基因工程思考题答案.docx
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基因工程思考题答案
基因工程思考题答案
篇一：
基因工程习题及答案】
选题
1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（b）
a．i类限制酶b.ii类限制酶c.iii类限制酶d.核酸内切酶e.rnaase
2.下列关于同裂酶的叙述错误的是（b）
a.是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。
b.它们的识别序列完全相同。
c.它们的切割方式可以相同，也可以不同。
d.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。
e.两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
3.多数限制酶消化dna的最佳温度是（a）
a.37Cb.30Cc.25Cd.16Ce.33C
4.下列关于限制酶的叙述错误的是（b）
a.i类限制酶反应需要mg2+、atp和s-腺苷蛋氨酸。
b.ii类限制酶反应需要mg2+、atp。
c.iii类限制酶反应需要mg2+、atp，s-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。
d.i、iii类限制酶对dna有切割和甲基化活性，ii类限制酶对dna只有切割活性而无甲基化活性。
e.ii类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。
5.如果一个限制酶识别长度为6bp,则其在dna上识别6bp的切割概率为（d）
a.1/44b.1/66c.1/64d.1/46e.1/106
6.多数ii类限制酶反应最适ph是（c）
a.ph:
2-4b.ph:
4-6c.ph:
6-8d.ph:
8-10e.ph:
4-10
7.下列关于限制酶反应的说法错误的是（d）
a.限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。
b.许多限制酶对线性dna和超螺旋dna底物的切割活性是有明显差异的。
c.有些限制酶对同一dna底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
d.限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
e.bsa对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的bsa。
8.ii类限制酶反应中必须的阳离子是（c）
a.na+b.ca2+c.mg2+d.zn2+e.mn2+
9.rflp形成的原因是（a）
a.由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。
b.使用不同的限制性内切酶进行切割。
c.杂交时使用不同的探针。
d.每种染色体存在两条。
e.提取不同的染色体dna酶切。
10.下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（e）
a.sau.3aib.b.amhic.pstid.ecorie.hindiii
11.需进行dna部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（d）
a.反应时间b.反应体积c.phd.限制酶量e.反应温度
12.下列酶在反应中不需要atp的是（d）
a.ecokb.t4dna连接酶c.bamhid.ecobe.dnapoli
13.限制性内切酶可特异性识别（b）
a.双链dna的特定碱基对b.双链dna的特定碱基序列
c.单链rna的特定碱基序列d.单链dna的特定碱基序列
e双链rna的特定碱基对
14.下列与rflp相关的一条是（d）
a.不同限制酶在单个染色体dna上的限制性图谱。
b.两种物种个体间的限制性图谱。
c.同一个体等位基因的限制性图谱。
d.同一物种不同个体的限制性图谱。
e.非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。
15．限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（a）
a.识别和切割序列发生变化。
b.切割活性大大提高。
c.识别和切割
序列与原来完全不同。
d.
可以任意切割dna。
e.只能部分切割dna。
二、多选题
1.下列因素中影响限制酶切割的有（a,b,c,d,e）
a.edta浓度b.甘油浓度c.dna纯度d.酶的自身活性e.盐浓度
2.限制酶反应中出现星活性的可能原因是（abde）
a．酶浓度太高b低盐c盐浓度过高d高phe甘油浓度5%（v/v）
3．限制酶切割后的dna电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（b，c，d，e）
a．酶失活b有蛋白质与dna结合c酶切条件不合适
d有外切核酸酶污染e星号活性
4．下列有关回文序列的描述正确的是（a，b，c）
a.是ii类限制酶的识别序列b是某些蛋白的识别序列c是基因的旁侧序列d是高度重复序列e是卫星序列
5．下列有关回文序列的一般特征正确的是（b，c，d，e）a．可增强基因表达b有对称轴c是自我互补的序列
d.两条链从5‘防向的序列一致e是ii类限制酶的识别序列
6．关于ii类限制酶说法正确的是（b，d）
a.具内切核酸酶和甲基化酶活性
b.仅有内切核酸酶活性
c.只识别非甲基化的dna序列
d.ii类限制酶反应条件只需要mg2+
e.ii类限制酶反应需要mg2+,atp
7.通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（b，
c）
a.限制酶只切割两个变异等位基因中的一个
b.限制酶位点可作为遗传标记
c.它不依赖变异的等位基因的产物的功能
d.不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异
e.同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同
8.下列关于ii类限制酶的叙述正确的是（b，c，d，e）
a.它既有内切酶的活性，也有外切酶活性
b.在特异位点对dna进行切割
c.同一限制酶切割双链dna时产生相同的末端序列
d.有些限制酶切割双链dna产生粘末端
e.有些限制酶切割双链dna产生平末端
