试验方案模板.docx

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试验方案模板

试验方案模板

　　篇一：

实验方案的格式

　　实验方案

　　一.【实验题目】：

　　土壤中细菌的分离纯化实验

　　二.【实验设计思想】：

　　细菌是具有很高实用价值的一类微生物,世界各国对其研究与资源开发极为重视.目前,国内有关细菌的区系调查及资源开发虽然有一些报道,但对不同作物根际细菌的研究很少.甘肃天水麦积山海拔1742m,属黄土高原潮湿区,植物生长土壤区有机质含量丰富,本次实验将以该地区的落叶松、马尾松、白岩松、野豌豆等作物生长地区的土壤为材料,分离鉴定其中的细菌,探讨不同作物根际土壤中细菌分布数量及种类的差异,并且分析每一种菌种在植物生长过程中所起的作用，最后以此为依据来推断麦积山大片地区内土壤中微生物的分布丰富情况和它们对植物生长作出的巨大贡献.

　　三.【实验目的】：

　　1.学会培养基最基本的制备方法。

　　2.学会最基本的微生物灭菌、接种等基本操作过程。

　　2.掌握最基本的分离、纯化微生物的一系列操作操作。

　　四.【试验方法】：

　　取天水麦积山不同植物根部的土壤作为土样，通过对其土壤中微生物的一系列培养、分离、筛选最终分离出细菌得菌株，并稀释平板菌落计数法进行数量测定

　　四．实验原理:

　　1.菌种：

由于各种细菌对营养物质需求不同，在不同地方采样对选取所要的细菌含量和其它杂菌含量的多少直接有关，所以选择微生物含量有可能丰富的土壤（天水麦积山植物根区）中采样。

　　2.培养基的选取：

为了使所要的细菌能很好的生长，其它微生物生长受到一定的抑制，要用选择培养基。

还要把细菌与其他微生物相区别，还要用鉴别培养基。

为了达到既是选择培养基又是鉴别培养基，选取牛肉膏蛋白胨培养基。

　　3.培养及分离纯化：

通过涂布培养法、平板划线法等方法达到分离纯化的目的。

　　4.保藏：

通过分离纯化得到的菌种，接种与斜面培养基上，到一定时间后进行传代培养保藏，使其不死亡、减少突变所引起的生物学性状的改变。

　　5.通过形态与染色鉴定：

由于各种微生物有其特定的菌落形态特征和单细胞形态特征，可通过这些形态进行鉴定。

还由于细胞壁组成不同可进行鉴别染色法进行鉴定，也可用产生不产生芽孢进行芽孢染色。

通过以上方法可对所分离纯化的菌种进行初步的鉴定。

　　6.通过生理生化反应进行鉴定：

各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异，如表现在对对大分子糖类和蛋白质的分解能力，以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们有不同的酶系。

我们在实验室允许的条件下做了糖类发酵与氧化、是否能产生过氧化氢酶以及是否含有细胞色素氧化酶等生理生化试验，进行再次鉴定。

　　五【.实验材料】：

　　1.器材：

玻璃烧杯、天平、搪瓷烧杯、三角瓶、量筒、漏斗、试管、培养皿、吸管、培养基分装器、电炉、接种环、移液枪、PH试纸（—9）、牛角匙、牛皮纸、棉花、纱绳、高压蒸汽灭菌锅等。

　　2.牛肉膏、蛋白胨、NaCl、1mol/LNaCl、1mol/LHCl。

　　六．实验步骤：

　　1.配置牛肉膏蛋白胨培养基：

　　.配方及其配量：

　　注：

—，每份如此，根据需要可改变量进行配置。

（2）.称取药品:

按培养及配方与配量分别称取药品，取少于总量的水于烧杯中，将各个培养及成分（琼脂除外）逐一加入水中待溶。

　　（3）．加热溶解：

将玻璃被放在石棉网上（搪瓷烧杯可直接用文火加热），用文火加热并不断搅拌，促使各药品快速溶解，然后补充水分之所需培养基的量。

　　（4）调节PH值：

初配好的牛肉膏蛋白胨培养液是微酸性的，故需用1mol/LNaOH调PH至。

为避免调解时过碱，应缓慢加入NaOH液，即要边滴加NaOH

　　边搅匀培养液，然后用PH试纸侧其酸碱度值。

检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。

若偏碱，则用

　　1mol/LHCl进行调节。

pH的调节通常放在加琼脂之前。

应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度.

