物理因素对卤虫孵化率的影响docWord文档格式.docx
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在温度28-30°
C,光照强度2000〜3000LX,盐度10-20,连续充气、光照条件下
（1）200mg/L维生素C与100mg/L茶多酚组合，孵化率最高可达99.19%,接近100%;
（2）50〜100mg/L鞣酸孵化率最高可达85.76%。
3、应虫卵壳的电镜结构分析：
卤虫休眠卵的外壳分为三个部分，外膜、皮层和泡层，其中原料卵的外膜表外较成品卵粗糙，呈沙滩状，分别对不同处理下的肉虫的休眠卵卵壳进行电镜结构分析，结果表明肉虫卵壳分为三层结构，最外层为壳层，中间层为网状结构，内层为膜
关键词：
卤虫；
休眠卵；
滞育；
孵化率
Abstract
第一章绪论
肉虫（Artemiasalina）又名盐水丰年虫，隶属丁*节肢动物门^PhylumArthropoda）、甲壳纲（C/awCrustacea）>
鱼思足亚纲fimnc/z/opotto）、无甲目（Order）、盐水丰年虫科（FamilyBranchinectidae）、商虫属
（Anemia）mo肉虫是一种耐高盐性的小型广温低等甲壳动物，广泛分布于内陆盐湖和沿海盐田中。
肉虫的营养全面，尤其是初孵无节幼体，具有大量的卵
黄，蛋白质含量在60%以上，并且含有丰富的必需脂肪酸和高不饱和脂肪酸，且生速度快，繁殖周期短，是重耍的水产养殖生物活饵料。
另外，肉虫在科研方面可作为药物载体，并可应用于医疗保健和净化环境中n~141。
随着水产养殖的快速发展和科学研究的逐步深入，对肉虫的需求量也越来越大，卤虫休眠卵因其易于储存、可随时孵化等优点备受关注，对于休眠卵的生物学特征、滞育机理以及各种理化因子对孵化率的影响逐渐成为主耍研究方向，这些研究结果在理论上和实际应用中均有重耍意义。
1.1.1形态特征
卤虫一般呈灰白色，但个会随着盐度的升高逐渐变浓成棕褐或鲜红色fh31。
成虫长约为1.2〜1.5cm,分为头、胸、腹三部分。
头部5节，头部两端具一对复眼和单眼。
五对附肢分别演化为触角和颚。
第一触角不分节，棒状，末端有数根感觉毛，第二触角雌雄体不同，雌性为一突起，雄性则为宽扁呈斧状的执握器。
胸部由11节组成，每节具有一对宽板状胸肢，内缘为游泳和呼吸的器官。
腹部8节，不具有附肢，前1〜2节愈合为生殖节，雌性形成一个卵囊，雄性形成为交接器，最后一节具2个尾叉，呈扁平形，边缘具刚毛n5~171。
1.1.2分布
卤虫为广盐性生物，适应较高的盐度，分布范围较广，在世界各大陆的盐湖、盐田等高盐水域中均有分布，如自然盐湖和人工沿海盐田、盐池等。
我国
卤虫主耍分布于新疆、青海、内蒙古、西藏等地区各大盐湖以及东北部辽宁、河北、山东等地的沿海盐田，在青藏高原的盐湖内也有发现［18191。
不同在现有的自然盐湖及人工盐池中，肉虫卵多集中于下风岸边，有些大型盐湖在卤虫卵产生的高峰期，岸边的卤虫卵堆积可达数毫米厚。
由于近岸带水域饵料更丰富，卤虫的幼体也多分布在这些区域。
肉虫在水体也呈现垂直分布，成虫随着水深的增加而增加，无节幼体则相反，这与光照强度有关，肉虫成体相对幼体对强光有躲避趋势。
卤虫也有一定的季节性分布，在我国北部盐田，3月到五月为孵化期，可见大量无节幼体，6月为怀卵期，7月、8月为产卵期，9月达到高峰，H月下旬至12月为衰亡期，幵始大量死亡f2n1。
而由于我国南部地区温暖多雨，常年可见卤虫，但是数量较少。
