
4、实验步骤
1２％鸡血红细胞悬液制备
取已加抗凝剂的新鲜鸡血1mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000r/min离心５min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。
2土豆凝集素制备
土豆２克切成薄片后加10mlPBS，浸泡0.5-2h（写具体时间，80min）
3细胞凝集反应
制备不同浓度梯度的红细胞液：
取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：
在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；
梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：
取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1×；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5×；再取一只试管，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0×；
土豆凝集素１滴、２％鸡血红细胞液１滴
载玻片上混匀，静置２０min（写实际时间，5min）
思考题：
1、生理盐水可以用蒸馏水代替吗？
为什么？
不能用蒸馏水代替。
生理盐水的渗透压与血浆的渗透压相当，用生理盐水是为了维持渗透压，保持细胞正常形态,防止发生细胞破裂。
2、如果你在显微观察时，看到很多碎片状小块发生凝集，而不是圆形的细胞，请分析可能导致这种现象的原因
可能是盖玻片压片时细胞破碎
实验二MS培养基的配制
一、实验目的
了解MS培养基的组成、掌握MS培养基的配制方法
二、实验原理
植物生长发育需要多种营养成分，在配制之前，将各种成分按要求的比例，先配制成一定浓度的母液，方便保存和操作
3、实验用品
各种试剂
天平、高压灭菌锅、电炉、烧杯、pH试纸、容量瓶、量筒、移液管
4、实验步骤
1、配制几种母液
（1）配制MS大量元素母液
一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
分别称取
名称
重量
名称
重量
NH4NO3
165g
KH2PO4
17g
KNO3
190g
CaCl2·2H2O
44g
MgSO4·7H2O
37g
各自配成1L的母液。
各自倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS微量元素母液
一般将微量元素配制成100倍母液。
依次称取（注：
溶好一个后，再加下一个）
名称
重量
名称
重量
KI
0.083g
Na2MoO4·2H2O
0.025g
H3BO3
0.62g
CuSO4·5H2O
0.0025g
MnSO4·H2O
1.69g
CoCl2·6H2O
0.0025g
ZnSO4·7H2O
0.86g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
注：
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
分别称取CuSO4·5H2O0.05g，CoCl2·6H2O0.05g，各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。
（3）配制MS有机母液
一般配制成100倍MS有机母液。
依次称取（注：
溶好一个后，再加下一个）
名称
重量
名称
重量
肌醇
10g
盐酸硫胺素（VB1）
0.01g
烟酸
0.05g
甘氨酸
0.2g
盐酸吡哆醇（VB6）
0.05g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）激素母液的配制
各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。
一般取100mg配成100ml母液。
2、配制培养基
以配置1LMS培养基为例，按顺序进行如下操作：
1）.先在烧杯中放入一些蒸馏水。
2）.分别取上面八种母液10ml倒入。
3）.一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。
4）.加蒸馏水用量筒定溶至1L。
5）.按设计好的方案添加各种激素，由于激素的用量很小，而且激素对组培植物的生长至关重要。
所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取，减少误差。
用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8。
（有条件的话使用酸度计，比较精确）可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值。
①当量HCL配制：
