桃胶药理学作用地实验的研究Word文档下载推荐.docx
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当方差齐时组间比较采用单因素方差分析
(ONE.WAYANOVA),当方差不齐时用近似F检验的Welch法,并以最小显
著差异法(LSD法)或Dunnett’T3法进行各组间的两两比较。
以Q=0.05为检验水准。
结果
1.造模后大鼠的情况
1.1造模后大鼠的一般情况
币常大鼠精神状况良好,饮食、饮水及大小便正常,活动正常,反应灵敏,
背毛平伏、浓密而有光泽,体重增长明显。
造模组大鼠在实验期间均出现明显
得多饮、多食、多尿症状,且尿中出现白色絮状样油脂,精神较为萎靡,活动
稍少,体毛偏黄,少光泽。
整个实验期造模鼠仅出现一例死亡。
1.2造模后大鼠的体重变化情况
造模后各组大鼠的体重,经Levene检验方差齐性(F=0.820,P=O.370),采
用独立样本t检验(IndependentSamples
TTest)有显著性差异
(t=-4.536,卢0.000),说明经高能量饲料联合四氧嘧啶造模后,大鼠体重较
前显著增加。
1.3造模后大鼠的空腹血糖情况
造模后大鼠的空腹血糖,经Levene检验方差不齐(F=47.048,P=O.000),采
用Satterthwaite近似t检验有显著性差异(t=.15.525,P--O.000),说明大鼠造模
后空腹血糖较前显著升高。
1.4造模后大鼠的血脂水平
造模后各组HDL.C无显著性差异(t_O.714,P=O.479),LDL.C有显著性差异
(t一10.717,P=0.ooo),TG有显著性差异(t..8.005,P=O.ooo),TC有显著性差异
(t_.5.519,P=0.ooo),表明造模后的糖尿病大鼠伴有血脂水平的升高。
2.桃胶的药理学作用
2.1桃胶治疗后大鼠的一般情况
桃胶治疗后,低剂量组变化不明显;
中、高剂量组糖尿病大鼠多饮、多食、
多尿症状改善,体重虽较前仍有增长,但与模型组比较,体重增长相对较缓;
体毛色泽较前改善,精神较前好转,活动较多,反应较为灵敏。
中文摘要
2.2桃胶对DM模型大鼠体重的影响
治疗后各组间大鼠体重比较均有显著差异(F=7.403,P---0.000),需进一步
进行两两比较。
予以桃胶治疗后,各剂量组大鼠的体重与正常组比较,虽仍有
不同程度的增加(P以05),但与模型组比较有显著性差异(尸m05),表明
桃胶有控制体重增长的作用。
2.3桃胶对DM模型大鼠空腹血糖的影响
治疗后各组间空腹血糖比较有显著性差异(F=35.938,P=-0.000),需进一
步进行组问的两两比较。
给药后中、高剂量组空腹血糖与正常组比较,无显著
性差异(P>
0.05),而模型组和低剂量组空腹血糖显著高于讵常组(P<
0.01)。
中、高剂量组空腹血糖显著低于模型组(P<
0.01),低剂量组血糖与模型组无
显著差别(P>
0.05),高剂量组空腹血糖显著低于低剂量组(P<
0.05)。
2.4桃胶对DM模型大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响
各组大鼠胸腺指数(thymusindex)和脾脏指数(spleenindex),经方差分析
后表明有显著性差异(F=4.314,P=-0.005;
F=8.354,P=-0.000)),需进一步进
