开展高血压化学发光免疫检测技术可行性分析0712DOC.docx
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开展高血压化学发光免疫检测技术可行性分析0712DOC
运用化学发光免疫检测技术开展“高血压项目”
检测的可行性分析
一、开展“高血压项目检测”在医疗机构检测中的重要性
放射免疫分析技术开展肾素活性—血管紧张素—醛固酮系统（RRAS）测定，临床意义介绍如下：
RAAS是人体血压、水和电解质平衡重要的调节系统，对维持人体内环境的稳定起着十分重要的作用。
肾素在生理和许多病理情况下，其数量和活性决定了整个体系的活性，测定肾素活性因此成为RAAS活性的标志。
实际工作中肾素活性的测定是通过测定血管紧张素I（AngI）的量和在 37℃ 条件下1hAI的增加量（即肾素原被肾素催化转化为AI的量）来计算肾素活性的。
肾素的主要生理功能是将血管紧张素原分解成AngI，AI在血管紧张素转移酶（ACE）作用下转变成AngⅡ，并可引起醛固酮（ALD）分泌,以此发挥对机体血压的调节作用。
ALD是肾素-血管紧张素系统的一个延伸部分，它也参与了高血压的发病过程。
原发性醛固酮增多症患者，肾上腺因肿瘤或增生等原因大量分泌ALD，肾素分泌受抑制。
临床上表现为高血压、低血钾。
血、尿中ALd水平升高。
肾素--血管紧张素--醛固酮系统（RAAS）是由一系列激素及相应的酶组成,通过对血容量和外周阻力的控制，调节人体血压、水和电解质平衡，来维持机体内环境恒定。
另外，它与一些肾脏疾病及与肾脏有关的一些疾病有密切的关系。
目前检测血浆中肾素活性（PRA）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和醛固酮（ALD）已成为原发性和继发性高血压分型诊断、治疗及研究的重要指标。
对一些有关肾脏疾病的诊断、治疗以及发病机理的探讨有着重要意义。
二、采用化学发光法检测“高血压项目”是医学检验技术的必然趋势
1.本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。
目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。
化学发光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。
其检测原理与放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。
2.临床实验数据对照案例：
2.1试验方案
试验目的：
通过博奥赛斯试剂盒对临床样本（金域提供）的对比试验，验证博奥赛斯试剂与金域现用试剂是否等效，从而验证博奥赛斯试剂和进口试剂的测值相关性。
试验项目：
博奥赛斯醛固酮（ALD）定量检测试剂盒（化学发光法）（以下简称博奥赛斯ALD）
博奥赛斯血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）定量检测试剂盒（化学发光法）（以下简称博奥赛斯PRA）
博奥赛斯血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）定量检测试剂盒（化学发光法）（以下简称博奥赛斯AngⅡ）
对照试剂：
贝克曼（BeckmanCoulter）ALD放射免疫试剂（以下简称BeckmanALD）
索林（DiaSorin）血浆肾素活性放射免疫试剂（以下简称DiaSorinPRA）
伯乐免疫测定质控品三水平（371,372,373）（以下简称伯乐质控品）
美国病理学家协会（CollegeofAmericanPathologists，CAP）尿样本室间质评（2012年）（以下简称CAP尿样室间质评）
试验样本：
金域当天新鲜检测样本，样本量应足够进行比对试验。
试验前去除严重溶血、脂血、黄疸和染菌的样本。
试验方法：
双盲法。
2.2试验结果与结论
2.2.1醛固酮（ALD）定量检测试剂盒（化学发光法）
2.2.1.1分析灵敏度、剂量反应曲线性
同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值
与标准偏差SD。
计算
-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。
表1ALD分析灵敏度、线性
S0发光值
校准品浓度（pg/mL）
发光值
参数
2975594
3229144
25
2622225
2456235
｜r｜
0.9995
3098946
3077668
75
1979591
1963318
S0
3076676
2896896
3137982
210
1242804
1231795
SDS0
105600.1
3160725
2990420
650
557883
517335
分析灵敏度
13.7
3185593
3013787
1500
262278
263060
本次试验分析灵敏度为13.7pg/mL，｜r｜=0.9995.
