芦丁的提取.docx
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芦丁的提取
Documentserialnumber【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
芦丁的提取
实验从槐花米中提取芦丁
【实验目的】
通过从槐花米中提取芦丁的实验,掌握用酸碱调节提取中药活性成分的方法.
【实验原理】
槐花米又名槐米,是槐花的花蕾.性凉,味苦,功能凉血,止血,主治肠风,痔血,便血等症.槐花米的主要活性成分是芦丁.
芦丁又名芸香苷,不仅存在于槐花米中(含量达10-20%),在荞麦叶等中,也有存在.结构式如下:
从结构式中不难看出,芦丁实际上是由黄酮与糖(葡萄糖和鼠李糖)形成的苷.由于含有黄酮结构,所以,呈黄色.黄酮部分连有许多酚-OH,故易溶于碱液,酸化复析出,这是本实验采用酸-碱调节法来提取芦丁的依据.
纯芦丁为淡黄色针状结晶,不溶于乙醇,氯仿等有机溶剂,熔点为188℃(理论值),带三个结晶水的熔点为174-178℃.
芦丁能增强毛细管的韧性,适用于毛细管脆弱的患者.
【实验步骤】
称取15g槐花米,用粉碎机研成粉状.置于250ml烧杯中,加入150ml饱和石灰水[1],于石棉网上加热至沸,并不断搅拌,煮沸15分钟后,抽滤[2].滤渣再用100ml饱和石灰水煮沸10分钟,抽滤.
合并两次滤液,用5%盐酸调节至pH3-4[3].放置1-2小时,使沉淀完全,抽滤,并用水洗涤2-3次,即得芦丁粗品.
将粗品置于250ml的烧杯中,加水150ml,在石棉网上加热至沸,不断搅拌,并慢慢加入约50ml饱和石灰水,调节溶液pH值为8-9,待沉淀溶解后,趁热过滤.滤液置于250ml的烧杯中,用5%盐酸调节至pH4-5,静置30分钟.芦丁即以浅黄色结晶析出,抽滤,并用水洗涤1-2次,烘干,称重[4],测熔点.
【注解】
[1]加入饱和石灰水既可达到用碱液提取芦丁的目的,同时,还可除去槐花米中的多糖粘液质.
[2]抽滤时,宜先小心倾出上层清液,再慢慢倒出带结晶的溶液,以防结晶过早堵住滤纸孔.后面的抽滤均需如此.
[3]注意小心滴加,约需7-8ml稀盐酸.如果滴加过多,pH值过低,芦丁(苷类)则易水解.
[4]产量约为.
【实验结果】
产品的外观性状
产量
【问题与讨论】
1本实验中,开始用饱和石灰水提取,再用酸调节到pH3-4,这段pH值范围较宽;后来又用饱和石灰水调节到pH3-4,再用酸调节到pH4-5,这段pH值范围较窄.为什么要这样做如果反过来(先调窄后调宽)行不行
2在一开始用酸调节pH值时,某生不小心,加入的稀盐酸过量,pH值小于3-4,请问对实验会产生什么后果为什么
3根据这个实验,请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理.
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
槐米为豆科植物槐(SophorajaponicaL.)的未开放花蕾.味苦性凉,具清热凉血,止血之功.常用于治疗多种出血症:
肠风便血,痔血,尿血,衄血,崩漏下血,赤血下痢等.槐米常炒炭应用.
槐米的主要化学成分为芦丁,其含量可达12~16%,其次含有槲皮素,三萜皂苷,槐花米甲素,槐花米乙素,槐花米丙素等.芦丁具有Vitp样作用,可降低毛细血管脆性和调节通透性.临床上用作毛细血管脆性引起的出血症,常作为高血压症的辅助治疗药.
[目的要求]
1.通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作.
2.掌握槲皮素的制备原理及操作.
3.熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用
4.通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法.
[实验原理]
芦丁(rutin):
C27H30O16·3H2O,浅黄色针状结晶,mp174~178℃(含三分子水);188℃(无水物).难溶于冷水(1:
8000~10000),可溶于热水(1:
180~200),热甲醇(1:
10),冷甲醇(1:
100),热乙醇(1:
60),冷乙醇(1:
650);难溶于乙醚,三氯甲烷,石油醚,乙酸乙酯,丙酮等,易溶于碱液.
槲皮素(quercetin):
C15H10O7·2H2O,黄色结晶,mp313~314℃(2分子结晶水),316℃(无水物).能溶于冷乙醇(1:
290),易溶于沸乙醇(1:
23),可溶于甲醇,乙酸乙酯,冰醋酸,吡啶,丙酮等;难溶于水,苯,石油醚等溶剂.
芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离.利用芦丁易溶热水,热乙醇,较难溶于冷水,冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制.芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖,鼠李糖,依此进行制备槲皮素.通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定.
[实验内容]
一,芦丁的提取分离及精制
方法⑴
槐米粗粉(50g)
置1000ml烧杯中,加入500ml饱和石灰水,加热,并维持pH8~9
煮沸20分钟,趁热用脱脂棉滤过
滤液药渣
用300ml饱和石灰水煮沸10分钟,维持pH8~9
趁热滤过
滤液药渣(×)
合并
在60℃~70℃下用浓HCl调pH至4~5
静置,抽滤
沉淀
低温(80℃)干燥,称重.按1:
200的比例加水,
加热使溶解,趁热滤过
滤液
静置,抽滤,减压干燥,计算收率
芦丁精制品
方法⑵利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离.
槐米粗粉
沸水煮沸5~10分钟,反复2次
趁热滤过
水提取液药渣
放冷
沉淀析出(粗芦丁)
热水重结晶
或乙醇重结晶
芦丁结晶
二,槲皮素的制备
称取精品芦丁1g
置250ml烧瓶中
加2%H2SO4200ml
加热回流1小时
放冷,静置,抽滤
酸性滤液沉淀
中和水洗两次,干燥
乙醇重结晶
中性滤液称重,计算收率
浓缩
黄色细针状结晶
浓缩液(槲皮素)
(供糖的PC鉴定)
三,检识反应
1.芦丁的定性反应
取芦丁适量,加乙醇使溶解,分成三份供下述试验用:
(1)盐酸镁粉试验:
取样品液适量,加2滴浓HCl,再酌加少许镁粉,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至深红色.
(2)锆-枸试验:
取样品液适量,然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入2%枸椽酸的甲醇溶液,并详细记录颜色变化.
(3)α-萘酚-浓硫酸反应:
取样品液适量,加等体积的l0%α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色.
2.芦丁的UV
(1)鉴定试剂的配制
①甲醇钠溶液:
取金属钠,切碎,小心加入色谱甲醇10ml中,此液置于玻璃瓶中,用橡皮塞密封.
②三氯化铝溶液:
取1g无水三氯化铝,小心加入色谱甲醇20ml中,放置24小时后全部溶解即得.
③醋酸钠:
用无水粉末醋酸钠.
④⑤硼酸饱和溶液:
取无水硼酸,加入适量色谱甲醇,制成饱和溶液.
(上述贮备液可放置六个月)
(2)芦丁溶液的配制
精密称取芦丁纯品,用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度.
(3)光谱的测定
①甲醇光谱:
取样品液置石英杯中,至200~500nm内进行扫描,重复一次,观察紫外光谱.
②甲醇钠光谱:
取样品液置石英杯中,加入甲醇钠溶液3滴后,立即测定,放置5分钟后再测一次.
③三氯化铝光谱,在盛有样品液的石英杯中,加入三氯化铝6滴,放置1分钟后进行测定.测定后加入3滴盐酸溶液(盐酸:
水=1:
1)再进行测定.
④醋酸钠光谱:
取样品液约3ml,加入过量的无水醋酸钠固体,摇匀(杯底剩有约2mg的醋酸钠),加入醋酸钠后两分钟内测定,5分钟到10分钟后再测定一次.
3.芦丁及槲皮素的色谱
支持剂:
中速层析滤液(5×20cm)
展开剂:
正丁醇-醋酸-水(4:
1:
5)上层
样品:
自制槲皮素的乙醇溶液
自制芦丁的乙醇溶液
对照品:
槲皮素标准品的乙醇溶液
芦丁标准品的乙醇溶液
显色剂:
三氯化铝乙醇溶液喷雾
4.糖的纸色谱检识
支持剂:
中速层析滤纸(5×20cm)
样品:
取水解后的滤液10ml,水浴加热,且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性,过滤,取滤液并浓缩至2mI左右,放冷后,供纸色谱点样用.
对照品:
1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品醇溶液
展开剂:
正丁醇-醋酸-水(4:
1:
5)上层
显色剂:
喷以邻苯二甲酸苯胺溶液,105℃烘烤5分钟至斑点显色清晰.
[实验说明及注意事项]
1.用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质.但钙离子浓度及pH值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏.
2.用HCl调PH时,应注意PH不要过低,因为PH过低(PH2以下)会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解,同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏,导致收率下降.
3.注意观察槲皮素制备过程中的实验现象.
[思考题]
1.苷类结构检识的一般程序
2.苷类水解有几种催化方法
3.怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上
4.怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖
在黄酮类化合物结构鉴定中的应用.
+鼠李糖+葡萄糖