1.1.3食性
卤虫为滤食性动物，选择食物的大小，只能滤食小于50um的颗粒，最适宜摄食的颗粒大小为5〜16Mm,但对食物种类没有选择性，主要以浮游的单细胞藻类、细菌、原生动物和有机碎屑为食［15171。
1.1.4生长发育
卤虫的生长发育耍经过孵化蜕壳等复杂的阶段。
卤虫的休眠卵在一定的条件下入水后，胚胎破壳而出，胚胎外包有一层卵膜，未与卵壳脱离，通常称之为“伞状幼体”，悬挂漂浮于水中，若干小时后孵化出无节幼体。
卤虫的初孵无节幼体长度约为480-570um，约20h后幵始进行第一次蜕皮，后每隔20-24h之间蜕皮一次，直至性成熟大约蜕皮12-15次不等，性成熟后没经过一次产仔则蜕皮一次［211。
1.1.5繁殖
卤虫为雌雄异体，生殖类型分为孤雌生殖和两性生殖，繁殖方式有卵生和卵胎生，卤虫在适宜的环境条件下采取卵胎生方式，直接产出自由游动的无节
幼体；
环境条件低下时，采取卵生生殖方式，产生休眠卵，这种休眠卵处于滞育状态，颜色较深，多为灰褐色，外包有复杂的、厚厚的卵壳。
休眠卵的生物学特性和生理生化特点非常独特，它可以在卵囊内发育，大约发育至4000个细胞时停止分裂，并进入滞育期，酶活力下降，代谢活动停止，可承受如缺氧、低温、紫外线、干燥等各种极端恶劣环境，适合长期储存。
但是，这种卵产出后不经一定条件的刺激不能孵化，即使环境条件适合，孵化率也较低，终止滞育的状态必须使其受到某种特定的非生物信号的引导和刺激，冰能使其恢复生理代谢；
还耍在外界环境适宜是，xl*能够继续发育孵出无节幼体。
因此，肉虫的休眠卵在它整个生活史中的地位至关重要，这就是水产养殖中大量使用的肉虫卵。
1.2影响卤虫生长发育的环境因子
1.2.1温度
卤虫对温度的适应范围较广，是一种广温生物，在-3〜42°
C的温度范围均
可存活[221。
卤虫卵的发育温度范围一般为7.01〜33.2°
C，低于7.01°
C的温度会
抑制卵的发育使其不能孵化，而温度高于33.2°
C至40.5'
C时，岗虫卵发育逐渐
缓慢直至停止[231。
我国天津产肉虫卵最适孵化温度为30°
C,孵化率最高可达
77.97%f241；
其他产地卤虫卵如青海尕海盐湖、山东埕口盐场、新疆艾比湖、海
南莺歌海盐场、内蒙古自治区、四藏岗虫的卤虫卵最适孵化温度均在28°
C左右
f25-261,可能由于地理环境的关系，其中，山东埕口盐场和西藏肉虫卵的最适孵
化温度较低，为分别为25.5〜28.5°
C、25〜3（TC,与其他地区相比明显偏低[221
O
温度不仅对卤虫卵的孵化率产生影响，对肉虫的生长、发育也有着显著的作用。
卤虫的适宜生长温度为25〜30°
C,并且在其他条件适宜的情况下肉虫的生长速度随着温度升高而加快。
如中国肉虫品系生长适宜温区为14.8〜38.9°
C,最适点为介于26.5〜28.5°
C[271,青海尕海盐湖卤虫适宜生长和繁殖的温度范围为15〜30°
C,在这个温度下发育速度与温度呈正相关，大于30°
C后趋于平稳；
卤虫怀卵量在20〜35°
C范围内随温度升高而增加f281。
但不同品系的肉虫对温度升降适应能力也不同，将25"
C正常条件培养下的性成熟雌体，转移至-
2°
C冷藏室培养2d后，己经结冰的培养容器内仍可观察到虫体内的卵己孵化出幼体丨29］。
1.2.2盐度
卤虫卵的孵化率、无节幼体发育及存活、成体的繁殖均受到盐度的显著影响。
肉虫是典型的超盐水生物，也是广盐性生物，能适应盐池、盐湖的超高盐度，也能适应普通海水甚至淡水的盐度。
在10%。
〜340%。