行两两比较(采用LSD法)。
在胸腺指数和脾脏指数方面,模型组与正常组比
较均有显著差异(P<
0.05),与低剂量组比较均无显著差异(尸>
0.05),与中、
高剂量组比较均有显著差异(P<
0.05);
低、高剂量组之l、HJ比较均有显著差异
(尸<
表明桃胶能增加免疫器官重量,调节免疫功能。
2.5桃胶对糖化血红蛋白、胰岛素、C肽、胰岛素敏感指数的影H向
各组胰岛素(F=31.861,P=0.000)、C肽(F=17.831,P=0.000)、胰岛素敏感指
数(F=97.432,P=0.000),糖化血红蛋I兰t(F=27.221,P=0.000)均有显著性差异,需进
一步进行两两比较。
模型组胰岛素、C肽和糖化血红蛋I兰i(GHbAlc)水平显著高
于正常组(氏O.01),胰岛素敏感指数显著低于J下常组(尸<
治疗后,高剂
量组胰岛素、C肽和血红蛋白与模型组相比显著改善(尸<
O.05),低、中剂量组
间与中、高剂量组之间上述几个指标无显著差别(尸>
0.05),而高剂量组上述几
个指标较低剂量组有显著性差异(尸<
O.05)。
IV
硕士学位论文
2.6桃胶对DM模型大鼠血脂的影响
各组问HDL.C无显著性差异(尸>
模型组LDL.C、TG和TC显著
高于正常组(P<
O.01),中、高剂量组LDL.C、TG和TC显著低于模型组(尸
<
0.01或尸<
0.05),低剂量组LDL.C、TG和TC与模型组无显著差别(尸>
0.05),
中、高剂量组血脂与正常组接近。
由表中可知,低、中、高剂量组之间可见一
定的量效关系趋势,但无统计学意义(尸>
2.7对DM模型大鼠肝脏、肾脏和胰腺的影响
对肝脏的影响:
肉眼观察,『F常组大鼠肝脏外形正常,暗红色,被膜光滑、湿润。
模型组和桃胶低剂量组大鼠的肝脏体积明显增大,包膜紧张,边缘钝圆,质地变
软,有油腻感,表面无光泽,呈奶油黄色;
桃胶中、高剂量组大鼠的肝体积、质地、
色泽均较模型组有明显改善。
200×
光镜下,正常组大鼠肝组织结构完整、清晰,
肝小叶结构『F常,肝细胞无脂肪变性等异常改变;
模型组及给药各组大鼠均有不
同程度的肝细胞脂肪变性,以模型组最重,低、中、高剂量次之,其表现为肝小
叶界限不清,肝细胞索排列紊乱,大部分肝窦消失,多数肝细胞出现严重的脂肪
变性,以小叶中央静脉周围最为严重,肝细胞极度肿胀呈圆形,胞浆内可见大小
不等,数量不一的脂滴空泡(脂肪变性),严重者脂滴相互融合,将细胞核挤向细
胞一侧,酷似脂肪细胞。
对肾脏的影响:
肉眼观察下,J下常组大鼠的肾脏体积轻度肿大,包膜紧张,混浊
无光泽,呈浊红色。
镜下观察,正常组。
肾小球和肾小管大小、形态均正常,排列
规则。
与正常组相比,模型组和低剂量组大鼠肾小球体积明显增大,系膜基质增
多,基底膜增厚;
近曲小管上皮肿胀,有的小管腔内可见透明管型,远曲小管上
皮胞浆空宽,显示气球样变性。
肾小管、间质内炎症细胞浸润增多,且有糖原沉
积;
与模型组比较,中、高剂量组系膜基质增多、基底膜增厚情况减轻,。
Iqd,管、
问质内炎症细胞浸润减少,无糖原沉积。
对胰脏的影响:
200倍光镜下,正常组大鼠的胰岛呈椭圆形的细胞团,境界清楚,
胰岛数及岛内细胞数较多,各分泌细胞大小一致,胞质丰富,核染色质清晰;
模
V
型组大鼠的胰岛明显萎缩,轮廓欠圆润,胰岛内形态欠规则,细胞数目少,且排
列紊乱,肿胀变形,空泡明显,部分细胞缺失、塌陷;
低剂量组大鼠的胰岛体积