用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。
②当量NaOH配制：
称取NaOH4g配成100ml溶液。
6）.称取5g左右琼脂粉（质量好的琼脂粉）,倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂粉熔化。
7）.稍微冷却后，分装入培养容器中。
无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口，用橡皮筋或绳子扎紧。
8）.放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右。
灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。
实验三植物组织培养（外植体的处理与愈伤组织的诱导）（开放）
一、实验目的
了解植物组织培养的基本原理，掌握培养基配制和消毒、植物材料的处理、接种等基本技术。
二、实验原理
植物细胞的全能性
三、实验用品
器材：
超净工作台、培养架、镊子、解剖刀、酒精灯、脱脂棉、烧杯、广口瓶、培养皿。
试剂：
20%次氯酸钠、70%酒精、无菌水、培养基母液。
材料：
菊花的茎段与叶片
四、实验步骤
1、培养基配置：
诱导愈伤组织的培养基为：
2,4-D0.5mg/l+NAA0.5-1mg/l+6-BA2mg/l+水解乳蛋白500mg/l3%蔗糖+0.8%琼脂（金盏菊）,pH5.8。
2、叶片的消毒：
取幼嫩叶片用自来水充分洗净后，经75%酒精消毒30s,20%次氯酸钠溶液浸泡8min，无菌水冲洗5-6次后，去掉主叶脉和大的侧叶脉，将叶片切成1.0-1.5cm2的小方块。
3、接种：
用75%酒精擦洗接种台表面，解除三角瓶上捆扎的线绳，有必要的话可以用沾有75%的酒精的棉球把三角瓶表面擦一下，把三角瓶按培养基处理整齐排列在接种台左侧，然后轻轻打开封口膜，将三角瓶口在火焰上方灼热灭菌，同时把长镊子也放在火焰上方灼烧，将烧过的镊子触动培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种的外植体，然后将培养皿打开一小缝，用镊子取出处理好的叶片，背面朝下放到培养基表面。
在酒精灯火焰上转动三角瓶一圈使瓶口灼热灭菌。
然后用封口膜封口，待所有人完成实验后，将其放入培养箱内进行培养，在培养箱内，分班做好标记（标记内容包括：
班级名称、接种日期、接种数量、培养基类型等）。
4、注意事项：
消毒以后的所有操作过程，都应在超净工作台上进行，操作所用的镊子、解剖刀和剪刀使用前插入95%乙醇溶液中，使用时在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后再切割。
注意：
（1）从室外取得材料，要用自来水冲洗数分钟，对表面不光滑或长有绒毛等结构不容易洗净的材料，冲洗时间要长，必要时要用毛刷刷洗。
（2）外植体要选用两种消毒剂交替浸泡，初次实验灭菌时间要设置一定的时间梯度来确定最佳的灭菌时间。
常用的消毒剂的见表1。
（3）工作台接种时，应尽量避免做明显扰乱气流的动作（比如说、笑、打喷嚏），以免影响气流，造成污染。
且操作过程中要不时用75%的酒精擦拭双手。
（4）接种前培养基出现大量污染现象要区分原因。
（5）接种后培养基出现大面积污染、菌落分布不匀，主要是接种过程中发生的污染所致。
可能是接种室不洁净、菌类孢子过多、镊子带菌、操作人员手未彻底消毒、操作人员呼吸及超净工作台出现故障等原因引起。
应保持无菌接种室洁净，并定期用甲醛等熏蒸灭菌；在接种前无菌室用紫外灯灭菌时间不低于20-30min；用75%酒精喷雾杀菌降尘，超净台开启15-20min后方可使用；镊子等接种工具严格彻底灭菌，且接种时使用1次灭菌1次；操作过程中经常用75%酒精等消毒剂擦洗手部等措施。
（6）接种后外植体周围发生菌类污染可能因外植体表面灭菌不彻底所致。
解决方法是:
外植体用饱和洗涤剂浸泡10-15min，自来水冲洗0.5-2h后，再选择适宜的灭菌剂消毒，一般用0.1-0.2%升汞灭菌最好。
对于一些凹凸不平或有茸毛的外植体采用灭菌剂中加“吐温一80”等湿润剂的办法，增加其渗透性，以提高杀菌效果。
五、实验结果
接种后污染调查
观察接种后第７天的污染情况，填入下表：
接种日期
培养基种类
接种数
污染率
生长情况
表1植物组织培养中常用的消毒剂
消毒剂名称
使用浓度（%）
去残留难易
灭菌时间（min）
消毒效果
乙醇
70～75
易
0.1～3
好
氯化汞
0.1～0.2
较难
2～15
最好
漂白粉
饱和溶液
易
5～30
很好
次氯酸钙
9～10
易
5～30
很好
次氯酸钠
2
易
5～30
很好
过氧化氢
10～12
最易
5～15
好
六、思考题
1、外植体用消毒剂消毒后，为什么要用无菌水漂洗？
有时候会在消毒溶液中加入1～2滴的表面活性物质，例如吐温80或吐温20，为什么？
消毒水都具有很强的烧蚀性,在杀灭细菌的同时,也会作用于正常的细胞组织,影响正常细胞的成长或再生,所以外植体消毒后一般要用无菌水漂洗，以清除残留的具有杀伤力的消毒剂。
