芦丁的提取Word文档格式.docx

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【注解】

[1]加入饱和石灰水既可达到用碱液提取芦丁的目的,同时,还可除去槐花米中的多糖粘液质.

[2]抽滤时,宜先小心倾出上层清液,再慢慢倒出带结晶的溶液,以防结晶过早堵住滤纸孔.后面的抽滤均需如此.

[3]注意小心滴加,约需7-8ml稀盐酸.如果滴加过多,pH值过低,芦丁（苷类）则易水解.

[4]产量约为.

【实验结果】

产品的外观性状

产量

【问题与讨论】

1本实验中,开始用饱和石灰水提取,再用酸调节到pH3-4,这段pH值范围较宽;

后来又用饱和石灰水调节到pH3-4,再用酸调节到pH4-5,这段pH值范围较窄.为什么要这样做如果反过来（先调窄后调宽）行不行

2在一开始用酸调节pH值时,某生不小心,加入的稀盐酸过量,pH值小于3-4,请问对实验会产生什么后果为什么

3根据这个实验,请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理.

实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定

槐米为豆科植物槐（SophorajaponicaL.）的未开放花蕾.味苦性凉,具清热凉血,止血之功.常用于治疗多种出血症:

肠风便血,痔血,尿血,衄血,崩漏下血,赤血下痢等.槐米常炒炭应用.

槐米的主要化学成分为芦丁,其含量可达12～16%,其次含有槲皮素,三萜皂苷,槐花米甲素,槐花米乙素,槐花米丙素等.芦丁具有Vitp样作用,可降低毛细血管脆性和调节通透性.临床上用作毛细血管脆性引起的出血症,常作为高血压症的辅助治疗药.

[目的要求]

1.通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作.

2.掌握槲皮素的制备原理及操作.

3.熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用

4.通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法.

[实验原理]

芦丁（rutin）:

C27H30O16·

3H2O,浅黄色针状结晶,mp174～178℃（含三分子水）;

188℃（无水物）.难溶于冷水（1:

8000～10000）,可溶于热水（1:

180～200）,热甲醇（1:

10）,冷甲醇（1:

100）,热乙醇（1:

60）,冷乙醇（1:

650）;

难溶于乙醚,三氯甲烷,石油醚,乙酸乙酯,丙酮等,易溶于碱液.

槲皮素（quercetin）:

C15H10O7·

2H2O,黄色结晶,mp313～314℃（2分子结晶水）,316℃（无水物）.能溶于冷乙醇（1:

290）,易溶于沸乙醇（1:

23）,可溶于甲醇,乙酸乙酯,冰醋酸,吡啶,丙酮等;

难溶于水,苯,石油醚等溶剂.

芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离.利用芦丁易溶热水,热乙醇,较难溶于冷水,冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制.芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖,鼠李糖,依此进行制备槲皮素.通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定.

[实验内容]

一,芦丁的提取分离及精制

方法⑴

槐米粗粉（50g）

置1000ml烧杯中,加入500ml饱和石灰水,加热,并维持pH8～9

煮沸20分钟,趁热用脱脂棉滤过

滤液药渣

用300ml饱和石灰水煮沸10分钟,维持pH8～9

趁热滤过

滤液药渣（×

）

合并

在60℃～70℃下用浓HCl调pH至4～5

静置,抽滤

沉淀

低温（80℃）干燥,称重.按1:

200的比例加水,

加热使溶解,趁热滤过

滤液

静置,抽滤,减压干燥,计算收率

芦丁精制品

方法⑵利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离.

槐米粗粉

沸水煮沸5～10分钟,反复2次

水提取液药渣

放冷

沉淀析出（粗芦丁）

热水重结晶

或乙醇重结晶

芦丁结晶

二,槲皮素的制备

称取精品芦丁1g

置250ml烧瓶中

加2%H2SO4200ml

加热回流1小时

放冷,静置,抽滤

酸性滤液沉淀

中和水洗两次,干燥

乙醇重结晶

中性滤液称重,计算收率

浓缩

黄色细针状结晶

浓缩液（槲皮素）

（供糖的PC鉴定）

三,检识反应

1.芦丁的定性反应

取芦丁适量,加乙醇使溶解,分成三份供下述试验用:

（1）盐酸镁粉试验:

取样品液适量,加2滴浓HCl,再酌加少许镁粉,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至深红色.

（2）锆-枸试验:

取样品液适量,然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入2%枸椽酸的甲醇溶液,并详细记录颜色变化.

（3）α-萘酚-浓硫酸反应:

取样品液适量,加等体积的l0%α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色.

2.芦丁的UV

（1）鉴定试剂的配制

①甲醇钠溶液:

取金属钠,切碎,小心加入色谱甲醇10ml中,此液置于玻璃瓶中,用橡皮塞密封.

②三氯化铝溶液:

取1g无水三氯化铝,小心加入色谱甲醇20ml中,放置24小时后全部溶解即得.

③醋酸钠:

用无水粉末醋酸钠.

④⑤硼酸饱和溶液:

取无水硼酸,加入适量色谱甲醇,制成饱和溶液.

（上述贮备液可放置六个月）

（2）芦丁溶液的配制

精密称取芦丁纯品,用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度.

（3）光谱的测定

①甲醇光谱:

取样品液置石英杯中,至200～500nm内进行扫描,重复一次,观察紫外光谱.

②甲醇钠光谱:

取样品液置石英杯中,加入甲醇钠溶液3滴后,立即测定,放置5分钟后再测一次.

③三氯化铝光谱,在盛有样品液的石英杯中,加入三氯化铝6滴,放置1分钟后进行测定.测定后加入3滴盐酸溶液（盐酸:

水=1:

1）再进行测定.

④醋酸钠光谱:

取样品液约3ml,加入过量的无水醋酸钠固体,摇匀（杯底剩有约2mg的醋酸钠）,加入醋酸钠后两分钟内测定,5分钟到10分钟后再测定一次.

3.芦丁及槲皮素的色谱

支持剂:

中速层析滤液（5×

20cm）

展开剂:

正丁醇-醋酸-水（4:

1:

5）上层

样品:

自制槲皮素的乙醇溶液

自制芦丁的乙醇溶液

对照品:

槲皮素标准品的乙醇溶液

芦丁标准品的乙醇溶液

显色剂:

三氯化铝乙醇溶液喷雾

4.糖的纸色谱检识

中速层析滤纸（5×

取水解后的滤液10ml,水浴加热,且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性,过滤,取滤液并浓缩至2mI左右,放冷后,供纸色谱点样用.

1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品醇溶液

喷以邻苯二甲酸苯胺溶液,105℃烘烤5分钟至斑点显色清晰.

[实验说明及注意事项]

1.用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质.但钙离子浓度及pH值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏.

2.用HCl调PH时,应注意PH不要过低,因为PH过低（PH2以下）会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解,同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏,导致收率下降.

3.注意观察槲皮素制备过程中的实验现象.

[思考题]

1.苷类结构检识的一般程序

2.苷类水解有几种催化方法

3.怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上

4.怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖

在黄酮类化合物结构鉴定中的应用.

+鼠李糖+葡萄糖