偏小,形态较规则,胰岛内细胞稀疏,大小不一,排列不均,部分细胞出现核固
缩;
中、高剂量组胰岛数及岛内细胞数明显增多,细胞分布均匀,核大小基本相
等,无核固缩现象。
研究结论
1.验证了利用高能量饲料联合4,N量四氧嘧啶可模拟出近似于人类2型糖尿病
的模型。
2.桃胶能改善糖尿病大鼠的一般状况,控制体重;
增加免疫器官重量,提高免
疫器官指数,改善免疫功能;
能改善胰岛素抵抗,控制空腹血糖。
3.桃胶能改善体内血脂代谢紊乱,降低糖尿病大鼠LDL—C、TG、TC水平,从
而减轻脂毒性对机体的损伤。
4.桃胶能在一定程度上减轻肝。
肾胰组织的损伤,有利于控制糖尿病及其并发症
的发生发展。
关键词:
桃胶糖尿病血糖血脂形态学
随着我国经济的发展、人民生活水平的提高及膳食结构和生活方式的变化,
疾病谱发生了很大变化。
生活方式病(糖尿病、心血管病、肥胖、肠癌、便秘
等)发病率呈逐年升高的趋势。
其中糖尿病(Diabetesmellitus,DM)的发病率
不断升高,在我国,1978年以前糖尿病的平均发病率低于1%,最近5年的糖尿病
发病率以每年11%的惊人速度增长。
退休职工健康体检分析报告显示:
45%参检
人群存在空腹血糖增高现象,说明糖尿病以及糖耐量异常人数不断增加。
我国
是全球糖尿病患病率增长最快的国家之一,我国糖尿病患者人数仅次于印度,
居世界第二位。
预计1112025年,世界糖尿病患者将增至3亿以上。
糖尿病的并发症多且较为严重【l巧】,其中肥胖和高血脂往往是糖尿病的危险
因素之一。
调查显示20岁以上糖尿病患者,80%为肥胖患者,肥胖人群糖尿病患
病率比普通人群高4倍【6】o我国也是高脂血症,高血压病,肥胖病等生活方式病
患病率增长最快的国家之一,肥胖人数约2亿,儿章的肥胖率已达8.1%,与20年前
相比成人超重率上升了39%,肥胖率上升了97%。
据《中国居民营养与健康状况》
显示,高脂血症的发病率逐渐增高,成人血脂异常患病率为18.6%,血脂异常人
数约1.6亿人、血脂异常患病人群逐渐年轻化。
积极控制血糖、血脂异常和肥胖
成为预防心脑血管疾病、降低死亡率的重要手段。
桃胶是桃树(蔷薇科植物)的树干受机械损伤(如虫咬、切伤等)或致病后分泌
出来的胶质半透明物质【7】。
我国桃胶资源较为丰富,分布广泛,广东、河北,江
西,江苏,浙江,安徽,云南,四川,贵州等省均为产地。
桃胶产量较大,且
价格便宜,约为2500元/吨。
其多糖含量高达90%以上,是一种不可多得的纯度
较高、临床证实有效的多糖类中药资源。
我国古代文献,如《草药验方交流集》、
《名医别录》、《古今录验方》、《唐本草》、《本草纲目》和《千会方》等对桃胶
的药理作用均有记载。
原桃胶味苦,性平,益气、和血、止渴、活血消肿、通
淋止痛【8】。
古代已经记载桃胶具有治疗消渴的作用,且具有药食兼备的特点。
前言
目前,桃胶主要应用于食品和工业领域,如饮料、香精、果汁、啤酒、糕
点、面包、乳制品、巧克力、泡泡糖等产品,是天然的增稠剂、悬浮剂、胶粘
剂、成膜剂、上光剂、稳定剂,被视为国产“阿拉伯胶”。
在工业中,桃胶粉可
用于轻工业包装、印刷护版、彩色铅笔芯、微粉、陶瓷贴花、焰火、美术颜料、
墨汁稳定剂、粉术冶金、磁性材料及化妆品等产品中。
桃胶的临床应用主要见于古代文献,在医学领域的药理学研究以及应用研
究较少。
早在1962年广州放射学会议上,中山医学院曾介绍了桃胶钡剂混悬液
作胃肠道检查的方法,认为同阿拉伯胶的效果不相上下。
