天然药物化学实验文档格式.docx

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生物碱

*1、碘化铋钾试剂

*2、硅钨酸试剂

*在试管进行，△在滤纸或硅胶CMC-Na薄层板上进行，下同。

糖鉴定

（1）α-萘酚一硫酸试剂检查还原糖。

①溶液I：

10％α-萘酚乙醇溶液。

溶液II：

硫酸。

取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。

（2）斐林试剂检查还原糖。

溶液I：

6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。

34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。

取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。

如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110%盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，（成盐去除杂质）再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。

或者直接用高效液相色谱看色谱图。

酚类鉴定试剂

（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质1％～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。

取1ml样品的乙醇溶液，加入试剂1滴～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。

作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或兰色斑点为阳性。

2．乙醇提取液

取中草药粗粉5g，加5~12倍量95%乙醇，在水浴上加热回流提取1小时，过滤，滤液留2ml作

（1）项试验，其余回收乙醇至无醇味，并浓缩成浸膏状，浸膏分为二部分，一部分加少量2%HCL振摇溶过滤。

分出酸液，作

（2）项式验，附于滤纸上的一部分再以少量乙醇溶解，溶液作（3）项试验；

另一部分浸膏以少量乙酸乙酯溶解，溶液置分液漏斗中加适量5%NaOH振摇，使酚性物质及有机酸等转入下层氢氧化钠水溶液中，剩下的乙酸乙酯为中性部分，用蒸馏水洗去碱性即可备用，将乙酸乙酯液2~3ml，在水浴上蒸干，以1~2ml乙醇溶解作（4）项试验。

（1）项试验

检查项目

酚类

鞣质

试剂名称

△1%FeCl3

结果

（2）项试验

生物碱

*3、苦味酸试剂

（3）项试验

黄酮

蒽醌

△1、1%AlCl3试剂

*2、盐酸镁粉反应

△1、10%KOH液

△2、0.5%Mg（Ac）2试剂

（4）项试验

香豆素与萜类内酯

*1、氨基安替比林—铁氰化钾呈色反应

3、石油醚提取液

取中草药粗粉1g，加10ml石油醚（沸程60~90℃），放置2~3小时，过滤，滤液置表面皿上任其挥发，残留物进行下列试验：

甾体或三萜类

挥发油和油酯

*1、醋酐－浓硫酸试验

石油醚提取液滴于滤纸片上，观察有无油斑并在加热后能否发挥

黄酮类鉴定试剂

（1）盐酸-镁粉试剂检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物。

取1ml样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红-紫色为阳性反应。

（3）三氯化铝试剂检查具有邻二酚羟基或3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基的黄酮类化合物。

1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。

喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应也可在滤纸上或试管中进行。

（3）醋酸镁试剂检查黄酮类，二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物。

1％醋酸镁甲醇溶液。

在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液，挥去醇后，点1滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。