的盐度范围内均可存活。
低盐度有利于肉虫卵的孵化及前期生长，盐度低时，卵壳内外渗透压差值比较小，虫卵易从外界吸水分而使卵壳胀破，从而提高孵化率；
而卤虫无节幼体生长速度快，是由于低盐度减小了细胞渗透压调节机制的消耗能量。
但肉虫幼体生长后期不能适应低盐而过早死亡，因此极限体长很小，养殖过程中适当的高盐度虽然早期生长不快，但由于寿命长，极限体长值会大于低盐度肉虫［301。
综合卤虫生长及成活率情况可知，在卤虫养殖过程中适宜的孵化盐度为35%。
，而生长盐度范围为54%。
〜90%。
［311。
也有研宄显示当盐度高于20%。
时，岗虫卵孵化率降低，且随着盐度升高，孵化率逐渐降低％1。
肉虫成熟时间及产卵量也受到盐度的影响。
在高盐水体中岗虫能较快的达到性成熟，低盐水域中卤虫性成熟慢且生殖次数少f311。
曾洪泽等［321研究结果显示，饵料供应充足的情况下，卤虫培养16〜18d即可性成熟。
将性成熟个体从较低盐度环境转移至高盐水体后，发现肉虫很快就能抱卵，且怀卵量耍高于低盐度水体中卤虫。
1.2.3pH
卤虫卵孵化的适宜pH范围为7.5〜8.5，在此范围内，卤虫卵的孵化率没有明显差异，但孵化时间会随pH的增大而缩短［331。
当pH值较高时更能有效地消除卵的滞育状态而缩短孵化时间。
在孵化率基本不变的情况下，卵孵化时间愈短，孵化得到的无节幼体较卤虫卵的营养损失就愈低［171。
1.2.4光照和光周期
卤虫的孵化率与光周期密切相关，且不同产地、品系的卤虫卵对光照的需求不同，如卞伯仲等研宄结果显示，孵化容器水面上的光照维持在2000LX即能达到最好的孵化效果，而巴里坤湖卤虫卵的孵化率却不受光照强度的影响。
黄旭雄等在研究光周期对卤虫摄食、生长、存活率和繁殖的影响时发现，从持续光照开始到持续黑暗，河北大清河盐场卤虫的摄食率随光周期的缩短而下降。
并且较短光周期下卤虫生长速度相对较快、成活率较高。
河北卤虫的胚胎发育在较长的光周期下可以以非滞育的途径繁殖，而短光周期则以滞育途径繁殖[34351。
PatrickLavens等认为卤虫是典型的滤食动物，对事物没有选择性，因此，其摄食与运动密切相关。
光照条件下会促进卤虫的游泳速度[361。
光周期较长时，卤虫一直处于运动状态，消耗摄食的饵料能量，用于生长的能量较少，面持续黑暗会引起卤虫摄食率下降，导致生存时间缩短。
因此，依据食物能量的利用率来看，光照是卤虫生长的必需条件，但缩短光周期对卤虫的培养更加有利。
1.2.5溶解氧
卤虫属于低耗氧生物，对水体中溶解氧浓度要求较低。
一般情况下水中溶氧量大于l.Omg/L,卤虫均能正常生活。
有研究显示，肉虫的生存的最低需氧量为0.3〜O.5mg/L,0.17〜0.29mg/L的溶氧量会导致肉虫处于致死边缘w。
B.M.Gilchrist研究发现，肉虫卵壳中含有大量铁血红素，这种铁血红素由血红蛋白分泌，这种血红蛋白存在肉虫雌体的卵壳腺中，当环境中的溶氧量降低时，则会产生这种物质；
反之，溶氧量达到需求吋则不会产生，且随着溶氧量的增加，卤虫会将体内的血红蛋白排除。
也有研究表明，溶氧含量较低时，摄食衣藻的卤虫较摄食啤酒酵母的卤虫更易产生休眠卵，而衣藻中含有大量的叶绿素，表明叶绿素及低氧均能促进休眠卵的产出。
1.2.6稀土元素
稀土元素是自然盐湖、海洋以及人工盐池中均含有的微量元素。
适宜浓度
的稀土元素对水生生物的起着促进的作用，有利于其生长、发育、繁殖，并且可以提高同化率，能够对环境起到改善作用和预防疾病；
浓度过高则会毒害其生长发育。
