山羊胚胎移植技术在农村的推广.docx

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山羊胚胎移植技术在农村的推广

山羊胚胎移植技术在农村的推广

摘要：

从我市农村养殖业的生产实际出发，系统论述了绒山羊在生产性胚胎移植中的技术程序。

主要包括：

提前的准备工作，选择适宜的供、受体羊，并加强饲养管理；胚胎移植条件的准备：

在适宜的季节，用促卵泡素，以减量法进行供体超排；供、受体比例为1：

8～12；用阴道栓配合促性腺激素，或用氯前列烯醇（ＰＧ）进行受体同期发情处理；从供体输卵管手术回收的胚胎，移植于受体羊输卵管；完整的记录体系。

关键词：

绒山羊；同期发情；超数排卵；胚胎移植

胚胎移植是现代生物工程高新技术，能充分发挥优良母畜的繁殖潜力，迅速扩大优良畜群和纯种规模，加速杂交改良速度，缩短改良周期和育种进程，增加双胎率，防止不育，尽快培育出我国优良绒山羊新品种。

是一项投资少、见效快、利润丰，具有事半功倍的良种扩繁和现代育种技术。

近几年来，吕梁市先后引入陕西横山白绒山羊与本地绒山羊育种进行示范养殖，收益较大，一些养殖户积极搞起了此类养殖，为满足需求和帮助养殖户早日脱贫致富，政府投大量资金进行胚胎移植来提高繁殖率，同时也加快了山羊胚胎移植技术在农村牧区的迅速发展推广。