9.限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（a，b，c，
d，e）
a.限制酶无活性b存在抑制剂如sds，edtacdna不纯
d．缓冲液组成不合适edna甲基化
10．下列关于限制酶的叙述正确的是（b，c，d）
a．在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。
b．限制酶在dna中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。
c．如果限制酶的识别位点位于dna分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。
d．已知某限制酶在一环状dna上有3个切点，因此该酶切割这一环状dna，可得到3个片段。
e．能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。
11．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（a，b，c，e）a．储存温度不合适b稀释后储存c储存缓冲液不合适d．分装后储存e储存缓冲液中蛋白浓度低
12．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（a，b，c，d，e）
a．限制酶失活b有抑制剂如sds，edta等存在c反应条件不合适
ddna不纯edna结构（线形或超螺旋）的影响
13．如果用限制酶切割dna后得到的片段比预期的多，可能原因是（b，c，e）
a．限制酶失活b限制酶的星号活性c有其他限制酶污染
d有抑制剂存在e测试dna中有其他dna污染
14．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（a，b，c，e）
a．限制酶去除不完全b平端连接c核酸外切酶污染
d.连接反应温度低于16C
e．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类
15．
下列限制酶属同裂酶的是（a，b，d，e）
a．bamhigJ
gatccsau3aiJ
gatc
cctag
fgctag
f
b．
salig
Jtcgacxhoic
Jtcgag
cagct
Jggagct
Jc
c．
bamhig
Jgatccecorig
Jaattc
cctag
Jgcttaa
Jg
d.hpa
iigJcgcmspicJcgg
cgcJgggcJc
e.xbaitJctaganheigJctagc
agateJtcgatcJg
三．填空题
1．限制酶是一类专门切割dna的酶，它能特异性识别切割双链（单、双）dna。
2．ii型限制酶识别位点一般长度为4~6个核苷酸对。
3．个体之间dna限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（rflp）。
4．限制酶命名采用smith和athens提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的属名；第二、三个字母取自来源细菌的种名；第四个字母（如果有）取自来源菌的株系。
5．需要部分酶切时可采取的方法有
（1）减少酶的用量
（2）缩短反应时间（3）增大反应体积。
6．限制酶识别序列为n个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。
7．限制性内切酶通常保存在50%浓度的甘油溶液中。
8．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在5%以下。
9．限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源dna的限制和对自身dna的修饰来实现的。
10．ii型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。
它作用时需要mg2+离子作辅助因子。
四．简答题
1．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（bsa）的目的与机理是什么？
答：
目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。
2．如果用ecori酶切dna时出现星活性，试分析原因？
答：
主要原因有：
酶浓度太高；高ph；低盐；含mn2+、cu2+等非mg2+金属离子；甘油浓度高于5%；存在某些有机溶剂。
3．下列序列中哪些可能是ii类限制酶的识别序列？
atatcgcccggggatatcagccgagagtc
答：
cccggggatatcgagtc
4．用klenow酶可将5‘粘末端填补成平末端，而导致某些限制位点消失，下列酶切后用klenow处理再连接不会丢失识别位点的是哪些？
xmaicJccgggbsshiigJcgcgcpstictgcaJg
hhaigcgJchpaiigJcgc
答：
bsshii,hpaii
【篇二：
基因工程原理练习题及其答案】
xt>一、填空题
1．基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
*2．基因工程的两个基本特点是：
（1），
（2）。
3．基因克隆中三个基本要点是：
；和
。
*4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的。
*5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自，第二、三两个字母取自，第四
个字母则用表示。
*6．部分酶切可采取的措施有：
（1）
（2）（3）等。
7．第一个分离的限制性内切核酸酶是；而第一个用于
构建重组体的限制性内切核酸酶是。
8.限制性内切核酸酶bsuri和hae山的来源不同，但识别的序列都
是，它们属于。
*9.dna聚合酶i的klenow大片段是用切割dna
聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性：
（1）；
（2）的活性。
*10.为了防
止dna的自身环化，可用去双链
dna。
*11.egta是离子螯合
剂。
12.测序酶是修饰了的t7dna聚合酶，它只有酶
的活性，而没有酶的活性。
*13.切口移位（nicktranslation）法标记dna的基本原理在于利用的和的作用。
14.欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用或。
