高效液相色谱仪校验方案设计.docx
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高效液相色谱仪校验方案设计
题目
Title
高效液相色谱仪校验方案
方案号
Document#
PQP-QC072-02
设备编号
Equipment#
QC-0072
安装地点
Location
高效液相色谱室
生产厂家
Manufacturer
日本岛津（Shimadzu）公司
方案审批：
ApprovedBy
姓名
Name
职位
Position
签名
Signature
日期
Date
陈凯
QC分析人员
于勇
QC主管
莫远略
质量部长
江苏阿尔法药业有限公司
JiangsuAlphaPharmaceuticalCo.,Ltd.
1.目的
2.确认人员及职责
3.确认前确认
4.确认依据及判定标准
5.确认内容
6.再确认要求
7.确认结果汇总
8.结果评价
1.目的
明确稳定性试验箱的校验项目、校验条件、校验方法、接受标准、校验周期等，便于检验人员按规程进行稳定性试验箱的校验操作。
保证实验室使用的称量点称量的准确性。
2．确认人员及职责
QC分析人员：
负责起草确认方案和报告、组织协调开展确认；
QC主管：
审核确认报告和报告；
质量部长：
批准确认报告和报告。
3.确认前确认
3.1人员确认
姓名
职务
职责
签名
日期
陈凯
QC分析人员
起草确认方案和报告，执行确认、组织培训
赵家宽
QC分析人员
协助执行确认
于勇
QC主管
监督确认的进行
3.2文件培训
序号
培训内容
是否培训
1
《LC-2040C型高效液相色谱仪标准操作规程》（QC-3079）
是□否□
2
《LC-2040C型高效液相色谱仪维护保养标准操作规程》（QC-3080）
是□否□
3
《液相色谱仪的校验操作规程》（QC-4002）
是□否□
4
《高效液相色谱仪校验方案》（PQP-QC072）
）
是□否□
5
《检验室安全管理规程》（QC-1018）
是□否□
3.3校验设备确认
序号
设备及要求
是否符合
1
秒表：
分度值不大于0.1 s
是□否□
2
分析天平：
最大称量200g,最小分度值0.1mg
是□否□
3
容量瓶：
10.0mlA级不少于10支
是□否□
4
温度计：
分度值不大于0.1℃
是□否□
5
以上设备应在校验有效期内
是□否□
3.4 标准物质和试剂确认
序号
标准物质、试剂及要求
是否符合
1
甲醇：
HPLC级
是□否□
2
纯水：
HPLC级
是□否□
3
丙酮：
分析级
是□否□
4
萘：
是□否□
检测人：
日期：
年月日
复核人：
日期：
年月日
4.确认依据及判断标准
4.1确认依据
4.1.1《LC-2040C型高效液相色谱仪安装使用说明》
4.1.2《液相色谱仪校验规程》JJG705-2014
4.1.3《中国药典》2010年版二部附录
4.1.4《药品GMP指南》2010年版
4.2评判标准
4.2.1性能确认（PQ）
系统
校验项目
标准
输液系统
1、泵耐压
2、泵流量设定值误差SS
3、泵流量稳定性SR
4、梯度误差Gi
符合规定
±2%
2%
±3%
柱温箱系统
1、温度设定最大误差
2、温度稳定性
±2℃
≦1℃/h
检测器系统
1、基线噪音
2、基线漂移
3、最小检测限
5×10-4AU
5×10-3AU/30min
5×10-6g/ml
（萘/甲醇溶液）
整机性能
1、定性重复性
2、定量重复性
3、线性测定
≤1.0%
≤3.0%
相关系数R≥0.999
5.确认内容
5.1性能确认（PQ）
5.1.1输液系统确认
5.1.1.1泵耐压：
仪器连接完好后，以100%甲醇为流动相，流速0.2ml/min.启动仪器，待压力平稳后，观察10分钟，应无漏液现象。
卸下色谱柱，堵住泵出口（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保存5分钟，应无漏液现象。
5.1.1.2泵流量设定值误差SS、稳定性误差SR：
启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式
（1）、
（2）计算SS、SR
流量（ml/min）
次数
W1
W2
W2-W1
SS
SR
0.5
1
2
3
1.0
1
2
3
2.0
1
2
3
表1
注：
Fm=（W2-W1）/（ρ•t）
Ss=（
-Fs）/Fs×100%式
（1）
SR=（Fmax-Fmin）/
×100%式
（2）
式中：
Fm——实测流速；
W2——容量瓶+流动相的质量，g；
W1——容量瓶的质量，g；
ρ——试验温度下流动相的密度，g/mL；
t——收集流动相的时间，min；
——同一组测量的算术平均值，mL/min；
FS——流量设定值，mL/min；
Fmax—同一组测量中流量最大值，mL/min；
Fmin—同一组测量中流量最小值，mL/min。
5.1.1.3梯度误差Gi：
色谱条件：
色谱柱：
限流阻尼管流速：
2.0ml/min检测波长：
265nm
流动相A：
纯化水流动相B：
0.1%丙酮水溶液
以流动相A平衡系统，按表2梯度程序测试2次，记录色谱图。
画出B溶剂经5段阶梯从0%到100%B梯度变化曲线（如图1），求出由B溶剂变化所产生的每一段阶梯对应的响应信号的变化值Li；按下列公式
（1）计算每一段阶梯对应的响应信号值的变化平均值
；按下列公式
（2）计算五段阶梯对应的响应信号值的总平均值
；按下列公式（3）计算每一段阶梯的误差Gi，取Gi的最大值作为仪器梯度误差报告。
表2梯度程序
时间（分）
流动相A%
流动相B%
1.00
100.0
0.0
1.01
80.0
20.0
4.00