1关于开展农村牧区零散养殖胚胎移植的建议

在广大农村每户养殖数很少，而开展胚胎移植工作又需要进行集中处理，所以根据这一特点，提出以下建议，供参考：

1.1分户饲养与集体饲养相结合

要在同期发情处理的第15天将所要接受移植的个体全部结合到一块进行集中饲养，集中饲养时间为8~10天。

1.2胚胎移植受体羊只的统计

在胚胎移植前3个月进行村内移植受体羊统计，具体数量根据现有供体羊的数量进行确定，供受体参考比例为1：

10。

1.3胚胎移植处理时间确定

吕梁地区一般在每年8月下旬至11月上旬进行同期发情处理较为合适。

1.4受体羊的选择及饲养管理

1.4.1受体羊选择

受体羊健康状况良好，膘情适中，选择繁殖机能正常，无传染性疾病、无生殖器官疾病，年龄在2～6岁之间的经产的羔羊断奶一月以上的母羊。

而且在移植前2个月进行定期驱虫，以利于个体抓膘，提高同期发情及受胎率。

1.4.2公母分群

所要进行移植的羊只一定要进行公、母羊分群饲养，以防受体羊只提前怀孕而流产造成不必要的经济损失。

1.4.3饲养管理（短期优饲）

要求被处理个体在移植前加强饲养管理，使个体达到中等膘情，但也不能过肥或过瘦。

从同期发情放栓之日起要适当增加豆类饲料和萝卜等多汁饲料的供应，进行短期优饲能提高同期发情及受胎率。

1.5供体羊的选择及饲养管理

1.5.1供体选择

供体羊（陕西横山白绒山羊）为经产2~4胎的母羊，身体健康状况良好，生殖器官正常，正常繁殖史，繁殖力较高，遗传性稳定，生产性能优良，羔羊断奶1个月以上，未孕。

1.5.2供体的饲养管理

对供体羊进行常规传染病和寄生虫病的防治。

饲养管理遵循一般繁殖羊群的原则。

保持羊群体况适度，根据羊群营养状况适时调整日粮标准，即增加蛋白质、能量饲料补充料，并注意矿物质和维生素的供应。

1.5.3供体羊准备期的日粮配制

A、优青草2千克；

B、优质紫花苜蓿干草粉0.5~1千克或鲜紫花苜蓿2~2.5千克；

C、胡萝卜0.4千克；

D、干玉米秸、胡萝卜秧等混合草粉0.5千克；

E、精料0.5千克（精料配方：

玉米面59斤，麸皮15斤，豆粕22斤，母羊专用预混料1斤，石粉或磷酸氢钙1斤，食盐1斤，微量元素添加剂1斤，合计100斤）。

2　准备工作

2.1　物品准备

2.1.1　器材　

高压灭菌锅、20ml注射器、10ml注射器、5ml注射器、1ml注射器、胚胎移植手术架、手术刀片、医用缝合线、体视显微镜、冲胚管、集卵皿、培养皿、消毒卫生纸、医用喷壶、黑色记号笔、宫颈扩张器、移胚器、检胚皿、剪毛剪、外科剪、手术刀、止血钳、创巾钳、持针钳、手术镊、缝合针、创巾、止血纱布、脱脂棉、盆等。

2.1.2药品　

冲胚液、胚胎培养液、冰袋、生理盐水、新洁尔灭洗涤液、碘酊、酒精、青霉素、黄胺粉、FSH、孕马血清、CIDR、阴道海绵栓、氯前列烯醇（PG）、黄体酮、麻醉剂（2％静松灵）、苏醒灵等。

2.2胚胎移植操室准备

  50m2的以上房间，分隔为2个房间，胚胎移植手术室和胚胎操作室。

并设置工作台及药械台等。

室温保持在22℃~25℃，并用新洁尔灭进行室内消毒。

3供、受体羊的同期发情及供体的超排

具体方案详见表1。

表1供、受体羊的同期发情及供体的超排试验安排

日期

供体山羊

受体山羊

0天

早8时，放置海绵栓

2天

早8时，放置阴道海绵栓

9天

早8时，取出海绵栓、放入一新的海绵栓

15天

晚6时，肌注PMSG200iu

晚6时，肌注PMSG200iu

16天

晚6时，肌注FSH30~32iu

17天

早8时，肌注FSH30~32iu

晚6时，肌注FSH25~27iu

18天

早8时，肌注FSH25~27iu

晚6时，a、肌注FSH20~22iu

b、肌注PG0.5ml

晚6时、肌注PG0.5ml

19天

早8时，a、撤出海绵栓（青霉素冲阴道）

b、肌注FSH20~22iu

晚6时，a、开始试情

b、发情后立即静注LH130~140IU

c、发情后立即进行输精

早8时，撤出阴道海绵栓

晚6时，开始试情

20天

进行手术输精（发情12小时）

早8时试情

22天

输卵管冲胚（建议在下午开始较好）

输卵管移植

4胚胎回收及胚胎检查

4.1供体羊术前准备

   胚胎回收手术前1天停止饲喂草料而只给少量饮水，否则由于腹压过大，会造成手术的困难和供体生殖器官的损伤。

饲喂干草的母羊，停饲的时间不能少于24小时，饲喂青草或在草地上放牧的羊，停饲时间可减少至18个小时。

在术前一天术部进行剪毛和剃毛，常有许多剃断的毛粘于皮肤，很难消除干净，手术中易带入创口造成污染，可采用干剪毛湿剃毛，剪毛完毕后用肥皂涂于要剃毛的部位，再用剃毛刀剃毛，然后用干毛刷将断毛刷除干净。

第二天进行冲胚手术。

4.2供体羊冲胚

供体羊的冲胚手术在授精后68~72小时进行。

（采用输卵管冲胚法可获2~8细胞期的胚胎及少量的16细胞期胚胎，用于鲜胚移植。

）

首先，对供体羊全身麻醉，术部消毒后，采取前低后高半仰姿势将其保定在手术台上。

在腹底部偏右侧距乳房基部3~4cm处做一长4~5cm的纵向切口，逐层切开，切开腹膜后，将中指和食指伸入腹腔在骨盆腔前沿膀胱之下触摸子宫角，把子宫角牵引到切口之外，再把卵巢引出，检查黄体发育情况，如果黄体发育正常，即冲胚。

冲胚时，在输卵管伞部前端插入一个带有胶管的回收圆针，并用手卡住，准备收集冲出的胚胎；再向子宫角与输卵管交接的子宫角小弯处，插入装有冲胚液的进液针头，缓慢推入冲胚液，将胚胎冲入器皿中，冲胚液用量20ml。