*15.反转录酶除了催化dna的合成外，还具有的作
用，可以将dna-rna杂种双链中的水解掉。
*16.基因工程中有3种主要类型的载体：
、
*17．就克隆一个基因（dna片段）来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：
、、
。
另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
18．一个带有质粒的细菌在有eb的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫
19．pbr322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因
来自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。
20．yac的最大容载能力是bac载体的最大容载能力
*21．pscl01是一种复制的质粒。
puc系列的载体是通
*22．pucl8质粒是目前使用较为广泛的载体。
过和，amp抗性基因则是来自
23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：
一是；二是
24．野生型的m13不适合用作基因工程载体，主要原因是
*25.黏粒（cosmid）是质粒一噬菌体杂合载体，它的复制子来自
cos位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。
26．野生型的?
噬菌体dna不宜作为基因工程载体，原因是：
27．噬菌粒是由质粒和噬菌体dna共同构成的，其中来自质粒的主要结构
是，而来自噬菌体的主要结构是。
*28．?
噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源dna片段后，总
的长度应在噬菌体基因组的的范围内。
29．在分离dna时要使用金属离子螯合剂，如edta和柠檬酸钠等，其目的是30．用乙醇沉淀dna时，通常要在dna溶液中加人单价的阳离子，如nacl和naac，其目的是。
31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：
。
*32．clark发现用taqdna聚合酶得到的pcr反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链dna分子。
根据这一发现设计了克隆pcr产物的*33．在cdna的合成中要用到s1核酸酶，其作用是切除在34．乙醇沉淀dna的原理是。
*35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：
（1）
（2）
（3）
*36．受体细胞的感受态是
*37．dna重组连接的方法大致分为四种：
（1）
（2）
（3）（4）
。
38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个
，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个
39．将含有一个mrna的dna拷贝的克隆称作一个
源于同一批rna制备物的克隆群则构建了一个
*40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用可以将这段dna进行百万倍的扩增。
*41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为时吸附dna,
时摄人
dna。
*42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为：
（1）
（2）（3）
（4）等。
43．pcr扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于。
44．核酸杂交探针可分为两大类：
dna探针和rna探针。
其中dna探针又分为探针和探针。
45．如果用限制性内切核酸酶切割双链dna产生5'突出的黏性末端，则可以用
进行3'末端标记。
如果用限制性内切核酸酶切割dna产生的是3'突出的黏性末端，可以用进行3'末端标记。
46．单链dna探针的标记可以采用下列方法：
（1）
47．根据northern杂交的结果可以说明：
48．差示杂交（differentialhybridization）技术需要
49．rna分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜（尼龙膜）上，同一放射dna探针杂交的技术称
*50．在技术中，dna限制性片段经凝胶电泳分
离后，被转移到硝酸纤维
素膜（或尼龙膜）上，然后与放射性的dna探针杂交。
51．可用t4dna聚合酶进行平末端的dna标记，因为这种酶具有和
的活性。
52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：
（1）
（2）（3）。
*53．northern印迹和southern印迹有两点根本的区别：
（1）
（2）54．放射免疫筛选的原理基于以下三点：
（1）
（2）（3）答案
1．70
2．
（1）分子水平上的操作；
（2）细胞水平上的表达
3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择4．限制性酶切图谱
5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名
6．
（1）减少酶量；
（2）缩短反应时间；（3）增大反应体积
7．ecok；ecorl
8．ggcc；异源同工酶
9．枯草杆菌蛋白酶；
（1）5-3合成酶的活性；
（2）3-5外切核酸酶
10．碱性磷酸酶；5'端的磷酸基团
11．ca2+
12．5-3合成；3-5外切
13.dna聚合酶i:
5一3外切核酸酶；5一3合成酶
14．s1核酸酶切割；dna聚合酶补平
15.核酸水解酶h；rna
16.质粒dna;病毒dna;质粒和病毒dna杂合体
17.复制区:
含有复制起点；选择标记:
主要是抗性基因；克隆位点:
便于外源dna的插入
18.质粒消除（或治愈）
19，pmbl；pscl01；psf2124（r质粒）
20.1000kb；300kb
21.严紧
22.pbr322和m13；pmbl；转座子
23.它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源dna的扩增；对某些噬菌体（如?