显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌。

生物碱鉴定试剂

（1）改良碘化铋钾试剂

为生物碱通用显色剂。

0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸，加水40ml。

8g碘化钾溶于20ml水中。

溶液I和II等量混合，于棕色瓶中可以保存较长时间。

目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配制：

7.3g碘化铋钾、冰醋酸10ml加水60ml。

取1m1样品的稀酸溶液加1滴～2滴试剂，产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。

如作薄层色谱显色剂，取混合液1m1、醋酸2ml、水10ml混合即得。

喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应

（2）苦味酸试剂为生物碱通用沉淀试剂。

苦味酸1g溶于100ml水中。

取1ml样品中性溶液，加入试剂1滴～2滴，产生黄色晶形沉淀。

（3）硅钨酸试剂为生物碱通用沉淀试剂。

1g硅钨酸溶于20ml水中，加10％盐酸使成pH2左右。

取1ml样品的稀酸溶液，加入1滴～2滴试剂，产生白色至褐色沉淀为阳性反应。

四、药品试剂：

中药饮片每组每种8克

生物碱试剂

（1）碘化铋钾（Dragendorff）试剂：

出现桔红色或黄色沉淀。

（2）苦味酸（Hager）试剂，样品液需调至中性后加试剂，出现黄色晶形沉淀。

（3）硅钨酸（Bertrand）试剂：

出现淡黄色或灰白色沉淀，在薄层板上应时，加热后出现黑色斑点。

酚类、鞣质试剂

1%三氯化铁水或乙醇试剂

氨基酸、蛋白质试剂

茚三酮（Ninnydrin）试剂

糖、多糖和苷试剂

（1）α-萘酚试剂、Molish试剂

（2）菲林氏反应（Fehling试剂）：

溶液Ⅰ：

69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中。

溶液Ⅱ：

349克洒石酸钾钠及氢氧化钠100克，溶于1000毫升水中。

皂苷试剂

浓硫酸试剂

黄酮类试剂

盐酸——镁粉反应

醋酸镁反应

1%三氯化铝乙醇液

香豆素试剂

1%三氯化铁水溶液

Gibb氏反应：

4-氨基安替比林-铁氰化钾（Emerson）

4、玻璃仪器：

（每2人或3人一组，每组一套）

（1）试管10个，滴管2个，玻棒1支

（2）100ml圆底烧瓶一个，250ml圆底烧瓶一个，25cm球型或蛇型冷凝管一个，有机溶剂蒸馏回收装置1套，50ml烧杯3个，25ml具塞锥形瓶，

（3）有孔白瓷板1个

（4）滤纸，乳胶管、药勺

仪器：

（1）普通天平，

（2）分析天平，（4）电水浴锅

5、思考题

实验学时：

9学时

实验二芦丁的提取、分离及鉴定

一、目的要求

1．以芦丁为实例学习黄酮类成分的提取分离方法。

2．掌握用黄酮苷水解制取黄酮苷元的方法。

3．了解黄酮类化合物的一般性质。

槐米系豆科属植物槐树SopHorajaponica.L.的花蕾，历来作为止血药，治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻出血，并有清肝泻火，治疗肝热目赤，头痛眩晕的功能。

其主要化学成分为芸香苷（芦丁），含量高达12％～20％，芸香苷广泛存在于植物中，现已发现含有芸香苷的植物高达70种以上，尤以槐米和乔麦中含量最高。

药理实验证明芸香苷有调节毛细血管渗透作用，临床上用作毛细血管性止血药，常作为高血压症的辅助用药。

槐米中主要成分的物理性质

1．芸香苷（芦丁，rutin）：

，淡黄色针状结晶，mpl74℃～178℃，无水物为188℃～190℃。

溶解度：

冷水中1：

8000，热水中l：

200，冷乙醇中1：

300，热乙醇中1：

30，冷吡啶中1：

12，微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、石油醚等溶剂。

易溶于碱液，呈黄色，酸化后又析出，可溶于硫酸和盐酸，呈棕黄色，加水稀释又析出。

UV

：

259，299sh，359。

2．槲皮素（quercetin）：

，黄色结晶，mp313℃～314℃，无水物为316℃。

冷乙醇中1：

290，沸乙醇中1：

23，可溶于甲醇、乙酸乙酯、吡啶、丙酮等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。

UV

255，269sh，301sh，

370。

芸香苷（芦丁，rutin）

1．芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游离的芸香苷而析出。

并利用芸香苷对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

2．黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并可通过薄层色谱法和纸色谱法进行检识。

3．利用黄酮类化合物对紫外光有特定吸收的特征进行结构测定；

也可制备乙酰化物进行结构鉴定。

三、实验内容

1自槐花米中提取芦丁：

（1）．提取方法：

称取槐花米粗粉20g（压碎），加沸水300m1，加热煮沸30min，四层纱布趁热过滤，残渣同法再操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用蒸馏水洗涤芸香苷结晶，抽干，得粗制芸香苷，置空气中干燥后，称重。