2.2.1.2精密度（CV%）
10孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（
）与标准差（SD）。
批内不精密度（CV%）=SD／
×100%
表2ALD精密度
样本1
（2010-5-3075160）
样本2
（2010-5-3075180）
孔数
发光值
测定值
发光值
测定值
1
1817980
115.98
2186680
70.65
2
1809837
126.29
2225978
66.38
3
1802299
129.84
2114100
76.64
4
1804197
129.45
2117125
76.13
5
1828486
124.53
2174596
71.45
6
1874899
115.67
2146345
75.3
7
1875937
115.48
2123842
78.03
8
1831369
125.45
2096379
81.49
9
1773696
130.91
2106238
80.23
10
1827748
124.68
2122615
78.18
123.83
75.45
SD
6.02
4.67
CV%
4.86%
6.20%
样本1,2的变异系数分别为4.864%，6.20%.
2.2.1.3测值重复性
取10~20份新鲜样本，将每份样本分装成3~5份。
每天测定一次，连续3~5天。
计算每个样本测定值的CV%.
表3ALD测值重复性
2012-6-1高血压样本
样本号
放免测定值（pg/mL）
6-2
测定值
6-4
测定值
6-7
测定值
SD
CV%
1
75128
770
1339.99
1183.67
1262.59
1262.08
78.16
6.19%
2
75104
116
154.45
175.64
164.78
164.96
10.6
6.43%
3
75105
273
173.35
153.07
170.15
165.52
10.9
6.59%
4
75106
575
397.76
341.49
357.33
365.53
29.02
7.94%
5
75155
794
1108.32
1038.14
1106.46
1084.31
39.99
3.69%
6
75108
235
279.25
246.47
257.12
260.95
16.72
6.41%
7
75109
62
60.31
53.65
55.44
56.47
3.45
6.11%
8
75156
218
94.87
83.93
83.59
87.46
6.42
7.34%
9
75157
58
98.06
85.63
89.91
91.2
6.31
6.92%
10
75158
77
58.34
49.85
50.84
53.01
4.64
8.75%
11
75159
90
185.47
165.63
182.14
177.75
10.62
5.97%
测得2012年6月1号金域高血压样本11个，分别于6月2号、4号、7号测定，分别计算CV%,结果在3.69%~8.75%之间。
2.2.1.4准确性
2.2.1.4.1测定伯乐质控品
表4ALD测定伯乐质控品
伯乐质控品
（批号40250）
测定值（pg/mL）
BeckmanCoulter测定范围
（pg/mL）
是否在质控范围内
371
79.18
<87.0
是
371
200.26
130-296
是
373
400.47
281-688
是
2.2.1.4.2测定CAP尿样室间质评
表5ALD测定CAP尿样室间质评
CAP尿样室间质评
（2012）
测定值
（ug/L）
CAP提供ALD测定范围
（ug/L）
是否在质控范围内
N-01
47.9
36.7-100
是
N-02
17.7
13.5-35
是
N-03
19.7
14.1-34.2
是
2.2.1.5与BeckmanCoulter测定值的临床符合率。
本次测定金域高血压样本213个，分别根据BeckmanALD，和博奥赛斯ALD说明书中普食立位的参考值判断样本值，判断样本值属于正常，偏高或者偏低。
结果如下表。
表6ALD临床符合率（具体结果见附件一）
低值样本数
正常样本数
高值样本数
总数
213例
21
174
18
213
符合例数
17
162
17
196
不符例数
4
12
1
17
临床符合率
92.00%
2.2.1.6结论
2.2.1.6.1博奥赛斯ALD试剂灵敏度为13.7pg/mL、批内不精密度4.864%，6.20%、测值重复性的不精密度在3.69%~8.75%之间、剂量反应曲线线性0.9995、测定伯乐质控品值，CAP室间质评值均在要求范围之内。
2.2.1.6.2博奥赛斯ALD试剂和BeckmanALD试剂进行临床对比试验，符合性大于90%，说明两种试剂测值符合性良好。
2.2.2血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）定量检测试剂盒（化学发光法）
2.2.2.1分析灵敏度、剂量反应曲线性
同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值
与标准偏差SD。
计算
-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。
表7AngⅠ分析灵敏度、线性