之后有关专利报道,
桃胶有增强免疫功能和提高血象的作用。
经药理、毒性试验和临床研究,桃胶
液对所有T细胞都有升高作用,T3、T4亚群尤为明显;
提高血象,以升高白细胞
尤为显著;
并能保护造血功能,减轻化疗、放疗的毒副作用【9】。
另据文献报道,
中药桃胶溶液能使II度烧伤创面迅速结痂成膜,渗出液明显减少,疼痛明显减轻,
且无过敏反应和其他不良反应,创周炎性反应发生程度低于对照组,细菌学调
查结果表明抗菌结果也要优于对照组【l01。
至于桃胶在保健品中的应用办未见报
道。
利用桃胶生产桃胶多糖,可以大大提高桃胶的药用价值,增加桃胶的经济
附加值,使得桃胶资源得以充分的利用,有利于提高农民收入,有益于调整农
业产业结构,为农业发展提供技术支持。
由于桃树产胶会导致桃果的减产,因而国外严格禁止桃树产胶,关于原桃
胶利用与加工方面的研究报道也少见,仅日本有利用原桃胶用作天然食品添加
剂的规定。
从1996年起,日本一直将桃胶视为天然食品添加剂(2009年食品添
加物。
梭合影窖c:
阴寸为调查辗告耆)使用。
如日本公丌特许专利
10.150930(1998)报道:
原桃胶可用作甜味食品和片剂的涂料。
我国多个版本的药
典也规定桃胶可以用作中药材。
我国原桃胶有药用历史传统,且已经开展了许多在食品等领域应用的研究。
如:
有些厂家将商品桃胶用于制造糕点、面包、乳制品、巧克力、泡泡糖、香
料等;
中医利用原桃胶防治血淋、石淋、痢疾、腹泻、疼痛等症;
现代医学则
利用原桃胶治疗糖尿病、泌尿系统结石等疾病,还用作癌症的辅助治疗或药材
配料。
本课题组多年来一直从事多糖的研究,特别是对多糖的分离、提纯等,已
取得阶段性成果【11。
31。
关于桃胶的理化特性研究结果表明:
桃胶主要成分是多糖,
其多糖含量高达90%以上,其他物质含量极少,其多糖主要由半乳糖、鼠李糖、
阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等成分组成,在目前已知所有植物中,桃胶中多糖含量
最高,是一种不可多得的纯度较高的中药资源。
据古代医籍及近代某些老中医
经验,均表明桃胶有治疗糖尿病的作用。
基于上述,本课题组对桃胶进行了前
期初步研究,证实桃胶对糖尿病小鼠有一定的降血糖作用。
根据其成分组成,
可明确其降糖作用主要与多糖相关,但是不同的多糖,其单糖组成不尽一致,
其降糖机制是否与其他多糖一致,尚不明确。
本课题将通过模拟糖尿病模型,
进一步探讨桃胶多糖的降糖机制,为降糖新药的丌发提供研究方向,并为桃胶
多糖丌发成食品新资源和保健品提供依据,从而起到充分利用我国丰富的桃胶
资源,带动农林经济发展的作用。
第一章多糖的药理学研究概况
第一章多糖的药理学研究概况
天然多糖广泛存在于植物、动物和微生物组织中,约有300多种。
人们对多
糖生物活性的研究,可以追溯到1936年Shear对多糖抗肿瘤活性的发现¨
们。
其
作为药物始于1943年,随着化学和生物学的快速发展和分离技术的提高,多糖
的生物学功能得到了广泛研究和应用。
近10多年来,关于多糖的药理学研究也
越来越多。
现对多糖的研究进行如下综述:
1.多糖来源及分类
近年来,研究表明多糖具有广泛的牛物活性而且作为药物具有低毒高效的
优点,因此多糖的研究已经成为当今学术界的一大热点。
按其来源可分为:
①
植物多糖:
人参多糖、党参多糖、枸杞多糖等;
②动物多糖:
甲壳素、肝素和