有研宄表明，一定浓度范围内的钇元素、铈元素和镧III,对提高肉虫孵化率和成虫率均起到较好的效果。
钇元素浓度为1.5mg/L和1.2mg/L吋，山东海阳卤虫品系卤虫孵化率分别比对照组提高12%和13%r361o当铈元素质量浓度范围在0.1〜2.1mg/L时，埕口卤虫卵的孵化速度和孵化率随铈元素质量浓度的增加而升高［371。
水体中的稀土元素镧III浓度达到1.8mg/L吋，卤虫卵的孵化率以及无节幼体变变态率显著提高［381。
1.2.7金属离子
卤虫广泛分布在世界各地，其孵化率高，易培养，对金属离子具有较高敏感性，因此卤虫是一种反应海洋污染的指示生物，可以在水环境重金属检测中推广应用。
有研宄结果显示，卤虫无节幼体对HgCl2的24h-LC50为0.014mg/L>
48h-LC50为0.01lmg/Lf391o表明肉虫无节幼体对HgCl2有较高的敏感度。
修瑞琴f4（）1研究了硒及其他几种重金属离子对岗虫的毒性影响，其结果显示，卤虫24h-LC50为Cr2+41.5mg/L、Cu2+4.7mg/L、Hg2+26.9mg/L、Se2+56.8mg/L、Zn2+mg/L、Pb2+198mg/L、Ni2+249mg/Lo毒性由大到小依次为铜、汞、硒、锌、铅、镍、钴。
也有研究表明，当金属离子浓度在卤虫的生理承受能力范围内时，适量的金属离子对肉虫卵的孵化和无节幼体生长有积极作用。
如当海水中Ni2+和Co2+质量浓度分别为40ug/L和30ug/L吋，能有效缩短卤虫卵的孵化时间并提高孵化率。
当海水中Ni2+、Co2\Zn2+、Sr2+的质量浓度分别为40ug/L、40〜50ug/L、40〜60ug/L、20〜30ug/L时，能有效促进卤虫幼体的生长发育［4h421。
1.2.8培养密度
在实验室条件下，适宜的投饵密度和卤虫生物量，可提高卤虫幼体生长速度，并且养殖密度可达500个/L以上。
一些室内高密度精养系统中，卤虫的培养密度可达1万〜2万只/I；
431。
Levenst等在小型水体的精养池内进行试验，发现当饵料、温度、盐度、光照、pH值均适宜时，卤虫的培养密度对其生长影响
不显著，投放数量可以达到500个/L左右；
但如果养殖在室外大面积的盐田，那么投放密度应略低一些，最好维持在50个/L左右［441。
廖永岩，许芳琳［451在实验室条件下用面粉和酵母作饵料，进行卤虫培养实验，分别设置1000只/L,5000只/L,10000只/L,25000只/L和50000只/L5个密度梯度。
其研究结果显示：
密度为1万只/L投喂酵母的卤虫成活率为33.3%,体长7.65mm,比相同密度的面粉组卤虫各参数都耍好。
培养密度为1万只/L组肉虫的成活率42.9%、円增重率0.03%、总增重率2068.2%、饵料系数0.69,以上参数均比其他密度组高，为室内高密度培养岗虫较为理想的密度。
1.2.9饵料
饵料是肉虫生长的物质基础，对卤虫的存活、生长发育及繁殖均有显著影响，表现在饵料的种类、颗粒大小和营养成分。
研究表明，适合肉虫高密度培养的饵料有米糠、玉米糠和大豆粉、麸皮等。
另外，豆浆也是一种理想的投喂饲料，用豆浆培养肉虫，可以达到其体长体重均增长较快、成活率高、怀卵量大、养殖周期短的效果［461。
廖永岩等［451认为在培养密度一致的条件下，投喂酵母的实验组优于投喂面粉的实验组，即酵母的营养成分比面粉耍高，若二者混合投喂，效果更佳。
研究显示，蛋白含量高、纤维素含量高的饲料，肉虫存活率、生长情况均较好，而灰分含量过高会造成其成活率的下降［471。
