体外培育牛黄中胆酸去氧胆酸含量检验方法验证方案DOC.docx
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体外培育牛黄中胆酸去氧胆酸含量检验方法验证方案DOC
文件目录
一、概述2
二、目的3
三、范围3
四、职责3
五、验证内容3
六、验证实施8
七、验证进度安排7
八、偏差处理及报告汇总7
九、验证结果评定与结论7
十、附件7
你的签名表明你已清楚了解本文件及附件内容，充分理解并认可本文件的所有条款。
部门
签名
日期
起草人
中心化验室
审核人
中心化验室
审核人
技质部
QA审阅
技质部
批准人
生产管理负责人
批准人
质量管理负责人
本文件根据需要应分发于以下部门：
技质部 □生产部 □办公室 □调度室 □制剂车间
□原料药车间 □机修车间 □中心化验室 □仓储
档案室
一、概述
2015版中国药典收录的体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检测使用的是薄层色谱法，此方法因其精密度不能满足要求且方法落后，无法满足检测要求，故变更为高效液相色谱法进行检测。
二、目的
建立体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量的高效液相色谱法检测的方法验证
三、范围
中心化验室
四、职责
1、验证委员会
1.1负责验证管理的日常工作及公司内验证工作总的调度、协调及总结工作；
1.2负责验证任务的下达及验证小组的确定；
1.3负责验证计划和验证方案审核和批准工作；
1.4负责验证报告的评价工作；
1.5负责验证周期的确定工作；
1.6负责发放验证证书；
2、技术质量管理部职责
2.1负责对验证方案和报告的可行性的审核；
3、验证小组职责
3.1负责验证方案起草，并对批准后的验证方案组织实施；
3.2负责验证全过程管理并收集、整理验证数椐；
3.3负责总结、写出验证报告；
3.4负责验证实施过程中的检测，并出具检测报告；
3.5验证小组人员
小组职务
姓名
所在部门
职务
组长
中心化验室
组员
中心化验室
组员
中心化验室
五、验证内容
1、验证依据、验证标准：
《中华人民共和国药典》2015年版
2、验证判断标准：
准确度:
6份样品的平均回收率限度达到：
95-102%
精密度:
6份对照品峰面积的重复性（RSD）达到1.5%
专属性:
将样品分别置于高温、高湿、酸碱水解、氧化降解、强光照射进行加速破坏，再测定其含量
检测限：
将检测限数据使用含量相近的样品进行验证，附图谱及结果
定量限：
将定量限数据使用含量相近的样品进行验证，附图谱及结果，应符合准确度、精密度要求。
线性：
应有回归方程、相关系数、线性图
范围：
对80%-120%供试品溶液浓度的供试液测得的含量应符合准确度、精密度要求。
耐用性：
12小时内分别测得的样品含量的RSD应达到1.5%
3、人员
查阅人员档案，确认已经对有关操作人员进行了相关培训，见下表1：
（一）人员培训确认记录
人员
培训内容
检查结果
检验人员
《中华人民共和国药典》2015年版、《体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案》
（二）人员档案
姓名
学历
职位
入厂时间
培训
结论
□是□否
□符合要求□不符合要求
□是□否
□符合要求□不符合要求
□是□否
□符合要求□不符合要求
□是□否
□符合要求□不符合要求
□是□否
□符合要求□不符合要求
检查人：
日期：
确认人：
日期：
4、验证用文件
文件编号
文件名称
存放位置
体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案
检查人：
日期：
确认人：
日期：
5、实验室环境
项目
可接受标准
结果
结论
温度
18~26℃
□符合要求□不符合要求
湿度
45~65%
□符合要求□不符合要求
其他
干净、整洁
□符合要求□不符合要求
6、实验试剂及仪器：
试剂
批号：
生产厂家：
级别
结论
胆酸对照品
□符合要求□不符合要求
去氧胆酸对照品
□符合要求□不符合要求
甲醇
□符合要求□不符合要求
甲酸
□符合要求□不符合要求
乙腈
□符合要求□不符合要求
盐酸
□符合要求□不符合要求
氢氧化钠
□符合要求□不符合要求
双氧水
□符合要求□不符合要求
检查人：
日期：
确认人：
日期：
仪器
型号
编号
校验有效期
结论
电子天平
□符合要求□不符合要求
高效液相色谱仪
□符合要求□不符合要求
电热鼓风干燥箱
□符合要求□不符合要求
检查人：
日期：
确认人：
日期：
7、实验样品:
批号：
生产厂家
检查人：
日期：
确认人：
日期：
8、验证内容及结果
8.1对照品溶液的制备
取对胆酸、去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成含胆酸240ug/ml和去氧胆酸80ug/ml的混合溶液，即得。
8.2供试品溶液制备
取样品适量，研细，取约50mg，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称重，超声处理30min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45um滤膜滤过即得。
8.3色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：
WondasilC18（4.6mm*250mm，5um）；柱温：