硫酸软骨素等;
③真菌多糖:
灵芝多糖、香菇多糖、透明质酸和羊肚菌多糖等;
④海洋生物类多糖:
红藻多糖、褐藻多糖、牡蛎多糖、海参多糖等。
目前,在2
型糖尿病的防治中,研究较多的是植物多糖和真菌多糖的降糖作用。
2多糖的生物学活性
2.1免疫调节作用
现代医学、细胞生物学及分子生物学的发展使人们认识到免疫系统的紊乱
不仅会产生多种疾病,而且与人体衰老及老年人发病有关。
多糖可以通过多条途
径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。
大量实验研究表明,多糖不仅能活巨噬细胞(M)、T淋巴细胞、B淋巴细胞、
自然杀伤细胞(NK)、细胞毒T细胞(CTL)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)等免疫
细胞,还能促进细胞因子生成,活化补体,从而对免疫系统发挥多方面的调节
作用。
胡庭俊等¨
51应用反向离子对高效液相色谱法测定银耳多糖(TPS)对小鼠脾
脏淋巴细胞蛋白激酶c(PKC)的活性的影响,结果表明TPS作为外源性信号分子,
4
与脾淋巴细胞表面特异性受体结合,活化细胞膜PKC,并引起级联反应,使细胞
内一系列蛋白质级联磷酸化,最后将胞外信号传递到细胞核,活化核内转录因
子,引起基因表达,调节免疫细胞的功能。
2.2抗肿瘤作用
手术、放疗和化疗仍是目前治疗癌症的主要手段,但存在术后并发症、癌
细胞转移及放化疗对正常细胞的杀伤而引起机体免疫力下降等问题.多糖通过
增强机体的免疫力可以与手术、放疗及化疗药物配合使用,从而更有效地预防
和治疗癌症。
多糖通过活化巨噬细胞,活化淋巴细胞,促进细胞因子分泌,活化补体而提
高宿主抗肿瘤免疫功能,通过影响肿瘤细胞膜生化、抗自由基、诱导肿瘤细胞分
化与凋亡,影响肿瘤细胞超微结构而发挥直接的抗肿瘤作用。
多糖的分子结构、
给药剂量、给药途径、给药时间、联合运用等是影响多糖抗肿瘤作用的重要因
素n
6。
20
3。
机体内存在多种免疫监视机制发挥着抗肿瘤作用功能,而免疫活性细胞
致敏、激活和扩增有依赖于抗原提呈细胞(APC)提呈相应的抗原多肽以及共刺激
信号。
树突状细胞被认为是目前发现的功能最强的APC,它能摄取各类抗原,在机
体细胞免疫和体液免疫调控中均起着重要作用。
人们己从不同生物材料中得到多种具有抗肿瘤活性的多糖,如从香菇多糖
具有强的抗肿瘤活性,其抑制癌症和抗肿瘤效果不是直接作用于移植性癌细胞,
而是通过宿主调节而发生作用。
多糖类药物用于抗肿瘤可以克服化疗、放疗过
程中对正常细胞的损伤。
2.3抗病毒作用
研究发现,红藻中红藻多糖具有明显抑制牛免疫缺陷病毒BIV的生长的作用,
杜仲碱被认为含有多糖类,具有抗破坏人体免疫系统病毒的功能;
香菇多糖能促
进HIV感染者外周血单个核细胞分泌工L一1、IL一2和IFN—r,抑制IL一4、IL一10和
TNF—a分泌21’2引,均有望开发成抗AIDS药物。
另外,有研究认为香菇多糖和灵芝
多糖等对抗慢性肝炎有显著疗效,酿酒酵母葡聚糖能增强宿主对鼠肝炎病毒抵
抗力,使肝细胞坏死病变明显减轻,并使血清谷丙转氨酶恢复正常,对单纯疱
疹病毒和脑脊髓炎病毒有抵抗作用。
猪苓多糖能抑铝IJt]BV转基因小鼠HBsAg的表
达,从而抑制肝炎病毒心引。
在已经发现的抗病毒多糖中,活性最强的是硫酸化
多糖。
一般认为,硫酸多糖通过干扰病毒对宿主靶细胞的朱1i附、抑制抗原的表