水体中的自然饵料种类以及丰富度同样影响肉虫的生长，如水中的饵料种类丰富、适口性强、营养全面，则卤虫个体发育较快，缩短性成熟时间，从而提高产量。
1.3.1休眠卵的去壳、加工贮存技术
卤虫休眠卵的外包被有一层坚硬的卵壳，通常休眠卵孵化的过程中，卤虫的无节幼体耍与卵壳分离，分离的过程需耍大量的时间导致孵化效率较低。
未孵化的虫卵以及它的卵壳不能被水产动物消化，并且会阻塞鱼苗的肠道导致死亡，同时，残留的卵壳会败坏水质引起病害发生，因此，卵壳分离成为提高孵化率的方法之一，同时易于鱼虾幼体摄食，对生产有重要的意义［481。
目前休眠卵的去壳方法主耍有次氯酸化学去壳法、次氯酸钙氧化法，根据不同品系卵壳的厚度，调节次氯酸的浓度和去壳时间［491。
卤虫休眠卵的加工是提高其质量的手段之一，目前，卤虫休眠卵的加工要经过提纯、暂存腌渍、冷冻加工、孵化率检验、缓解、浸泡脱水、烘干和包装等操作步骤。
在操作过程中，卤虫卵的产地决定每一步的控制参数。
理论上，每个产出的滞育卵在理论上均可被活化，但由于卵的品系、采收、加工等参数的不同以及二次滞育的现象，并不能使100%的滞育卵成为活化卵f501。
目前，国内原料卵的商业交易秩序混乱，休眠卵的品系混杂，导致成品卵孵化性能的低下。
因此，相关企业和研究机构应该将合作目标转向如何提高国产肉虫卵的孵化效率以及孵化质量上。
1.3.2休眠卵的激活方法
卤虫休眠卵保持在滞育的状态，是由于休眠卵具有某种内源性机制，即使在适宜条件下，其孵化率也很低，只有经过某种特定环境的刺激xl*能终止滞育，恢复正常生理代谢。
因此，提高卤虫卵孵化率的研究大多集中于肉虫卵滞育状态的终止上。
因此，打破休眠卵的滞育是提高肉虫孵化率的重要途径。
对于卤虫卵滞育的研究，相对于国外来说我国起步较为迟缓，用于终止休眠卵滞育的手段有重复脱水、二氧化碳处理（c场激活）、低温冷冻、光照、药物刺激（卤水、甲醛、过氧化氢等）r5L521o
对河北乐亭、山东羊口卤虫和青海洱海卵在三个温度下采用co2进行激活研宄表明：
羊口肉虫卵孵化率并无明显提高，而河北乐亭卤虫卵4°
c-100%C02条件下处理90天，孵化率可达93.3%,青海洱海卤虫卵-25°
C—20%CO2条件下处理60天，孵化率可达90.2%［511。
运用卤水筛选法鉴别不同孵化等级的休眠卵，筛选后的休眠卵孵化率较筛选前相比提高20%左右，同步性也有所提高，相比之下，风选法效果不及卤水筛选法『521。
张波等的研究结果表明，采用H2O2浸泡的方法可提高哈萨克斯坦卤虫卵的孵化率，最佳条件为3%H2O2浸泡处理lOmin,并且在孵化过程中添加20〜80mg/L的CaO2效果更为显著［53］。
1.3.3休眠卵滞育机理的研究进展
随着提高卤虫孵化率技术的深入研宄，休眠卵的滞冇机理及孵化机制随之引起关注。
休眠卵的卵壳对肉虫的生存起到了不可或缺的作用，其可以长时间保存，抵抗各种不良环境，如低温、干燥等，这与它的结构密切相关［54~571。
肉虫卵的卵径及卵壳厚度作为初步鉴别卤虫品系的依据己得到很多学者的肯定『58~651。
早在1940年，国外学者Lochhead等人就对卤虫卵壳的基本结构进行了简单的研究和阐述f66~751，自1965年，电镜成为对微观结构进行分析的精密的电子显微仪器，随着电镜技术的持续发展，人们进一步的认识了卤虫卵和卵壳的结构以及外部形态。
研宄表明，一定浓度的C02可以打破卤虫的滞育，原因在于（：
02分子可以进入到卵壳细胞中，而其他物质如甘油、放射性离子等却不能透过卵壳进入细胞内f76~791;
