研究生蛋白质组学解答题集锦.docx
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研究生蛋白质组学解答题集锦
一、解释（共15分）
1、MALDITOFMS（10分）
基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱（MatrixAssistedLaserDesorptionIonization/TimeofFlightMassSpectra），离子源是基质辅助激光解吸电离，质量分析器是飞行时间管。
MALDI-TOFMS是近年来获得快速发展的一种软电离生物质谱，它的建立突破了生物大分子质谱分析的难题，该技术无论在理论上还是在设计上都具有简单、高效、灵敏、快速、准确、测定质量范围大等特点。
基本原理：
MALDI是利用一定波长的激光脉冲，在极短的时间间隔内，对含被测样品靶物的一个微小区域提供高能量，从固相直接获得离子的电离方法，其基本特点就是使用了固体基质，特别适用于对热敏感或不挥发化合物的离子化，因此在蛋白质组分析中得到了广泛应用。
TOF分析器的离子分离是用非磁方式达到的，离子在离子源中形成后为电场所加速，进入真空无场漂移区，具有不同质荷比的离子因其通过漂移区的时间不同而实现分离，先后到达检测器产生信号。
质量较轻的离子飞行速度快,较早到达检测器；较重的离子飞行速度慢，较晚到达检测器，且离子的飞行时间与其质荷比的平方根（m/z）1/2成正比，因此可以通过检测飞行时间来测定离子的质荷比。
2、免疫共沉淀（5分）
Co-Immunoprecipitation（Co-IP），是以抗体-抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
基本原理：
当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留下来。
如果用蛋白质x的抗体免疫沉淀x，那么与x在体内结合的蛋白质y也能被沉淀下来。
该技术可用于鉴定两种目标蛋白质是否在体内结合以及进行结合位点分析，还可用来筛选一种特定蛋白质的新的作用搭档。
二、问答题（共85分）
1、WesternBlotting的流程（10分）。
答1.收集蛋白样品（Proteinsamplepreparation）
2.电泳（Electrophoresis）
（1）SDS-PAGE凝胶配制
（2）样品处理
（3）上样与电泳
3.转膜（Transfer）
4.封闭（Blocking）
5.一抗孵育（Primaryantibodyincubation）
6.二抗孵育（Secondaryantibodyinucubation）
7.蛋白检测（Detectionofproteins）
8.膜的重复利用（Membranerecovery）
2、血浆/血清蛋白质组研究中需要着重注意的问题（10分）。
因血浆血清中的含有各种蛋白质及降解产物，想要获得所需蛋白，需选择适合的前处理条件，尤其在进行血浆的肽组学分析时显得更为重要。
1、血浆/血清样品选择
①去血小板的血浆由于避免血小板的激活作用，减少了蛋白质的体外降解，因而较血清更适合一定的肽组学研究；
②去血小板的EDTA血浆或枸橼酸血浆样品，更适合分析低分子质量的蛋白质；
③如果要使用一定的蛋白酶抑制剂，一定要在早期加入，而且要谨慎使用，因为抑制剂的加入可能对MS分析造成一定的干扰，而且一些小分子的抑制剂与蛋白质结合转化成蛋白质的亚型，这些都将使得分析结果变得复杂。
2、样品的收集与贮存
①为减少血小板的污染，血液样品在分析前最好用0.2μm的低蛋白质结合膜过滤，样品分装冰冻储存，减少融化-再冰冻的循环；
②样品应分装并贮存在液氮中，减少或不加蛋白酶抑制剂，以减少对测定结果的干扰。
3、去除高丰度蛋白和分级技术