达、抑制合胞体形成等途径抑制病毒瞳圳。
辛现良等瞳钔发现海洋硫酸多糖能抑制
病毒逆转录酶活性,干扰HIV一1与细胞吸附,有抑铝iJAIDS的作用。
黄精多糖具有
抗病毒作用,硫酸化后作用有了很大的提高。
2.4抗氧化作用
自由基被认为是机体衰老和某些慢性病发生的原因之一。
这是因为自由基
引发脂质过氧化产生脂质过氧化物,造成对细胞、酶类及核酸等生物大分子的
损害。
当机体内的自由基过多或消除过慢,就会攻击各种细胞、器官并使之受
到损伤,加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。
电离辐射也町激发体内产生自
由基,对机体造成广泛的损伤。
机体抗氧化防御系统对氧化的应激反应主要是
提高谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,从而起到
抗氧化作用。
关于多糖的抗氧化作用机制尚无定论,一种解释是-OH可以夺取多
糖碳氢链上的氢原子结合成水,而多糖碳原子上留下单电子可继续氧化形成过
氧自由基,后者可进一步分解;
另有研究认为是多糖环上的羟基可与产生-OH等
所必需的金属离子络合,从而抑制活性氧自由基的产生。
总之,多糖具有清除
自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化活性的能力,起到保护生物膜和
延缓衰老的作用。
钦传光等¨
刚采用化学发光法和分光光度法在多种化学模拟体系中研究了泥
鳅多糖清除活性氧的作用,结果表明泥鳅多糖能够有效地清除02-、一OH、H202
等活性氧,对DNA链具有良好的保护作用。
云芝多糖能够增强GSH—PX活性,促
进H202清除心71,能使辐射引起的迟发型超敏感性反应低下和SOD活力下降明显恢
复,过氧化水平降低,对受Y射线辐射的小鼠有明显的防护作用啪3。
小鼠服云芝
多糖lOmg/kg连续3~15天,不仅对正常小鼠有升高SOD活力和降{氐LPO水平的作
用,而且能有效减轻或防止因辐射所引起的SOD活力低下,同时使升高的LPO下
降啪1。
2.5抗衰老作用
中药多糖类成分的抗衰老作用与现代应用,主要涉及以下四个方面:
加强
DNA的复制与合成,提供必须的微量元素与营养来延长动物的生长期,提高动物
对非特异性刺激的抵抗能力以达到强壮作用;
调节蛋白质和核酸、糖和脂质代
谢:
抗脂质过氧化与抑制脂褐素作用;
提高机体SOD活力清除LPO和MDA,抑带tJMAOB
的作用,以达到抗衰老的作用。
州。
山茱萸多糖可有效清除羟自由基和超氧阴离子
自由基。
南沙参多糖能降低老龄小鼠肝、脑中脂褐素含量,显著抑制老龄小鼠血
清中丙二醛的生成,提高老龄小鼠红细胞中超氧化酶及全血中谷胱甘肽过氧化
物酶的活性,可使老龄小鼠肝、脑中B型单氨氧化酶的活性降低。
从荔枝中提炼
出中性的多糖具有强大的抗氧化活性,可以作为一个新的抗氧化剂来研究。
“1。
此
外,螺旋藻多糖,菠叶大黄多糖,紫菜多糖均有抗衰老活性。
2.6降JIlL糖作用
糖尿病己成为我国的多发病和常见病,其患病率高达3.O%,尤其是40岁以
上的中、老年人群中患病率更高,并具明显上升趋势协21。
开发安全、无毒副作
用、预防和治疗高血糖的天然药品和保健食品很有必要。
研究发现,源自茶叶、
南瓜、当归、人参、大麦、玉米等天然植物的多糖具有显著的降血糖效果。
我国和同本民间常用粗老茶治疗糖尿病。
已证实,茶