（2）．重结晶方法：

取粗芦丁2g，加去离子水或蒸馏水400ml，加热煮沸，趁热抽滤，放置过夜析晶（或放冷析晶），抽滤，得精制芦丁。

记录：

粗芦丁得率多少？

精制芦丁得率多少？

熔点？

2.芦丁的水解：

取芦丁1g，加2%H2SO480ml，小火加热微沸回流30分钟至1小时。

开始加热10分钟为澄清溶液，逐渐析出黄色小针状结晶，即槲皮素，抽滤取结晶（保留滤液20毫升，以检查其中所含单糖），沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称量。

得粗制槲皮素，再用乙醇重结晶得精制槲皮素。

加50%乙醇（按1克90ml量）加热回流使槲皮素粗晶溶解，趁热抽滤，放置析晶，抽滤得精制品，在减压下110℃干燥可得槲皮素无水物。

测熔点，进行薄层层析鉴定。

取芸香苷水解后的滤液20m1，加饱和氢氧化钡溶液中和至中性（搅拌下进行），滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液浓缩至2ml～3ml或蒸于后，加2ml～3ml乙醇溶解，作为糖的供试液。

3.鉴定

呈色反应

取芸香苷及槲皮素精品约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。

（1）Molish反应取样品溶液1ml，加10O%α一萘酚溶液1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。

（2）盐酸一镁粉反应芸香苷与槲皮素溶液分别置于两试管中，加入金属镁粉少许，盐酸2滴～3滴，观察并记录颜色变化。

（3）醋酸镁纸片反应取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇溶液，然后各加1％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记录现象。

（4）利三氯化铝纸片反应在两张滤纸条上分别滴加芸香苷、槲皮素醇溶液后，各加1％三氯化铝乙醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记录现象。

（5）锆一柠檬酸反应取样品溶液2ml，加2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4滴，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变化。

色谱鉴定

（1）芸香苷和槲皮素的薄层色谱

样品自制芦丁、槲皮素

对照品芦丁、槲此素

展开剂

（1）正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5上层或4∶1∶1）；

（2）25%醋酸水溶液；

（3）85%醋酸水溶液

显色

（1）可见光下观察，再在紫外光下观察；

（2）经氨气熏后再观察；

（3）喷三氯化铝试剂后再观察

点样：

提取的槲皮素及芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。

展开剂：

正丁醇一醋酸一水（4：

l：

5）上层溶液。

展开方式：

预饱和后，上行展开。

显色：

喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯（365nm）下检视色斑的变化。

观察记录：

记录图谱及斑点颜色。

（2）芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱

层析材料：

聚酰胺薄膜。

点样：

提取的芸香苷与槲皮素的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。

乙醇-水（7∶3），水饱和的正丁醇一醋酸（10：

0.2）。

上行展开。

喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外灯光（365nm）下检视色斑的变化。

记录图谱及斑色颜色。

（3）糖的色谱鉴定

新华层析滤纸NO.2。

（三）中糖的供试液及葡萄糖、鼠李糖对照品溶液。

氨性硝酸银试液，喷洒后先用电吹风冷吹至于，再吹热风至出现斑点为止。

4、药品试剂

药品：

每组槐花米20克

主要仪器及试剂

仪器:

（1）烧杯（100ml,500ml）；

（2）圆底烧瓶（100ml,150ml）；

（3）冷凝管；

（4）抽滤瓶；

（5）循环水泵；

（6）紫外灯

试剂:

（1）0.4%硼砂水；

（2）石灰乳；

（3）乙醇，甲醇等；

（4）2%硫酸，盐酸；

（5）；

（6）1％三氯化铝乙醇液；

（7）正丁醇:

醋酸:

水（4:

1:

5或4:

1）；

（8）25%醋酸,85%醋酸；

（9）乙醇:

水（7:

3）；

（10）标准品:

芦丁,槲皮素,葡萄糖,鼠李糖，（11）PH广泛试纸（12）聚酰胺薄膜

5、思考题：

1、芦丁水解不完全时将产生什么结果？

2、芦丁和槲皮素用不同展开剂系统展开将出现什么结果？

为什么？

3、芦丁和槲皮素聚酰胺薄层出现什么结果？

主要产物得率？

层析示意