—些学者对卤虫的细胞学进行研宄，指出卤虫的休眠卵是多细胞胚胎，卤虫在进入休眠期吋己经发冇至囊胚期，之后停止细胞分裂^1，也有学者发现，肉虫休眠卵早在休眠状态前就进入原肠胚期f811。
Olson经研宄发现，不同种群的休眠卵进入休眠期时处于不同的发育时期，但是细胞核数大体相同，证明岗虫的休眠过程与生物发冇机制密不可分f821。
卤虫休眠卵的质量受卤虫的产地、品系、产卵环境、后期加工等因素的影响，根据国际研宄结果，肉虫卵质量指标包括含水量、杂质含量和孵化指标，其中杂质包括虫卵中泥沙、盐类、悬浮物、空壳、碎壳等，孵化指标主要有孵化效率、时间、百分率等^主耍的有陈马康和黄晓旭认为，优质卤虫卵的含水率应为5%〜8%之间，超过10%则不利于虫卵的保存f5n1。
孵化率是评价休眠卵的质量的重要指标，优质卤虫卵的孵化率可达90%以上，刘有序指出，孵化率反映出含有胚胎的休眠卵质量的好坏，同时反映加工产品质量高低f881。
但仅凭孵化率判断休眠卵的质量较为片面，因此，评价虫卵质量耍从以上几个指标综合考虑。
1.4本研究的目的及意义
卤虫初孵的无节幼体作为苗种的生物饵料，在许多水产经济动物育苗中，占有极为重耍地位，其蛋白质含量高，营养丰富，较适合仔稚鱼或虾蟹幼体摄取，肉虫的成体也是水产经济动物活饵料，随着我国水产养殖业的飞速发展，近年来在海水鱼虾繁殖工作中肉虫无节幼体的需求量明显增加，出现供不应求的局面。
卤虫休眠卵因具有保存期较长、可随时孵化、成本低等优点引起了普遍关注，因此，提高卤虫休眠卵的孵化率至关重要。
我国是一个肉虫生产大国，卤虫资源非常丰富，具有分布广，产量高等特点。
但国内休眠卵质量及孵化性能低于国外，如孵化率较低、孵化同步性差、杂质含量高等，造成这种情况的原因较多，原料卵的采集、成品卵的加工工艺和方法、终止滞育的方式及时间等都对休眠卵的孵化性能产生影响。
由于不同产地的肉虫休眠卵所经历的环境因素有所差异，因此，相同的方法并不能使其全部打破滞育，且孵化破膜的时间也不一致，以至于国产卤虫卵的孵化率及孵化同步性低下。
因此，提高国产卤虫卵的质量和孵化性能，必须确定所用肉虫
卵适宜孵化的环境条件，进而研宄其打破滞育的方法和机理。
本研究以天津海友佳音公司生产的卤虫卵为例，在确定适宜苏孵化的环境条件基础上，采取单因素以及正交试验找出打破其滞育，提高孵化率的最佳组合，并且通过扫描电镜观察，分析卤虫卵壳的结构变化，研究休眠卵的滞育机理。
旨在提高卤虫过的孵化效率，优化我国卤虫卵的孵化性能，供生产上参考应用。
第二章物理因素对卤虫孵化率的影响
卤虫是水产养殖中广泛使用的饵料生物，伴随水产养殖业的飞速发展，对其休眠卵的需求量日益加大，肉虫卵的基础生物学研究和孵化率的提高也备受关注。
关于卤虫卵的生物学特性己有学者做过大量研究，并且研究证明休眠卵的含水率是影响贮存效果的关键因子之一，含水率低于10%的休眠卵在贮存中会得到较高的存活率。
另外，肉虫生长发育以及孵化受到盐度，温度，光照强度等因素的影响。
研宄表明，孵化的地理位置不同和卤虫卵的产地批次不同，所得出的最适参数并不相同f351。
因此对适宜肉虫生殖培养的盐度，温度，光照强度等条件的研究对卤虫的人工养殖和孵化具有重大意义。
本实验用休眠卵是
从俄罗斯进口，由天津海友佳音生物科技股份有限公司提供，原产于俄罗斯，隶属于哪个品系尚不明确，有必耍对适宜其孵化的
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