25℃；以0.2%甲酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0~7min，5%B；7~15min,5%B→80%B；15~20min，80%B→90%B；20~23min90%B→96%B））；流速：
1.0ml/min；用蒸发光散射检测器；氮气流速：
2.3ml/min，漂移管温度110℃。
样品中各色谱峰分离度大于1.5，理论板数按胆酸峰计算应不低于5000。
8.4线性关系考察
精密量取对照品溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml，分别置于10ml容量瓶中，用甲醇定容到刻度，得到胆酸浓度分别为48、96、144、192、240ug/ml；去氧胆酸浓度分别为16、32、48、64、80ug/ml。
精密吸取各级对照品溶液10ul注入液相色谱仪测定峰面积。
以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
回归方程：
相关系数
胆酸
去氧胆酸
结论：
检查人：
日期：
确认人：
日期：
8.5供试品测定法
取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，依法测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中胆酸、去氧胆酸的含量，计算，即得。
8.6、精密度
取同对照品溶液10ul连续进样6次，测定峰面积，计算胆酸和去氧胆酸峰面积的RSD
胆酸：
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
去氧胆酸：
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
结论：
检查人：
日期：
确认人：
日期：
8.7耐用性
取供试品10ul，分别于0、2、4、6、8、10、12h进样，依法测定峰面积，计算得到胆酸和去氧胆酸的平均含量、RSD
供试品称样量：
胆酸：
时间（h）
峰面积
溶液浓度（ug/ml）
稀释倍数
测定结果
0
2
4
6
8
10
12
RSD
去氧胆酸：
时间（h）
峰面积
溶液浓度（ug/ml）
稀释倍数
测定结果
0
2
4
6
8
10
12
RSD
结论：
检查人：
日期：
确认人：
日期：
8.8准确度
取已知胆酸和去氧胆酸含量的样品溶液6份，每份约25mg。
精密称定，置于锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液10ml，再精密加入甲醇40ml，称重，超声处理30min，甲醇补足减失的重量，滤过，分别取10ul注入液相色谱仪，依法测定，计算胆酸和去氧胆酸的平均回收率（n=6）
胆酸峰面积
胆酸浓度（ug/ml）
去氧胆酸峰面积
去氧胆酸浓度（ug/ml）
稀释倍数
胆酸含量
胆酸回收率
去氧胆酸含量
去氧胆酸回收率
1
2
3
4
5
6
胆酸平均回收率：
去氧胆酸平均回收率：
结论：
检查人：
日期：
确认人：
日期：
8.9检测限与定量限
将对照品溶液稀释进样，以信噪比3:
1时的进样量为检测限，测出胆酸和去氧胆酸的检测限；以信噪比10:
1时的进样量为定量限，测处胆酸和去氧胆酸的定量限。
并用含量相近的样品进行验证检测限与定量限，其中定量限要包括准确度（8.7）和精密度（8.5）实验。
检测限图谱：
检测限相似浓度样品图谱：
定量限图谱：
定量限相浓度样品图谱：
定量限相浓度样品准确度：
胆酸峰面积
胆酸浓度（ug/ml）
去氧胆酸峰面积
去氧胆酸浓度（ug/ml）
稀释倍数
胆酸含量
胆酸回收率
去氧胆酸含量
去氧胆酸回收率
1
2
3
4
5
6
胆酸平均回收率：
去氧胆酸平均回收率：
定量限相浓度样品精密度（取样品溶液10ul）：
胆酸：
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
去氧胆酸：
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
结论：
检查人：
日期：
确认人：
日期：
8.10范围
取样品适量，研细，分别取约40mg、60mg，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称重，超声处理30min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45um滤膜滤过，即得80%、120%浓度的供试品，共制得供试品6份。
按照8.5进行测定，应符合准确度、精密度要求。
80%浓度供试品准确度：
胆酸峰面积
胆酸浓度（ug/ml）
去氧胆酸峰面积
去氧胆酸浓度（ug/ml）
稀释倍数
胆酸含量
胆酸回收率
去氧胆酸含量
去氧胆酸回收率
1
2
3
4
5
6
胆酸平均回收率：
去氧胆酸平均回收率：
80%浓度供试品精密度（取供试品10ul）
胆酸：
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
去氧胆酸：
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
20%浓度供试品准确度：
胆酸峰面积
胆酸浓度（ug/ml）
去氧胆酸峰面积
去氧胆酸浓度（ug/ml）
稀释倍数
胆酸含量
胆酸回收率
去氧胆酸含量
去氧胆酸回收率
1
2
3
4
5
6
胆酸平均回收率：
去氧胆酸平均回收率：
20%浓度供试品精密度（取供试品10ul）
胆酸：