　　（5）.过滤:

液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。

但是供一般使用的培养基．此步可省略

　　分装:

披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。

　　分装量：

固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面。

分装入三角瓶内以不超过其容积内一半为宜。

半固体培养基以试管高度的1/4为宜．灭菌后垂直待凝。

　　.加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花制作的棉塞，棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利透气的

　　作用。

要使棉塞总长约3／5塞人试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。

有些微生物需要更好的透气，则可用8层纱布制成通气塞。

有时也可用试管帽或塑料盖代替棉塞。

　　包扎:

加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。

若培养基分装于试管中，则应先把试管扎成捆后，再于棉塞外包—层牛皮纸。

然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

　　灭菌:

将上述培养基于121℃湿热灭菌20min。

如因特殊情况没能及时灭菌，则应放人冰箱内暂时保存.

　　（10）．摆斜面灭菌后，待培养基冷却至50—60℃，然后制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上,并调整斜度,使斜面长度不超过试管总长的一半.

　　（11）.无菌检查:

将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24-48h,无菌生长时可以使用,或放置在冰箱或清洁的橱内,备用.

　　2.配置无菌生理盐水：

　　称NaCl至盛有100ml蒸馏水的三角瓶中，塞上棉塞，塞外包上一层牛皮

　　纸，至加压蒸汽灭菌锅内在121℃下灭菌20min即为无菌生理盐水。

3取样并制备土壤稀释液：

（1）.土壤前处理;取出采集的土样，去除其中较大的杂质，将其撵碎、撵细待用。

（2）制土液：

称出10克于带有无菌玻璃珠的250ml锥形瓶中，用已灭菌的量筒量取90ml无菌水溶解，振摇约20分钟，使土样与水充分混匀。

点燃酒精灯在火焰附近，用无菌移液枪从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌移液枪从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的土壤溶液。

　　4.涂布接种：

　　将上述9个平板分别贴上标签10-4、10-5、10-6各三个，然后用无菌移液枪分别由10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液中各吸取对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻的涂布均匀，室温下静置5到10分钟，使菌液吸附进培养基。

【注意：

所有的接种工作必须在无菌室里面进行，在接种之前必须先进行灭菌】

　　5．培养。

30摄氏度恒温室中培养3天

　　6.观察并进一步分离纯化。

　　观察菌落特征，并记录。

再倒两个平板。

点燃的酒精灯附近，从稀释度合适的培养平板上挑取带有溶磷圈的菌落，在新制的平板上划线分离，30摄氏度恒温室中培养3天

　　7．斜面培养放置斜面。

挑取单个菌落接种到3个斜面上培养。

置于28～30℃恒温箱中培养７２h.与此同时，用单菌落进行以下鉴定试验

　　革兰氏染色

　　涂片常规涂片法

　　初染滴加结晶紫于涂片上，染色1～2min，倾去染色液，细水冲洗至洗出液为无色。

　　媒染用碘液媒染约lmin，水洗。

　　脱色

　　用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗，终止脱色，干燥。

　　复染

　　在涂片上滴加番红液复染约2～3min，水洗，然后用吸水纸吸干。

　　镜检

　　干燥后，用油镜观察。

判断两种菌体染色反应性。

菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌（G+），被染成红色的为革兰氏阴性菌（G-）。

　　清洁显微镜。

　　先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯。

　　芽孢染色

　　；③本法限用于形成菌落的微生物

　　另活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。

将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液。

　　篇二：

模板试验方案

　　席家花园

　　模板工程

　　专

　　项

　　施

　　工

　　方

　　案

　　编制人

　　审核人

　　扬州市方圆建筑工程有限公司

　　二○－四年四月

　　目录

　　一、工程概况

　　二、模板设计依据

　　三、支撑材料选择

　　四、模板的配置

　　五、支撑方法及验算

　　六、保证支撑质量的技术措施

　　七、模板施工的安全技术

　　八、拆模的安全技术

　　九、砼成品保护

　　十、模板保护

　　十一、注意事项

　　模板工程施工方案

　　1.工程概况：

　　席家花园新建工程，位于扬州市江都区浦江南路地块。

扬州市鑫诚置业有限公司投资建设；扬州市方圆建筑工程有限公司承建；扬州市四维工程管理有限公司施工监理。

　　2.支模材料的选择

　　本工程采用以下支模材料：

　　九夹板：

梁模板采用18mm厚九夹板。

　　松木方料（60?