S0发光值
校准品浓度（ng/mL）
发光值
参数
7006310
6813222
0.3
3003964
3263092
｜r｜
0.9996
6807618
7030837
1.5
1956863
2079875
S0
6672183
7026469
6928237
5.5
1073156
1129713
SDS0
140375.7
6809113
6809544
20
509359
560683
分析灵敏度
0.02
7191726
7106263
45
231362
250825
本次试验分析灵敏度为0.02ng/mL，｜r｜=0.999。
2.2.2.2精密度（CV%）
10孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（
）与标准差（SD）。
批内不精密度（CV%）=SD／
×100%
表8PRA精密度
样本1（2010-6-575012）
样本2（2010-6-575039）
样本3（2010-6-575044）
孔数
4度值
37度值
PRA
4度值
37度值
PRA
4度值
37度值
PRA
1
4.3
21.5
17.2
1.37
6.64
5.27
1.55
4.21
2.66
2
4.6
22.04
17.44
1.25
6.82
5.57
1.82
4.65
2.83
3
5.37
21.45
16.08
1.21
6.41
5.2
1.26
4.04
2.78
4
4.46
23.09
18.63
1.13
5.91
4.78
1.33
4.18
2.85
5
4.77
23.29
18.52
1.21
6.21
5
0.95
3.81
2.86
6
3.24
18.35
15.11
1.48
7.07
5.59
0.97
3.74
2.77
7
4.38
21.95
17.57
1.64
7.25
5.61
0.92
3.89
2.97
8
4.53
21.5
16.97
1.3
3.87
2.57
9
4.97
23.7
18.73
17.36
5.29
2.79
SD
1.21
0.32
0.12
CV%
6.97%
6.05%
4.30%
样本1,2,3的变异系数分别为6.97%，6.05%，4.3%。
2.2.2.3测值重复性
取10~20份新鲜样本，将每份样本分装成3~5份。
每天测定一次，连续3~5天。
计算每个样本测定值的CV%.
表9PRA测值重复性
2012-6-4高血压样本
样本号
放免测值（ng/mL/hr）
6-5测值
6-6测值
6-7测值
6-8测值
SD
CV%
1
75141
2.16
2.17
2.03
1.99
1.91
2.03
0.11
5.42%
2
75156
1.04
1.33
1.13
1.19
1.13
1.2
0.09
7.50%
3
75247
1.98
2.28
2.1
2.26
2.49
2.28
0.16
7.02%
4
75383
2.43
2.67
2.51
2.25
2.36
2.45
0.18
7.35%
5
75404
22.81
13.94
13.39
12.97
12.14
13.11
0.76
5.80%
6
75478
26.61
26.13
23.59
25.54
27.67
25.73
1.69
6.57%
测得2012年6月1号金域高血压样本6个，分别于6月5号、6号、7号和8号测定，分别计算CV%,结果在5.42%~7.5%之间。
。
2.2.2.4准确性
2.2.2.4.1测定伯乐质控品
表10PRA伯乐质控品测定
伯乐质控品（批号40250）
测定值（ng/mL/hr）
DiaSorinPRA测定范围（ng/mL/hr）
是否在质控范围内
371
2.42
2-3.5
是
371
6.77
5.3-9.1
是
373
8.24
5.9-10.1
是
2.2.2.5与DiaSorinPRA测定值的临床符合率。
本次测定金域高血压样本218个，分别根据DiaSorinPRA，和博奥赛斯PRA说明书中立位的参考值判断样本值，判断样本值属于正常，偏高或者偏低。
结果如下表。
表11PRA临床符合率（具体结果见附件二）
低值样本数
正常样本数
高值样本数
总数
133
50
35
218
符合例数
128
44
31
203
不符例数
5
6
4
15
临床符合率
93.10%
2.2.2.6结论
2.2.2.6.1博奥赛斯PRA试剂从灵敏度为0.02ng/mL、批内不精密度为6.97%，6.05%，4.3%、测值重复性的不精密度在5.42%~7.5%之间、剂量反应曲线线性0.9996、测定伯乐质控品值均在要求范围之内。
2.2.2.6.2博奥赛斯PRA试剂和DiaSorinPRA试剂进行临床对比试验，符合性大于90%，说明两种试剂测值符合性良好。
2.2.3血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）定量检测试剂盒（化学发光法）
2.2.3.1分析灵敏度、剂量反应曲线性
同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值
与标准偏差SD。
计算
-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。
表12AngⅡ分析灵敏度、线性