对于一些凹凸不平或有茸毛的外植体采用灭菌剂中加“吐温一80”等湿润剂的办法，增加其渗透性，以提高杀菌效果。
2、在接种过程中，通过哪些措施防止细菌对接种工具\接种材料的污染？
①认真做好外植体的选择和消毒工作，防止外植体带菌
②改善接种室和培养室的环境条件，保证接种与培养环境清洁无菌
③操作人员严格遵守无菌操作规程
④培养基及接种工器具要严格灭菌，确保灭菌质量
⑤在培养基中加入适量的抗生素
⑥利用病毒在植株体内分布不均匀的原理，生产脱毒苗
⑦利用培养基中高盐或高糖的浓度，抑制微生物的生长
⑧减少培养基中的某些有机成分，可抑制微生物的生长繁殖
实验四细胞膜的渗透性
一、实验目的
了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。
2、实验原理
1溶血现象可作为物质是否进入红细胞及测量物质进入红细胞速度的指标。
2红细胞置于等渗溶液中，溶质分子进入细胞，使细胞内渗透活性分子的浓度改变，继而导致水的摄入，使细胞膨胀，细胞膜破裂，发生溶血。
3不同溶质分子进入细胞膜的速度不同，发生溶血所需的时间也不同。
4红细胞的溶血时间与溶质分子的极性、分子大小有关；同时细胞膜对进入细胞分子的选择性也对溶血现象的发生起重要作用。
3、实验用品
材料：
抗凝鸡血
器材：
小烧杯、试管及试管架、移液管
实验试剂
0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化铵，0.17mol/L醋酸氨，0.17mol/L硝酸钠，
0.12mol/L硫酸钠，0.12mol/L草酸铵，0.32mol/L葡萄糖，0.32mol/L甘油，
0.32mol/L乙醇，0.32mol/L丙酮，蒸馏水
4、实验步骤
1血细胞悬液的制备
取1mL抗凝全血于50mL小烧杯中，再加入9mL0.17mol/L氯化钠，配置好稀释的血细胞悬液。
2溶血现象观察-对照
取试管1支，加入５mL蒸馏水，然后再加入０.５mL稀释的鸡血，注意观察溶液的颜色变化，溶液由不透明的红色变为红色透明，红细胞发生破裂，造成所有红细胞溶血，使光线容易通过。
显微镜下观察溶血前后红细胞的形态。
3观察红细胞对各类物质的渗透性:
取试管10支，分别加入上述10种溶液各5mL，再加入0.5mL稀释的鸡血，记下时间，轻轻摇动使混匀，注意是否发生溶血；若发生溶血，记录溶血过程所需的时间。
5、实验结果
水＜乙醇＜丙酮＜甘油＜醋酸氨＜草酸铵＜氯化铵＜氯化钠、硝酸钠、硫酸钠、葡萄糖
①1ml水+0.1ml红细胞悬液：
水使红细胞发生溶血的时间最短，几乎是瞬时的。
在低渗条件下，大量水分子从水通道易化扩散进入红细胞，从而引起了迅速的红细胞溶血现象。
②1ml0.32M乙醇+0.1ml红细胞悬液：
乙醇是脂溶性小分子，可以自由扩散进出细胞。
实验中，红细胞外有相对高浓度的乙醇，大量乙醇分子顺浓度差进入红细胞，使红细胞内渗透压高于红细胞外渗透压，水通道开放，大量水分子进入红细胞，发生溶血。
③1ml0.32M甘油+0.1ml红细胞悬液：
甘油进入红细胞引起溶血的机制与乙醇相同，但其引起溶血的时间稍长，是由于甘油极性相对比乙醇高，脂溶性相对比乙醇低，且分子量比乙醇高，进入红细胞的速度比乙醇慢，红细胞内液达到使水通道开放的渗透压时间长。
④1mL0.12M草酸铵+0.1mL红细胞悬液：
铵盐为弱电解质，溶液中存在电离平衡，有许多分子形式存在的氨。
氨是小分子，可自由扩散进出红细胞。
实验中，红细胞外氨浓度相对高，氨分子顺浓度差进入红细胞，使红细胞内渗透压升高，促使水通道开放，大量水分子进入红细胞发生溶血。
⑤1mL0.17M氯化铵+0.1mL红细胞悬液：
氯化铵引起红细胞溶血的机制与草酸铵引起溶血的机制相同，但其时间比草酸铵长，这是由于二者虽然均为等渗溶液，但铵离子含量不同。
氯化铵中铵离子含量少（几乎少了一半），相应地氨分子含量也少，因此氨分子进入红细胞的速率也慢，引起溶血的时间就长（近似长了一倍）。
⑥1mL0.17M氯化钠+0.1mL红细胞悬液/1mL0.12M硫酸钠+0.1mL红细胞悬液：
钠离子在溶液中完全电离，不存在分子形式。
钠离子是通过细胞膜上的选择性离子通道进入细胞的，由离子通道介导的易化扩散是顺浓度梯度或电化学梯度的。
等渗的钠盐溶液不能引起红细胞膜上的离子通道开放，因而钠离子无法进入红细胞，红细胞内渗透压不会升高，因而水分子不会进入红细胞，不会发生溶血。
⑦1mL葡萄糖+0.1mL红细胞悬液：
红细胞摄取葡萄糖的方式是载体介导的易化扩散。
实验中，葡萄糖顺浓度梯度进入红细胞，但随后很快被红细胞代谢，为红细胞提供能量，不会引起红细胞内渗透压的显著升高。
因此，等渗的葡萄糖溶液不会使红细胞发生溶血。
6、思考题
1.推断下列溶液的溶血反应会如何，并做实验证实。
0.17mol/L氯化钾、0.17mol／L硝酸钾、0.12mol／L氯化镁、0.12mol／L氯化钙、0.10mol／L硫酸钾、0.10mol／L醋酸钾、0.10mol/L柠檬酸钠、0.32mol／L甘露醇、0.32mol/L蔗糖。