80）：

模板连接排挡（应按工地材料实际尺寸）。

钢管（?

48?

）：

围楞和搭支模架，扣件：

用于支模钢管架体的连接与紧固。

　　Φ10对拉螺栓：

用于用于构筑物壁板模板的固定。

碟形扣件：

用于构筑物壁板模板的固定

　　根据本工程的施工进度和周转要求配备二套模板及支架。

　　4.模板的配制

　　现浇顶板、楼板支模

　　现浇顶板、楼板采用18厚竹胶板，支模排挡采用60?

80方木档，间距不大于30cm；采用18厚胶合板支模时，方木排挡间距不大于40cm。

　　梁模板

　　1.梁模板底板采用18mm厚九夹板配制，四面刨光，厚度均匀。

　　边侧必须于平面成直角，使梁侧模板与梁底模板连接密封，确保梁底砼棱角完整；

　　2.梁侧板采用九夹板配制，配制方法同柱模；

　　3．梁模板排挡采用松木档，间距不得大于30cm，梁模板严格按梁断面尺寸进行配制；误差不得超过?

2mm；

　　4．侧模配制时，必须从梁的净跨之中计算，接点设置于梁跨中间，确保梁、柱细部尺寸完整，梁底板按规范要求大于4m跨度的应起拱，以/1000为标准。

　　5.支模方法及验算

　　梁、现浇平板支模

　　1）在梁底部、现浇平板搭设钢管支撑承重架。

搭设承重架应注意以下几点：

　　①钢管立杆下必须加木垫块，并支承于坚实的基面上；木垫板尺寸150×150×50mm；

　　②先搭设梁部立杆，后搭平板立杆；

　　③支模架高度小于5米时立杆设立纵向、横向间距均不得大于100厘米；支模架高度大于5米小于8m时，立杆设立纵向、横向间距均不得大于80厘米，扫地杆离地25厘米，水平横杆第一根离地米，上部间距不得大于米/道；根据实际情况扣件采用单或双扣件。

　　④承重支架下部须设扫地杆和剪刀撑，剪刀撑成45o－60o角设置，每轴设一道且间距不大于@6000×6000。

　　⑤紧固件均需备齐，所有紧固件必须扣紧，不得有松动，梁承重架横杆下须加双轧。

　　2）整个承重架完成后方可摆设梁搁栅和底模，复核轴线，标高尺寸无误后，先立一侧梁模，待梁钢筋绑完成校对无误后立另一侧模板校正尺寸（截面、轴线、标高及预埋件位置、尺寸等）无误后，再行固定，梁模固定后，方可铺设平板搁栅及底模板。

　　3）梁上口固定要牢固，梁底及上口要拉通长线。

梁跨≥4米时，应按施工规范要求进行起拱。

起拱高度宜为全跨长度的/1000。

　　4）所有梁、平板模板在支模前必须及时进行清理，刷脱模剂。

拼装时，接缝处缝隙用玻璃油灰填实及胶带纸贴合，避免漏浆。

　　5）梁模板支模完成后及时进行技术复核，误差控制在以下范围内：

轴线位移2，标高＋2，－3，截面尺寸＋2，－3，相邻两板表面高低差2，表面平整度2，预留洞中心线位移5，截面内部尺寸＋10。

　　6）梁高超过800mm时，应设Φ12对拉螺栓，间距500mm。

　　柱支模

　　以放好的柱轴线、边线为依据，立好四周定型木模，外加60×80通长方木骨档。

每侧不少于三根且骨档间距不大于300mm。

柱箍采用短钢管加扣件固定间距不大于500mm。

为确保不炸模，同时柱箍与支模架交接处可采用双扣件加固，对较大截面的柱，应采用Φ12对拉螺杆进行加固。

较正垂直度时，应根据边线垂直两个方向进行校正。

　　篇三：

实验设计方案模板1

　　生物工程系

　　实验设计方案