S0发光值
校准品浓度（pg/mL）
发光值
参数
6836294
6406670
30
6829087
7419047
｜r｜
0.9998
7441226
7064648
70
3410177
3938250
S0
6972593
6970649
7212706
150
2130158
2235844
SDS0
329377.2
6611462
6829087
430
1232357
1342272
分析灵敏度
7.05
6934147
7419047
1500
567130
607886
本次试验分析灵敏度为7.05pg/mL，｜r｜=0.9998。
2.2.3.2精密度（CV%）
10孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（
）与标准差（SD）。
批内不精密度（CV%）=SD／
×100%
表13AngⅡ精密度
样本1
（2010-6-175103）
样本2
（2010-6-175104）
孔数
发光值
测定值
发光值
测定值
1
3648517
30.33
4869314
19.75
2
3626599
30.69
4846963
19.78
3
3651764
30.28
5163067
17.05
4
3510887
32.69
5153106
17.14
5
3777688
29.1
5103172
17.57
6
3629684
30.64
5133753
17.31
7
3571678
31.62
5259261
16.22
8
3748365
29.36
5189591
16.82
9
3811745
28.8
4912441
19.23
10
3739955
29.43
4911113
19.24
30.29
18.01
SD
1.2
1.34
CV%
3.97%
7.44%
样本1,2的变异系数分别为3.97%，7.44%。
2.2.3.3测值重复性
取10~20份新鲜样本，将每份样本分装成3~5份。
每天测定一次，连续3~5天。
计算每个样本测定值的CV%.
表14AngⅡ测值重复性
2012-6-4高血压样本
样本号
6-5测值
6-6测值
6-7测值
SD
CV%
1
75127
26.08
24.45
23.45
24.66
1.33
5.39%
2
75140
37.93
32.97
36.92
35.94
2.62
7.29%
3
75141
51.31
48.95
54.64
51.63
2.86
5.54%
4
75156
49.95
47.78
43.67
47.13
3.19
6.77%
5
75169
28.15
24.74
27.31
26.73
1.78
6.66%
6
75245
23.16
21.28
23.84
22.76
1.33
5.84%
7
75247
33.4
37.17
33.52
34.7
2.14
6.17%
8
75383
47.37
48.99
48.23
48.2
0.81
1.68%
9
75404
78.32
72.69
73.56
74.86
3.03
4.05%
测得2012年6月1号金域高血压样本9个，分别于6月5号、6号、7号测定，分别计算CV%,结果在1.68~7.29之间%。
2.2.3.4测定高血压临床标本
AngⅡ定量检测试剂共测定金域高血压临床样本240例，按照立位参考值判断结果如下表。
表15AngⅡ样本分布情况（具体数据见附件三）
低值样本数
正常样本数
高值样本数
样本总数
例数
80
142
18
240
占总样本的比例
33.30%
59.20%
7.50%
2.2.3.5结论
2.2.3.5.1博奥赛斯AngⅡ试剂灵敏度为7.05pg/mL、批内不精密度为3.97%，7.44%、测值重复性的不精密度在1.68%~7.29%之间、剂量反应曲线线性0.9998。
2.2.3.5.2博奥赛斯AngⅡ试剂检测240份高血压样本，高值样本、低值样本都有一定的临床检出率。
根据以上实验数据可以看出化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。
且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。
开展CLIA法定量检测高血压项目检查，灵敏度更高，可定量，并可实现仪器自动化操作，节约人力。
三、采用化学发光法检测“高血压五项”经济效益分析
高血压五项收费标准（江西省）
项目
收费（元）
肾素活性（PRA）
4℃血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）
37℃血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）
血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）
醛固酮（ALD）
医院收益
（一例）
EIA或RIA
40
30
30
40
40
180
按照医院一年360天，一天按照50个标本计算，那么，一年“高血压五项”可为科室创收：
360×50×180=3240000元,即324万元。
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