血浆/血清样品中蛋白质种类很多，而且所含蛋白质具有较大的动力学范围，其中有许多丰度较高但不含有特殊生物学信息的蛋白质，这将会对目标蛋白质的分析造成极大的困难，甚至根本不能检测低丰度蛋白质，因此，通过对原始蛋白质进行洗脱和分步分离减少样品中蛋白质的复杂性，可以极大简化蛋白质的预测和分析，提高对低丰度蛋白质的检测和识别的灵敏度和准确度。
4、多维策略的运用
3、药物蛋白质组学定义及主要研究领域。
试举例说明其在药物靶点的发现和确认中的应用（10分）。
药物蛋白质组学就是蛋白质组学技术在药物研发中的应用。
药物蛋白质组学的主要研究领域：
1临床前研究-发现所有可能的药物作用靶点，以及针对这些靶点的全部可能的化合物，以及应用蛋白质组学方法研究药物作用机制和毒理学；2临床研究方面-发现药物作用的特异蛋白作为患者选择有效药物的依据和临床诊断的标志物，或以蛋白质谱的差异将患者分类并给予个体化治疗。
药物蛋白质组学在药物靶点发现和确认中的应用举例：
（1）研究人员通过比较给药前后的蛋白质组，找到了药物阿霉素抗乳腺癌的一个作用靶标Hsp27。
（2）疟原虫入侵血红细胞的阻断靶点探测：
半胱氨酸蛋白水解酶是疟原虫生存必需的酶，Greenbaum等利用靶向半胱氨酸蛋白水解酶的化学探针I125-DCG-04打靶，然后通过抗DCG-04的生物素纯化，得到了半胱氨酸蛋白水解酶类的亚蛋白质组；通过酶活性分析，最终发现在疟原虫的入侵血红细胞的裂殖期，仅有一个有半胱氨酸蛋白水解酶活性的蛋白质—falcipain1；从数据库筛选到falcipain1的抑制剂YA29-Eps，结果证实YA29-Eps可阻断疟原虫的入侵红细胞。
4、结构蛋白质组学与功能蛋白质组学的研究方法和内容的差异，以及在临床研究和应用上的特点与作用（10分）。
5、蛋白质组学在心血管基础和临床研究中的目的和意义（10分）。
临床将研究结果主要用于：
①从蛋白质水平研究相关心血管疾病的发病机制；
②应用心血管疾病蛋白标记物来更早、更准确地检测心血管疾病，尤其是急性冠脉综合征（ACS）；
③蛋白质组学来源的信息作为目前患者诊断的补充；
④蛋白质组检测获得的信息有利于个体化治疗，为其提供新的治疗靶位；
⑤蛋白质组学检测工具和信息用于治疗的各个阶段，可以适时评估治疗的效果和校正治疗方案。
6、目前的蛋白质组学技术在医学研究中的优势和不足（10分）。
蛋白质是机体生理、病理活动功能的直接执行者，对于它的性质和数量变化的精确把握是揭示机体生理变化和疾病病因、发病机制的重要切入点。
与传统的单一蛋白质研究方法相比，组学技术可大大提高诊断的敏感性和特异性，蛋白质组学的这一技术特点无疑在医学研究中具有不可替代的优势，它可以跟踪机体最细微的生理病理变化，通过对疾病特异性蛋白质的寻找，使疾病的早期诊断成为可能。
蛋白质组学技术为正常生理研究、疾病诊断，尤其是早期诊断方面提供了广阔的技术平台，在指导治疗和判断预后等方面具有巨大发挥空间。
蛋白质组学技术在医学研究中的优势体现在各个领域、各个方面，例如，神经生理学方面，由于大脑高度复杂的结构和功能，传统研究方法已难以适应亟待发展的科研及临床需求，而蛋白质组学的出现给神经科学研究带来新的动力；肿瘤的早期诊断及预后判断是目前蛋白质
7、鼻咽癌蛋白质组学研究的内容和成果（10分）。
1）NPC不同阶段和分化程度的蛋白质组学研究
肿瘤分化过程中蛋白质组动态变化规律的研究对于肿瘤诊断和治疗具有十分重要意义。
FFPE组织蛋白质组学技术的成功建立为肿瘤蛋白质组学研究开拓了更广阔的研究领域
（2）肿瘤间质细胞的蛋白质组学研究
为阐明肿瘤微环境在鼻咽癌发生发展中的作用及分子机制，从间质中寻找NPC诊断或治疗的分子靶标，采用定量蛋白质组学技术对纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质进行了研究和比较。
2D-DIGE（荧光双向差异凝胶电泳）技术分离鉴定NPC间质与正常鼻咽间质差异表达蛋白进一步对差异蛋白Periostin的功能及作用机理进行研究，发现:
&&Periostin在NPC间质高表达，&&其通过与IntegrinαVβ5结合，来促进肿瘤细胞的侵袭和转移，表明肿瘤微环境的蛋白质组变异在鼻咽癌发病中发挥重要作用
3）NPC放疗抵抗的蛋白质组学
部分NPC对放疗抗拒，但其机制仍然不甚清楚，因此寻找鼻咽癌放疗抗拒相关的蛋白质，不仅有助于揭示鼻咽癌放疗抗拒的机制，且能为鼻咽癌放疗敏感性预测及鼻咽癌的个体放疗提供科学依。
2DE筛选放疗抵抗（IR）的NPC细胞差异表达蛋白质，研究结果提示：
14-3-3σ和Maspin的下调及GRP78和Mn-SOD的上调与放疗抵抗相关，这四个蛋白质有望作为预测鼻咽癌放疗反应的分子标志物
4）重要蛋白质和信号分子在NPC发生发展中的作用的蛋白质组学研究P53、TNF-αRKIP：
Raf激酶抑制蛋白P53下调致HSP27和14-3-3σ上调，GRP75下调,上调P53后，HSP27和14-3-3σ下调，GRP75上调。
以上结果为揭示NPC细胞中p53蛋白聚集和功能异常的机制，以及p53基因在NPC发病中的作用提供了新线索
通过多角度对鼻咽癌发生发展中的蛋白质动态变化规律的探索和研究，发现了一批在鼻咽癌发生发展中发挥重要作用的蛋白质，为鼻咽癌发生机制和分子标志物筛选提供了重要线索，部分蛋白有望成为肿瘤标志物。
8、双向电泳技术在蛋白质组学研究中的优缺点（8分）。
我
双向电泳是当前蛋白质组学研究中分辨率最高、信息量最大的分离技术。
具体优点如下：
1）.可以将上千种不同的蛋白质分离开来，并得到每种蛋白质的等电点、表观分子量和含量等信息。
2）.如果双向电泳后续接一系列自动化操控，就能大大增加蛋白质分析与鉴定的能力
3）.可检测翻译后和翻译过程的蛋白质修饰
虽然双向电泳是目前蛋白质组学研究中最有效的分离技术，其
缺点：
1）、不能进行可完全的2-DE分析
2）、许多较大的疏水蛋白质在IEF分析中的结果不理想
3）、对相对分子质量过大（）100000）的蛋白质分离分析能力差4、双向电泳不易实现自动化操作，不能适应大规模蛋白质组分析的需要5、双向电泳首先由的主要染色技术（考马斯亮兰染色、银染色）的检测领命度较差，且局限在越100倍的动态范围，而细胞中蛋白质表达的动力学范围为百万倍，而且从胶上切割下的蛋白点消化后所产生的肽的回收率常常低于60%，这更会妨碍MS对低丰度蛋白的鉴定。
9、亚细胞蛋白质组学研究的关键及其解决措施（7分）。
由于细胞器在细胞内结构上与许多其他亚细胞组分相关联，和细胞器组成的动态性，所以分离得到的细胞器很难达到100%的纯度。
所以，亚细胞组分的纯度问题和亚细胞组分生物学功能的深入挖掘是亚细胞蛋白质组研究所面临的挑战。
现在已经有一些研究策略来解决这一难点问题，如Schirmer等提出的差减蛋白质组学方法来解决核膜的内质网污染问题；Andersen等提出的蛋白质校正谱图分析法（proteincorrelationprofiling，PCP）来分析可能定位于中心体的蛋白质；Jiang等运用ICAT技术和生物信息学手段的方法来确证线粒体蛋白质，排除污染蛋白。
一、解释：
1、Two-dimensionalGelElectrophoresis
2、MALDITOFMS
3、蛋白质组学研究中的insilico生物学
4、亚细胞蛋白质组学
二、简要说明蛋白质组学在临床医学或疾病研究中的应用。
三、通过互联网进入http:
//www.hupo.org/，在阅读PlasmaProteomeProject中Overviewofproject的基础上，介绍该项目的研究内容。
四、将文献ProteomeAnalysisofHepatocellularCarcinomabyTwo-dimensionalDifferenceGelElectrophoresis（FuchuHeetal，Molecular&CellularProteomics6:
1798-1808,2007）中的ABSTRACT翻译成中文。
五、药物蛋白质组学的主要研究领域有哪些？
六、蛋白质组学在研究与应用上有哪些局限性？
1、Two-dimensionalGelElectrophoresis：
即双向凝胶电泳,它是当前蛋白组学研究中分辨率最高，信息量最大的分离技术，它的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。
2、MALDITOFMS：
即基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，MALDI-TOFMS（MatrixAssistedLaserDesorptionIonizationTimeofFlightMassSpectrometry）；其原理是：
当用一定强度的激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即测定离子的质量电荷之比（M/Z）与离子的飞行时间成正比来检测离子。
MALDI-TOF-MS的中心技术就是依据样品的质荷比（M/Z）的不同来进行检测，并测得样品分子的分子量。
它具有灵敏度高、准确度高、分辨率高、图谱简明、质量范围广及速度快等特点，在操作上制样简便、可微量化、大规模、并行化和高度自动化处理待检生物样品，而且在测定生物大分子和合成高聚物应用方面有特殊的优越性，是近年来发展起来的一种软电离新型有机质谱近年来已成为检测和鉴定多肽、蛋白质、多糖、核苷酸、糖蛋白、高聚物以及多种合成聚合物的强有力工具，已成为生命科学领域蛋白质组研究中必不可缺的重要关键技术之一。
3、蛋白质组学研究中的insilico生物学：
这是生物信息学的新名词。
相对于生命科学研究中经常使用的invivo（体内）与invitro（体外）这两个名词，Insilico强调使用计算机来解决生物学问题，Insilico生物学是生物学与信息学的交叉学科。
生物信息学已经成为蛋白组学研究中必不可少的组成部分，其应用包括：
编码的DNA序列的寻找与分析,蛋白质序列信息的获取,蛋白质鉴定和性质预测,蛋白质结构和功能预测,蛋白质序列分析,数据的分析与整合。
4、亚细胞蛋白质组学：
是利用蛋白质组学研究技术来分析一种组织或细胞亚结构蛋白质组成。
细胞内成分根据空间结构、分布及功能的不同，分成不同的细胞器或细胞区域，如细胞膜、胞浆，线粒体、溶酶体、过氧化物酶体、内质网、细胞核和高尔基体等：
另外，细胞器内一些功能单位多是大分子结构或蛋白质复合体，如核基质、剪接体、纺锤体、核孔结构及核糖体等，对这些亚细胞器结构蛋白质组学研究可以更好地理解全细胞蛋白。
二、简要说明蛋白质组学在临床医学或疾病研究中的应用。
答：
蛋白质组学在疾病的研究中占有十分重要的地位，旨在运用蛋白质组学的研究手段，通过比较正常和病理情况下细胞、组织或体液中蛋白质在组成成分、表达水平、表达位置和修饰状态上的差异，寻找疾病诊断和预后的特异性蛋白质，包括特异性抗原及相关抗原、受体、酶等，以及药物治疗的靶标等。
通过对疾病相关功能蛋白质进行定性、定量和表征研究，深入了解这些蛋白质的结构和功能，揭示疾病过程中细胞内全部蛋白质的活动规律，为疾病发生、发展机制的阐明和早期诊断及治疗提供理论依据和解决途径。
三、通过互联网进入http:
//www.hupo.org/，在阅读PlasmaProteomeProject中Overviewofproject的基础上，介绍该项目的研究内容。
答:
血浆蛋白质组计划（PPP）2003年到2005年的计划是：
制备人类血清和血浆的参考样品，并将其分发到全球55个参与该计划的实验室，以促进新兴技术的应用，并为人类血清和血浆蛋白质检测和识别提供了大量的数据和综合数据库。
运用混合蛋白质去除法、分馏、质谱分析和免疫分析方法建立的实验室数据传输协议，通过搜索引擎和注释组链接到基因和蛋白数据库。
