降血压肽ACE抑制活性及降压功能研究文档格式.docx

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antihypertensiveeffects

降血压肽实质是一种血管紧张素转换酶抑制肽，它通过抑制血管紧张素转换酶（ACE），阻碍有升高血压作用的血管紧张素Ⅱ的生成，同时抑制具有降血压作用的血管舒缓激肽的分解，从而使血压下降，此即降血压肽的作用机理［1］。

最近几年来国际学术界对降血压肽的研究较多，已报导有以牛奶、乳酪、大豆、鱼肉、蔬菜、小麦蛋白等食物为原料，经蛋白酶酶解产生了具有较好ACE抑制活性的降血压肽［2～7］。

Eiji等［8］水解了12种食物蛋白进一步研究发觉，从鱼肉、虾、蟹等水产动物蛋白中制得的降血压肽其降压活性优于其他食物性蛋白。

我国在降血压肽领域的研究起步相对较晚，现有报导以大豆、蛇毒、老酒、茶叶为原料，对降血压肽的制备工艺和活性基团等方面进行了必然研究［9～13］；

关于最适合用于降血压肽制备的水产动物蛋白的开发研究，那么鲜有报导。

贻贝，又名海红、淡菜，最近几年来人工养殖取得重大成功，在我国东南沿海产量丰硕。

但由于加工手腕和技术的掉队，在收成季节产出的大量贻贝因得不到及时处置而造成极大浪费［14］。

本研究以贻贝为原料，经酶解、活性修饰等方式制取降血压肽，然后利用SHR饲喂实验检测其降血压活性，并分析了其相对分子质量散布和氨基酸组成，以期为贻贝酶解降血压肽的开发提供理论探讨。

1材料与方式

材料与设备贻贝：

市售。

ACE标准样品：

Sigma试剂。

　　复合生物酶P1（本项目组自行配制），其组分均购自上海生物化学试剂公司。

降血压肽制备所需其他试剂，均为生化纯，上海生物化学试剂公司提供。

降压功能实验用动物：

SHR（自发性高血压大鼠），上海高血压研究所提供。

仪器设备：

HPLC（Waters600高效液相色谱仪），大鼠血压仪（RBP-1B）及经常使用实验仪器假设干。

实验步骤

ACE活性抑制检测方式研究酶解降血压肽对ACE的抑制活性分析原理为：

ACE与HHL（Hip-His-Leu）作用会生成HippuricAcid，当HHL的量一按时，HippuricAcid的生成量与ACE的活性呈线性关系，而由于酶解降血压肽的作用，会抑制ACE的活性，从而使反映生成的HippuricAcid量减少，通过检测生成的HippuricAcid的含量，对照ACE的活性，即可分析出酶解降血压肽的抑制活性。

降血压肽的制备依照本项目组前期研究体会和国际新近研究功效，结合有关蛋白酶酶解的作用特点，选取复合蛋白酶P1，在不同酶解条件下对贻贝蛋白进行酶解，采取UniformDesign（均匀设计）方案［15］，研究不同酶量、酶解时刻、酶解温度、pH等四大因素下对ACE的抑制成效。

选择最正确的酶解条件。

按上面实验所确信的酶解条件，取新鲜贻贝去壳，捣碎，酶解，纯化，然后加入活性修饰剂MA1,提取，冷冻干燥，制备降血压肽，以备分析检测之用。

将制备的降血压肽样品利用SHR饲喂实验来分析其降压活性。

实验方式

ACE活性抑制检测方式研究取标准HippuricAcid样品（光谱级），配制成溶液，参考前述有关文献,别离稀释至、、、、；

和、、、、两组不同浓度，别离于228nm下测定其吸光值，记录结果。

酶解样品ACE抑制成效的分析用紫外分光光度法分析不同酶解条件下制备的酶解降血压肽对应的ACE抑制活性。

参照上述研究结果，并借鉴Cushman［16］和后经Toshiro［17］改良的方式进行。

将各酶解液反映值与空白样品对照，分析所得酶解降压肽的ACE抑制率P。

计算公式为：

P=A－A（control）　　A×

１００%

降血压肽降压功能检测实验用动物:

SHR,均由上海市高血压研究所提供,全数为雄性,16周龄,体重为250～300g。

实验前分析各组血压、体重、周龄等比较不同均无显著性（P&

gt;

）。

用8只SHR为一组，共分为5组，另取8只为空白组进行对照。

测量方式：

尾动脉法测量收缩压SBP。

2结果

ACE抑制活性检测方式的研究不同浓度HippuricAcid吸光值结果见表一、表2及图一、图2。

表1不同浓度HippuricAcid吸光值（～）表2不同浓度HippuricAcid吸光值（～）

酶解条件对降血压肽ACE抑制率的阻碍将在不同的酶解条件下处置所得降血压肽样品按前述方式进行ACE抑制活性的检测,分析其ACE活性抑制率,研究不同酶解条件对降血压肽ACE抑制率的阻碍,结果见表3。

降血压肽的降压成效降血压肽样品动物实验，将样品以kg体重的样品剂量进行灌喂。

灌喂前和灌喂以后第二、4、六、八、10h别离检测收缩压一次，记录各血压值。

结果见表4。

统计学分析采纳各组别服用降血压肽前后收缩压的转变情形来反映降压成效，数据以x±

s表示，采纳forWindows系统处置数据，并进行单因素方差分析，各组间进行Dunnettt多重比较。

分析结果见表5。

表3不同酶解条件对ACE抑制成效阻碍表4降血压肽样品对收缩压降压成效注：

（α＝）★（α＝）★★3结论

ACE抑制活性检测方式的研究分析～和～的数据，可发觉HippuricAcid在浓度范围为～内线性最正确，因此应操纵有关反映使最终的HippuricAcid浓度在此范围之内，提高检测的准确性。

P1酶最正确酶解条件关于ACE抑制结果进行回归分析，所得回归方程为:

Y=

依照方程分析最正确的ACE抑制活性为%。

但由实验结果在此条件下的实际ACE抑制率为%,因此NO1为最正确条件。

其ACE抑制率为%，对应的最正确酶解条件为：

酶量25IU/ml；

酶解时刻2h；

pH；

酶解温度60℃。

具体分析P1的酶解情形，酶量从25IU/ml到175IU/ml，酶解时刻2～7h,随着酶量的增加和酶解时刻的延长，其酶解程度增加，但所得降血压肽的ACE抑制率下降。

这是因为随着酶解的进行,蛋白质慢慢被水解成不同长度的肽断，其中部份因结构上的某些活性基团而具有降血压活性；

但随着酶解程度提高，部份具有ACE抑制活性的短肽被酶解成氨基酸或其活性基团被破坏，从而致使其ACE抑制活性下降。

这一点与Kim等［18］通过牛皮胶制备酶解降血压肽的研究取得的结论相吻合，在酶解进程中操纵酶解程度超级重要，既要使蛋白质取得充分的酶解，使更多的活性肽断被水解出来，但同时又要适当操纵酶解程度，即并非酶解程度最大时其降压活性最好。

降血压肽的降压成效由方差分析结果，查表得（2,9）＝，可知关于处置4h和6h血压转变的F值＞（2,9），说明服用降血压肽4h和6h成效不同有显著性（α＝）。

同时，由上述实验结果可知，降血压肽在2～6h之内均有显著降压成效（α＝），平均降低为16～28mmHg。

在6h处降压成效达到最大值为28mmHg，且成效极为显著（α＝）。

依照国内外大量随机对照的临床实验结果，收缩压降低10～14mmHg和舒张压降低5～6mmHg，冠心病减少1/6，总的要紧心血管事件减少1/3［19］，从那个意义上讲，贻贝酶解降压肽的降压成效超级显著，随着尔后进一步研究，其有望作为一种高品质的食物、药品原料而大有效途。

意义作为世界第一水产大国，我国的水产品深加工水平却相当掉队，产品的附加值较低且市场前景有限。

关于应用水产原料进行降血压肽的开发研究工作还比较掉队。

鉴于以上情形，加大从水产动物蛋白中研制开发具有较高降血压活性的降血压肽，那么关于减缓以上问题有较为踊跃的意义。

【参考文献】

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