一侧冲洗结束时，除去器械，检查针孔，确认无出血现象，将输卵管送回腹腔内，然后按同一操作办法进行另一侧冲胚。

两侧冲洗完毕后，将子宫送回腹腔并向腹腔内注入25℃～30℃含青霉素的生理盐水50ml左右，最后逐层进行术部缝合。

4.3胚胎检查

4.3.1检卵

将收集的冲卵液立即置于视体显微镜下先在低倍（10~20倍）下检查胚胎数量，并将检到的胚胎用微量移液器移到含有胚胎保存液的培养皿中进行胚胎洗涤，同时在较大倍数（50~100倍）下进行胚胎质量鉴定。

4.3.2吸胚

用移植器先吸一段1cm长的保存液，再吸一段0.5cm的空气，然后吸取胚胎。

含胚胎的液柱不超过1.5cm。

吸胚是为了移取、清洗、处理胚胎，要求目标准确，速度快，带液量少，无丢失。

吸胚可用1毫升的注射器装上特别的吸头进行，也可使用自制的吸卵管。

4.3.3胚胎质量鉴定

正常发育的胚胎，其中细胞（卵裂球）外形整齐，大小一致，分布均匀，外膜完整。

无卵裂现象（未受精）和异常卵（外膜破裂、卵裂球破裂等）都不能用于移植。

详见图1。

图1处于二分体到四分体的胚胎

4.3.4胚胎保存

用吸卵管吸取发育成熟的胚胎，放入PBS培养液中保存，在24~26℃下，保存时间不超过4~5小时。

5受体羊胚胎移植（术前准备同供体）

首先，对受体羊注射麻醉剂，实行全身麻醉，术部消毒，采取前低后高半仰姿势将受体羊保定在手术台上，在腹底部偏右侧距乳房基部3~4cm处做一个长4~5cm的纵向切口，逐层切开，切开腹膜后，引出子宫、输卵管以及卵巢，检查黄体，无黄体或黄体过小的受体羊不能做胚胎移植；若有孕妊黄体，且生殖系统无炎症，即作为受体羊。

将受体羊黄体一侧的输卵管伞部拔开，用装入胚胎的注射器从此处插入3~4㎝，将胚胎注入输卵管内。

移植结束后，把子宫角送入腹腔，在创口洒上抗菌素，防止感染，按手术要求缝合好腹壁创口。

6术后护理

6.1供体术后护理及配种繁殖

  胚胎回收手术后注意伤口护理，注意观察，有问题及时处理。

对季节性繁殖的品种，为了不影响其自然繁殖及次年羔羊管理，当年只进行一次超排，并在下次发情时配种，自然繁殖。

6.2　受体术后护理与妊娠、分娩

  完成受体胚胎移植步骤后，应加强术后护理、观察，对妊娠受体适当增加日粮营养，以满足妊娠需要，妊娠后期更应加强管理，防止流产，并做好接产和羔羊护理工作。

7结果与存在的问题

7.1总体移植情况

共处理供体63只，其中怀孕3只，未发情1只，未冲胚1只，可用胚493枚，未受精卵141枚。

共处理受体（同期发情处理）500只，受体移植数量431只。

7.2存在的问题

由于参加胚胎移植的人员中有几个是教师，所以移植只好安排于暑假期间，但是对于吕梁地区来说，最佳的移植时间一般是在8月下旬~11月上旬，略有些早，影响供体的超排效果。

当地养殖户意识比较差，不懂这方面的知识，，有几家牧民在输精前一天的晚上偷着利用了种公羊与自家不进行胚胎移植的发情母羊配种，以至第二天所采精液品质下降，造成供体羊受精率降低。

出现了很多未受精卵。

8总结与展望

随着胚胎移植技术的不断改进和完善，先进设备的应用以及专门人才的大量培养，胚胎移植会像今天的人工受精技术那样被广大农村养殖户接受和采用。

在21世纪，将是生物工程技术迅速发展并日益完善的世纪，它会对传统的繁殖技术带来新的突破。

我们相信，随着繁殖技术的发展完善，它将为人类建设美好的明天做出更大的不可替代的贡献。

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