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
去氧胆酸：
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
结论：
检查人：
日期：
确认人：
日期：
8.11专属性
8.11.1酸降解试验
称取研细样品50mg于50ml容量瓶中，加0.1mol/l的盐酸2ml溶解，超声4小时后用甲醇定容，再超声处理30min，摇匀，0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.2碱降解试验
称取研细样品50m于50ml容量瓶中，加0.1mol/l的氢氧化钠2ml溶解，超声4小时后用甲醇定容，再超声处理30min，摇匀，0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.3氧化降解试验
称取研细样品50mg于50ml容量瓶中，加5%的双氧水2ml溶解，超声4小时后用甲醇定容，再超声处理30min，摇匀，0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.4高温降价
将样品存放在130℃烘箱中考察8个小时，取约50mg，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇适量50ml，称重，超声处理30min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.5高湿降价
将样品适量存放在相对湿度92.5%，25℃（取干燥器，放入硝酸钾饱和溶液），考察5天，取约50mg，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称重，超声处理30min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.6光降解试验
将样品适量置于4500LX照度下照射15天，取约50mg，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇适量50ml，称重，超声处理30min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
条件
称重（mg）
峰面积
溶液浓度（ug/ml）
稀释倍数
测定结果
酸降解
碱降解
氧化降解
高温降解
高湿降解
光降解
结论：
检查人：
日期：
确认人：
日期：
六、验证实施
1、验证开始前，应组织验证小组成员进行培训，培训内容主要为：
《体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案》。
人员培训情况见附件1：
人员培训记录。
2、验证过程中，如果需要修改或完善验证方案，应报验证委员会审批，审批记录见附件2：
验证方案修改申请及批准书
七、验证进度安排
1、验证进度安排：
2016年月日至2016年月日
八、偏差处理及报告汇总
所有偏差的纠正，必需得到QA的批准。
收集所有的偏差报告，对偏差报告进行汇总，在批准最终验证报告之前，所有偏差应得到QA的批准。
偏差处理情况见附件3：
偏差处理记录
偏差报告汇总见附件4：
偏差报告汇总表
九、验证结果评定与结论
1、验证小组负责收集各项验证、试验结果记录，根据验证、试验结果起草验证报告，验证报告见：
《体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案》。
2、验证委员会对验证报告进行综合评审，做出验证结论。
如果验证通过，则发放验证证书，见附件5：
验证证书。
十、附件
附件1：
人员培训记录
附件2：
验证方案修改申请及批准书
附件3：
偏差处理记录
附件4：
偏差报告汇总表
附件5：
验证证书
附件1：
人员培训记录
培训时间
培训讲师
培训负责人
培训内容
培训人员签名
培训效果评价
□通过
□不通过
不通过处理
评价人
日期
附件2：
验证方案修改申请及批准书
验证方案名称
验证方案编号
修改内容
修改原因及依据
修改后方案
起草人：
验证小组组长：
年月日
验证委员会审批
验证委员会：
年月日
附件3：
偏差处理记录
偏差编号
解决日期
年月日
偏差名称
偏差描述
纠正办法
偏差重要性
评价
记录人
日期
年月日
审核人
日期
年月日
附件4：
偏差报告汇总表
偏差编号
偏差名称
是否关键偏差
（是/否）
解决日期
检查人
（签名/日期）
附件5：
验证证书
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
名称：
＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
上述检验方法已按验证方案进行验证，各项验证结果符合标准要求，批准投入使用。
验证报告名称：
_______________________________
验证报告编号：
_______________________________
验证完成日期：
_______________________________
有 效 期：
_______________________________
验证委员会
年月日
备注：
1.检验设备应当在当前验证条件下使用，使用条件发生变更，应报验证委员会审核，必要时重新验证。
2.检验设备应按批准的标准操作、维护保养程序进行操作、维护和保养。
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