PPP创建了一个新的人类血浆蛋白质数据库，并已经为将来在血浆和血清研究中的应用提出了一些建议。
PPP的合作试验室和工作组试验阶段处理：
（a）标本稳定性和蛋白质浓缩;（b）用18MS/MS数据集（包括亚蛋白质组分析）进行蛋白质鉴定;（c）用原始的MS/MS光谱进行独立分析;（d）搜索引擎性能;（e）生物注释和见解（f）抗体阵列;（g）直接质谱分析/表面增强激光解吸电离分析。
MS/MS数据集已经有15710种不同国际蛋白质指数（IPI）的蛋白质身份证，PPP积分算法应用多肽序列的多重匹配产生了9504个经过一个或多个肽段鉴别的IPI蛋白质和3020个经过两个或多个肽段鉴别的蛋白质，这些蛋白质的特征已经由GeneOntology,InterPro,NovartisAtlas,OnlineMendelianInheritanceinMan和基于免疫分析的浓度测定所描述。
这些数据库允许检测许多其他子集，如1274个经过三个或多个肽段鉴定的蛋白质。
用反向蛋白质匹配DNA方法鉴别了118个以前未知的开放阅读框。
来自合作计划和实验室的具体配套计划的发现于2005年8月刊登在蛋白质组学研究特刊“探索人类血浆蛋白质组”，它在慕尼黑举行的HUPO第四次世界蛋白质组学大会上向所有参会者发布。
PPP长期目标是：
综合分析人类血浆和血清蛋白成分
通过验证生物标志物，识别随着时间推移不同个体内变异的生物学来源
生理：
年龄，性别/月经周期，运动
病理：
选定的疾病/特殊人群
药理：
常见的药物
（3）测定不同人群和人群内的变异程度
PPP的下一阶段可能包括：
（a）通过建立共识和新的研究建立规范化的操作步骤;（b）对来源于HUPO的机构和其他已公布的研究的数据继续的研究和分析;（c）简化并尽可能组织与重大疾病相关的候选生物标志物的研究，以用于早期诊断，更好地对新近被诊断的患者进行分级，基于途径的靶向治疗的检测以及用于预防性干预措施的设计。
最主要的挑战是敏感性，分辨率，处理量的同时增加。
与其他合作的倡议：
（1）该项目与人类肝脏蛋白质组计划（HLPP）和人类脑蛋白质组计划（HBPP）相互合作，以确保血浆和（或）血清的分析和组织标本分析同步，就像先行者们建立的，可用于检测感兴趣的不同疾病阶段的组织蛋白标志物的方法。
（2）生物信息学，数据分析以及储存问题已由来自蛋白质组学标准化机构Hermjakob和Apweiler合作得以解决。
（3）与人类抗体计划（HAI）的相互影合作仍在进行，所以得到的任何抗体都可以添加到HAI数据库中。
四、将文献ProteomeAnalysisofHepatocellularCarcinomabyTwo-dimensionalDifferenceGelElectrophoresis（FuchuHeetal，Molecular&CellularProteomics6:
1798-1808,2007）中的ABSTRACT翻译成中文。
答:
肝细胞癌（HCC）是一种高度恶性肿瘤，并且慢性的HBV病毒感染是造成肝细胞癌的一个主要的危险因素之一。
为了明确在肝细胞癌中有致癌作用的蛋白质，我们用二维荧光DICG去研究在该肿瘤以和临近的没有肿瘤的组织样本中表达有差异的蛋白质。
研究对象为12个HBV病毒感染所致的肝细胞癌症患者，在肿瘤样品中总共有61种蛋白质有显著地上调（比率≥2，P≤0.01），然而有158种蛋白质降低（比率≥-2，P≤0.01）。
在这些蛋白质中有71种基因产物被确定。
热休克蛋白70和热休克蛋白90家族的数量同时上调，然而在肝细胞癌症患者中与代谢相关的蛋白质却降低了。
在这些结果中线粒体和过氧化物酶体中蛋白质的下降提示了在肝细胞癌致癌过程中一些特殊细胞器功能的丧失，肝脏甲基化循环中与代谢相关的四种酶在肝细胞癌的组织中下降了，提示了S-腺苷甲硫氨酸在肝细胞癌症患者中的缺失。