噬菌）的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽
24.没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记
25.质粒；?
噬菌体；45
26.
（1）分子量大，
（2）酶的多切点，（3）无选择标记
27.复制区；ig区
28.75%〜105%
29．螯合mg2+离子，抑制核酸酶的活性
30．中和dna分子的负电荷，增加dna分子间的凝聚力
31．
（1）合成探针；
（2）合成cdna；（3）用于pcr反应；（4）进行序列分析
32．t—载体
33．第二链合成时形成的发夹环?
34．乙醇使dna分子脱水
35．
（1）保持正确的可读框
（2）能够使其转录的启动子（3）具有翻译的起始和终止信号
36．接受外源dna的生理状态
37．
（1）黏性末端连接；
（2）平末端连接；（3）同聚物接尾连接；（4）接头连接法
38．基因组dna克隆；基因组dna文库
39．cdna克隆；cdna文库
40．聚合酶链式反应（pcr）
41．0?
c；42?
c
42．
（1）遗传学方法；
（2）物理筛选法；（3）核酸杂交法；（4）表达产物分析法
43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选
44．基因组dna；cdna
45．klenow酶填补的方法；t4dna聚合酶
46．
（1）用m13噬菌体载体合成单链dna探针；
（2）从mrna反转录合成单链cdna探针；
（3）用不对称pcr合成单链dna探针
47．外源基因是否进行了转录
48．两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在
另一个细胞群体中不能表达这些基因
49．northern印迹
50．southern印迹
51．5'?
3合'成酶；3'?
5外'切核酸酶
52．
（1）克隆的是完整的基因；
（2）使用的是表达载体；（3）不含内含子
53．
（1）印迹的对象不同：
northern是rna，southern是dna；
（2）电泳条件不同，前者是变
性条件，后者是非变性条件
54．
（1）抗体能够被吸附到固体支持物上；
（2）同一个抗原可以同几种抗体结合；（3）抗体能够
被标记
二、选择题（单选或多选）
1．因研究重组dna技术而获得诺贝尔奖的科学家是（）
（a）a．kornberg（b）w．gilbert（c）p．berg（d）b．mcclintock*2．第一个作为重组dna载体的质粒是（）
（a）pbr322（b）colel（c）pscl01（d）pucl8
*3．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太
恰当。
（a）由作用于同一dna序列的两种酶构成
（b）这一系统中的核酸酶都是H类限制性内切核酸酶
（c）这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对dna进行修饰
（d）不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
*4.□型限制性内切核酸酶：
（）
（a）有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
（b）仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
（c）限制性识别非甲基化的核苷酸序列（d）有外切核酸酶和甲基化酶活性
（e）仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供*5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?
（）
（a）限制酶是外切酶而不是内切酶
（b）限制酶在特异序列（识别位点）对dna进行切割
（c）同一种限制酶切割dna时留下的末端序列总是相同的
（d）一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链dna，产生黏末
端
（e）一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链dna，产生平末端
6.第一个被分离的□类酶是：
（）
（a）ecok（b）hind山（c）hindII（d）ecob
*7.在下列进行dna部分酶切的条件中，控制那一项最好?
（）
（a）反应时间（b）酶量（c）反应体积（d）酶反应的温度
*8.在下列试剂中，那一种可以螯合ca2+离子?
（）
（a）edta（b）柠檬酸钠（c）sds（d）egta
*9.在下列工具酶中，那一种可以被egta抑制活性?
（）
（a）s1单链核酸酶（b）末端转移酶（c）碱性磷酸酶（d）bal31核酸酶*10.限制性内切核酸酶可以特异性地识别：
（）
（a）双链dna的特定碱基对
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