溶血：
0.10mol／L醋酸钾
不溶血：
0.17mol/L氯化钾、0.17mol／L硝酸钾、0.12mol／L氯化镁、0.12mol／L氯化钙、0.10mol／L硫酸钾、0.10mol/L柠檬酸钠、0.32mol／L甘露醇、0.32mol/L蔗糖
2.溶液的渗透压主要与哪些因素有关?
对简单盐溶液如何粗略计算出其渗透压?
渗透压与溶液中不能通过半透膜的微粒数目和环境温度有关。
①在温度一定时，稀溶液的渗透压力与溶液的浓度成正比；
②在浓度一定时，稀溶液的渗透压力与热力学温度成正比。
难挥发非电解质稀溶液的渗透压力与溶液浓度和热力学温度的关系为：
π=CRT
c为摩尔浓度，单位：
mol/L，也可以算作C=n/V（物质的量（mol）/体积（L）），
R为理想气体常数，当π的单位为Pa，V的单位为升（L）时，R值为8.314J·K-1·mol-1，
T为热量，单位：
K（开尔文），与摄氏度的换算关系是T（K）=273+T（C）。
实验五叶绿体的分离和荧光观察
1、实验目的
1．通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法；了解差速离心特点与用途；
2．了解荧光显微镜的原理，掌握荧光显微镜的操作，观察白菜叶绿体的形态、分布与数量。
2、实验原理
采用差速离心分离细胞器；
沉降顺序：
核——叶绿体——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体；
叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。
白菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察其形态和分布；
三、实验用品
1．器材：
离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片
2．材料：
新鲜白菜叶
3．试剂：
0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%丫啶橙
四、实验步骤
（一）叶绿体的分离与观察
取新嫩白菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。
加入0.35mol/L氯化钠溶液，共150ml，研磨，制成匀浆；
将匀浆用６层纱布过滤于烧杯中；
取滤液４ml在1000r/min离心２min，取上清；
上清液3000r/min离心５min．去上清，沉淀即为叶绿体；
加0.35mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀；
取叶绿体悬液１滴于载玻片上，加盖片：
普通光镜下观察；加0.01%丫啶橙,荧光显微镜下演示,
（二）白菜叶徒手切片观察
新嫩白菜叶斜切面１片，0.35mol/L氯化钠溶液１滴；加盖片轻压：
光镜下观察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布；加0.01%丫啶橙,荧光显微镜下演示。
五、实验结果
绘图：
菠菜叶肉细胞的形态，显示叶绿体。
六、思考题
简述：
叶绿体的分离原理和方法（见实验原理、步骤）
使用荧光显微镜时应注意：
1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。
2．放置标本片，调焦后即可观察；
3．高压汞灯关闭后不能立即重新打开，至少需经5min后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。
实验六动物细胞原代培养
一、实验目的
1高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内（invivo）的功能活动是十分困难的。
2如果把活细胞拿到体外（invitro）培养进行观察和研究，则要方便得多。
3高等动植物细胞要求的生存条件极其严格，稍有不适就要死亡。
所以细胞培养技术（cellculture）就是选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。
二、实验原理
原代培养（primaryculture）：
从动物机体取出的进行培养的细胞群。
原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长，需要重新更换培养基。
将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养（Passage）。
三、实验用品
器材：
倒置显微镜、镊子、剪刀、烧杯、培养皿、锥瓶、培养瓶、胶塞、移液管、EP管
试剂：
1640培养基、hanks液、胰酶、双抗
材料：
小鼠
1.超净工作台内：
污物缸1个、酒精灯2个、
酒精棉球1瓶、大镊子1把、打火机1个、
5毫升移液器,
1640培养基30毫升（方瓶，2人共用）、
Hanks液20毫升（圆瓶，2人共用）；