80.0
20.0
4.01
60.0
40.0
7.00
60.0
40.0
7.01
40.0
60.0
10.00
40.0
60.0
10.01
20.0
80.0
13.00
20.0
80.0
13.01
0.0
100.0
16.00
0.0
100.0
21.00
100.0
0.0
26.00
100.0
0.0
图1梯度组成准确度示意图
=
公式
（1）
=
公式
（2）
Gi=
公式（3）
式中：
————第i段阶梯响应信号值的平均值；
L1i————第i段阶梯第1组响应信号值；
L1（i-1）——第（i-1）段阶梯第1组响应信号值；
L2i————第i段阶梯第2组响应信号值；
L2（i-1）——第（i-1）段阶梯第2组响应信号值；
————5段阶梯响应信号值的总平均值；
Gi————第i段阶梯的梯度误差
表3
i
L1i
L1（i-1）
（℃）
L2i
L2（i-1）
Gi
1
2
3
4
5
5.1.2柱温箱系统确认
依次设定柱温箱温度为25℃，35℃，45℃值进行校验，这些温度应覆盖实验室使用的柱温范围,当使用柱温超出该范围时，需要增加该温度点校验。
设定待校验温度，待测温仪显示的温度稳定后，记录温度显示值，每隔10分钟记录一次，每个温度点记录7次。
求出平均值，设定值与平均值之差为设定值误差△T，7次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc。
表4
设定温度
（℃）
次数
测定温度
（℃）
平均温度
（℃）
ΔT
（℃）
Tc
25℃
1
2
3
4
5
6
7
35℃
1
2
3
4
5
6
7
45℃
1
2
3
4
5
6
7
5.1.3检测器系统确认
5.1.3.1基线漂移和基线噪声：
色谱条件：
色谱柱：
C18柱流速：
1.0ml/min检测波长：
254nm流动相：
甲醇
在分析界面中点击基线检查，设置参数后，点击运行，工作站会自动记录30分钟，运行完毕后，机器自动计算出结果，给出是否通过的结论。
将运行界面复制到Word文档中，打印出来即可。
其他型号站基线漂移和基线噪声的测试方法：
按不同的仪器配置，设定检测器的灵敏度为最强灵敏度。
待系统平衡后，调整基线在图谱的中部位置，记录基线30分钟。
以图谱显示的刻度值，计算基线噪音和基线漂移值。
基线漂移：
________________<5×10-4AU
基线噪声：
________________<5×10-3AU/30min
5.1.3.2最小检测限：
按上述色谱条件，平衡系统。
取20µl的1×10-7g/ml萘/甲醇溶液进样，记录色谱图。
按下列公式计算最小检测限：
CL=
注：
Nd与H的单位应一致；分母中的20为进样体积，单位为µl。
式中：
CL——最小检测浓度,g/ml；
Nd——基线噪音高度；
c——标准溶液浓度,g/ml；
V——进样体积，µl；
H——标准溶液的峰高。
最小检测限（CL）=
=_______________________________
5.1.4整机性能确认
5.1.4.1定性与定量重复性：
色谱条件：
色谱柱：
C18柱流速：
1.0ml/min检测波长：
254nm流动相：
甲醇
取1×10-4g/ml萘/甲醇标准溶液连续进样6次，记录色谱图，以萘峰的保留时间和峰面积，计算相对标准偏差RSD，即为整机性能的定性与定量重复性。
进样次数
1
2
3
4
5
6
平均值
RSD
RT（min）
峰面积
表5
5.1.4.2进样针性能线性：
取1×10-4g/ml萘/甲醇标准溶液，分别以5μl、10μl、15μl、20μl、30μl的体积进样，记录色谱图。
重复测定3次。
以进样体积Vi为横坐标，以3次萘峰平均面积Ai为纵坐标作线性回归，得其线性方程及相关系数R。
表6
进样体积（μl）
5
10
15
20
30
平均峰面积
线性方程，相关系数R
5.1.4.3线性：
配置萘/甲醇标准溶液，使浓度分别为0.2×10-4g/ml、0.4×10-4g/ml、0.6×10-4g/ml、0.8×10-4g/ml、1.0×10-4g/ml、1.2×10-4g/ml以20μl的体积进样，重复测定3次，记录色谱图。
以进样体积Vi为横坐标，以3次萘峰平均面积Ai为纵坐标作线性回归，得其线性方程及相关系数R。
表7
样品浓度×10-4g/ml
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
平均峰面积
线性方程，相关系数R
6.再确认要求
6.1再验证周期
6.1.1设备大修后需再校验。
6.1.2由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。
6.1.3高效液相色谱仪的验证周期为12个月，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。
6.2再验证内容
进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。
7.确认结果汇总
7.1性能确认（PQ）
系统
校验项目
标准
测试结果
输液系统
泵耐压
泵流量设定值误差SS
泵流量稳定性SR
梯度误差Gi
符合规定
±2%
2%
±3%
柱温箱系统
温度设定最大误差
温度稳定性
±2℃
≦1℃/h
检测器系统
基线噪音
基线漂移
最小检测限
5×10-4AU
5×10-3AU/30min
5×10-6g/ml
（萘/甲醇溶液）
整机性能
定性重复性
定量重复性
线性测定
≤1.0%
≤3.0%
相关系数R≥0.999
8.结果评价
起草人/日期：
QC审核人/日期：
QA审核人/日期：
升级会员 