2种基因产物即3-磷酸甘油酸脱氢酶和氯甲亚胺转移酶-环化脱氨酶被确定呈反比变化，提示了这两种蛋白质的不同异构体或翻译后的不同修饰在肝细胞癌中都扮演了不同的角色。
首次通过Westernblot证实在肝细胞癌中热休克蛋白70和热休克蛋白90组织蛋白以及核内不均一核糖核蛋白C1/C2的过量表达，随后通过免疫组织化学对70个肝癌患者癌组织样品的分析再次得到证实，提示它们有可能是肿瘤的蛋白质标志物。
总之，我们对肝细胞癌组织中的蛋白质组改变进行了粗略分析，这些结果也许对理解肝细胞癌致癌过程中涉及的机制提供了有用的见解。
五、药物蛋白质组学的主要研究领域有哪些？
答:
药物蛋白质组学的研究思想和策略正在渗透到药物开发与临床应用的各个环节，包括临床前研究中分子药理筛选模型的构建、小分子化合物的筛选和优化、先导化合物的选择、药物靶标的发现和确认、药物作用机制的研究、药物的毒性研究等；临床研究中应用药物蛋白质组学策略筛选用作疾病分类分型和临床系统诊断标志的疾病特异性蛋白、评价药物疗效预测疾病与后及开展药物个体化治疗等。
六、蛋白质组学在研究与应用上有哪些局限性？
答:
1.蛋白质组学中的蛋白质数量巨大，仅一个人体细胞在不同时段、不同水平表达的蛋白质就有15000种之多，分子质量多在50-100kDa的范围，其等电点、疏水性、修饰状况等差别很大。
目前最好的分离方法也只能分离1500种左右的蛋白质，因此还需建立分辨率更高的分离技术平台。
2.蛋白质组中蛋白质含量的动力学范围很宽，蛋白质组学的研究要求能同时分析各种各样的蛋白质，尽可能得到蛋白质组的“全息信息”，另一方面，低表达蛋白往往是具有重要生物学功能的蛋白质，因此，又需要排除巨量的高表达蛋白的干扰，把微量的蛋白质从蛋白质混合物中坚定出来。
目前还没有一种生物化学分析技术能完全满足这样的分析要求。
3.蛋白质学尤其是临床蛋白质组学对检测灵敏度也提出了很高的要求，现行的生物化学方法检测灵敏度只在10-14mol/l左右，而生物样品，如血浆，对其中大部分蛋白质成分的检出则要比它高出3-8个数量级。
对拷贝数为10-102的低表达蛋白的分析，要求方法学的检测灵敏度达到10-27mol/l甚至更高。
4.对蛋白质相互作用的检测是蛋白质组学研究中一个非常重要的内容，但目前人们采用的生物化学方法、分子生物学方法、基于质谱的方法以及遗传学等多种方法，由于方法本身的限制性和分析条件的特异性，往往会造成假阳性或假阴性的结果。
5.临床样本的处理往往是临床蛋白质组分析的瓶颈环节。
临床蛋白质组学研究的实验标本主要是新鲜的活组织检查标本、血液与体液，这些材料难以像实验室研究材料那样严格控制实验条件，所以在临床蛋白质组学研究中，对实验样本的选择、收集、储存与技术处理方式等诸多过程对实验结果又很大的影响，必须进行精心设计尽可能减少由于干扰因素带来的蛋白质。
仅仅通过一、两种技术显然不可能完成对蛋白质组内成千上万种不同性质的蛋白的分离和检测，没有任何一种技术能满足从表达到功能的所有类型的蛋白质研究的需要，尤其在与疾病有关的情况下，故新的生物分析化学方法的研究与实践在这当中有重要地位。
总之，目前蛋白质组学是由技术启动，但又是受技术制约的探索性科学。
一、根据免疫共沉淀和pulldown技术的原理分析其用途和优缺点（8分）。
二、简述药物蛋白质组学的定义及主要研究领域。
试举例说明其在药物靶点的发现和确认中的应用（8分）。
三、简述蛋白质组学研究中常用的样品制备技术及2-DE技术的特点（10分）。
四、如何鉴定亚细胞蛋白质组学研究中的样品纯度？
（8分）
五、为什么不能单从mRNA水平来探讨蛋白质的表达以及为什么需要以组学的研究方式来研究蛋白质？
（10分）
六、试述蛋白质组学研究的发展趋势和所面临的挑战（8分）。
七、试简述WesternBlotting实验技术的一般流程（10分）
八、阐述血浆/血清蛋白组学研究中需要着重注
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