2.饭盒1个,枪头4支
抗菌素的使用
抗生素的作用：
在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可能存在的细菌的生长。
抗生素的使用量：
通常是青霉素和链霉素联合使用。
培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。
庆大霉素：
每毫升100单位——方便、广谱、稳定
完全培养基的组成
1640基础培养基95％
血清5％
碳酸氢钠2.0g/L
青、链霉素各100单位／毫升
四、实验步骤
1取小鼠，用颈椎脱臼法处死.然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中，5分钟后（注意时间不能太长，以避免酒精从口或其他通道进入体内，影响组织活力），台面消毒，取出动物消毒。
2戴无菌袖套.点燃酒精灯，手部消毒。
3在无菌操作台内将胎鼠外表再次消毒。
4将腹部剪开，取出肝脏。
5Hanks液→培养皿A，B。
（大镊子夹瓶塞，用吸管吸取）
6小镊挑出肝脏→A清洗,剪去其它组织与器官等。
7将材料转入B再次清洗;
8A换Hanks，材料再于A中漂洗;
9剪取1/5~1/3的组织,转入小烧杯（10ml），剪成0.5~1mm3碎块。
10将碎块倒入三角锥瓶,用1ml胰酶清洗小烧杯,合入锥瓶,迅速摇匀;
11锥瓶加塞,覆口,拿出工作台,于37℃水浴锅中消化5~7分钟（严格）!
中间摇动2~3次;
12于超净工作台中加入4~5ml培养基,终止消化.用吸管充分吹打7~8次;
13将细胞悬液用纱布过滤,进入20ml烧杯（凹面!
）用培养基清洗纱布2次,每次3~4ml;
14分别取2ml,2ml和3ml细胞悬液接种至三只培养瓶中（3ml在塑料瓶）,补加培养液至总体积5ml;
15培养瓶加塞,侧面标记。
37℃培养.
16明天来观察细胞,并进行细胞传代.
注意
清理台面,用品洗净,交回.
细胞培养的结果观察与鉴定
肉眼观察
显微镜观察
污染
细菌
黄、混
大量小粒、杆
霉菌
霉斑
大量菌丝
未污染
未生长
红、清
组织边缘无迁移
生长
黄、清、
生长晕、
连片铺瓶
组织边缘细胞迁移、细胞长梭形、连片
其他说明
1霉菌一般红、清，初期只有菌丝，没有霉斑。
2放线菌、酵母菌污染。
3细胞初期呈三角形，后呈长梭形。
4胞体大而透明，说明生长情况良好，反之，则说明培养条件不佳或细胞已经衰老。
5黄、清——培养基的更换。
实验七液泡系的超活染色与观察
一、实验目的
1．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布；
2．了解细胞和细胞器的超活染色技术
二、实验原理
1线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，具形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态面发生变化。
2詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染性，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色：
而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
3中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
三、实验用品
1．器材：
显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸
2．试剂：
Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红
3．材料：
人口腔上皮细胞、蚕豆幼根根尖
四、实验步骤
（一）线粒体的超活染色与观察
1口腔上皮细胞线粒体的超活染色
（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水溶锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
（2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15min（注意染液不可干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
（3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进行观察。
可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。
（二）蚕豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察
（1）实验前，把蚕豆培养在培养
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