选修1 3填空教师版学习文档Word文件下载.docx

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b．取不超过0.1mL的________，滴加到培养基表面。

c．将蘸有少量酒精的玻璃刮刀在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。

d．用玻璃刮刀将菌液均匀地涂布在培养基表面。

涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

（3）培养：

将接种的平板________于培养箱或温室中37℃培养12～24h。

无菌水　10　

（2）a.酒精灯火焰　b．平行　连续灼烧②a.涂布器　b．菌液　（3）倒置

第2课时　分离以尿素为氮源的微生物

1．实验原理

（1）以尿素为氮源的微生物含有酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。

（2）尿素固体培养基的唯一氮源为，只有能合成的微生物才能分解尿素

（3）脲酶可使尿素分解产生氨，从而可使加入的尿素固体培养基变

。

其利用尿素的反应式为：

脲酶尿素脲酶酚红指示剂红：

（NH2）2C＝O＋H2O

2NH3＋CO2

2．实验步骤

（1）倒平板

在60℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的培养基和培养基，在旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上，平放至。

（2）制备细菌悬液

在无菌条件下，将1g土样加到有99mL的三角瓶中，振荡10min，即成10－2土壤稀释液。

依此法制备10－3、10－4和10－5土壤稀释液。

取样时，尽量只取。

摇匀，放在试管架上。

（3）用法分离细菌

取10－4和10－5的土壤稀释液各mL，分别加到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，再将保存在中的玻璃刮刀（或涂布器）放在酒精灯火焰上，待刮刀（或涂布器）上火焰熄灭，在旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。

（4）培养

将培养皿，在37℃中培养24～48h。

（5）观察

3．实验结果

（3）在尿素培养基上的菌落周围会出现的环带。

LB固体培养基和尿素固体酒精灯摇匀，凝固无菌水悬液涂布分离法0.170%酒精酒精灯火焰倒置恒温箱红色

第3课时　果汁中的果胶和果胶酶

1．果胶

（1）组成：

果胶是植物的主要成分，由和组成。

的果实中果胶含量最多。

（2）作用：

起着将植物细胞的作用，去掉果胶，植物组织将变得。

（3）性质：

果胶不溶于，这是鉴别果胶的一种简易方法。

2.果胶酶

（1）来源：

黑曲霉、等。

（2）组成：

果胶酶并不是特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，主要包括果胶酶和。

细胞壁半乳糖醛酸半乳糖醛酸甲酯山楂粘合在一起

松散乙醇苹果青霉果胶甲酯酶

第4课时　α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

2．固定化酶：

将的酶用或方法上，使之成为而又有。

3．将酶改造成固定化酶的原因是

由于酶，且不利于，所以要将酶改造成固定化酶。

4．酶固定化的方法有

法、法、法和法等。

本实验用的是法。

5．固定化酶作用的机理

将固定化酶，当时，在的作用下。

水溶性物理或化学某种介质不溶于水酶活性的制剂在水溶液中很不稳定工业化使用吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法吸附法

装柱底物经过该柱酶转变为产物

二、α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用检测的实验

将固定在上，一定浓度的淀粉溶液经过后，可使淀粉水解成。

用测试，若流出物呈色，表明有生成。

2．实验材料

（1）α淀粉酶的固定化

在烧杯中将5mgα淀粉酶溶于4mL中

　　再加入5g，不时搅拌

30min后将上述溶液加入1支注射器中

用10倍体积的洗涤此注射器

（除去游离淀粉酶，流速为1mL/min）

（2）可溶性淀粉溶液

取50mg可溶性淀粉溶于100mL中，搅拌均匀。

α淀粉酶石英砂固定化酶柱糊精淀粉指示剂红色糊精蒸馏水石英砂蒸馏水未吸附热水

将灌注了固定化α淀粉酶的注射器放在注射器架上，用滴管加溶液，使该溶液以mL/min的流速过柱。

（2）接取流出物

待从固定化酶柱中流出mL的溶液后，接收0.5mL流出液。

（3）流出物鉴定

在流出物中加入溶液，观察颜色。

用水稀释倍后再观察颜色。

（4）洗涤、保存固定化酶柱

实验后，用倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱。

放置在℃冰箱中保存。

（5）几天后取出冰箱中该固定化酶柱，重复实验，观察结果。

淀粉0.35KII21104

第5课时　果酒及果醋的制作

一、用葡萄制作葡萄酒

原理酵母菌在条件下进行发酵，将葡萄糖氧化成乙醇。

反应式为：

4．步骤

（1）冲洗取2.5～5kg的葡萄→用洗净→在鲜红紫色的溶液中浸泡约5min→用洗净→沥去水分，待用。

（2）榨汁

用多功能榨汁机以速将葡萄打成浆状（也可以用杵和研钵捣烂）。

（3）制作酵母悬液

适量干酵母（2.5kg葡萄约用1g干酵母）放在一小烧杯中

干酵母成糊状→加少许，混匀，放置片刻→待酵母悬液中出现即可。

（4）装入发酵瓶

①装量不要超过。

②瓶上所加的玻璃管最好是的，否则效果不好。

（5）酒精发酵

①发酵温度：

_℃。

若温度偏低，则发酵时间；

若温度高于30℃，要采取降温措施，否则。

②发酵时间：

天。

③鉴别发酵完毕的依据：

发酵瓶中。

（6）过滤、分装、保存

发酵液（浑浊）（用过滤，除去葡萄皮和籽）→滤液（仍然浑浊）（分装到1～2L的细口瓶中，加盖密封，静置）→即为葡萄酒（清澈）。

无氧酒精成熟水高锰酸钾清水低速蔗糖气泡2/3弯曲25～30_延长酒的风味不佳2～3停止出现气泡两层纱布上清液

二、用果汁制作果酒

原料　（最好）、梨、柑橘或其他水果。

（1）制取果汁：

苹果→多功能榨汁机打碎→层纱布过滤即成果汁。

（2）配料（以1L为例）

向2L发酵瓶中加入200g→倒入果汁→转动发酵瓶使→倒入（约1g干酵母），混匀、加盖。

（3）发酵

3天后可见到气泡→天后剧烈发酵停止→取出果酒过滤和分类。

注意事项：

①发酵开始时，由于微生物的会使瓶内出现，该情况不能持续天以上。

②若天后还看不到气泡，必须加入更多的，使发酵作用尽快发生。

（4）静置5～6个月，用法取出即为果酒。

苹果切成大块双层蔗糖蔗糖完全溶解酵母悬液10微生物的需氧呼吸负压33酵母虹吸法上清液

三、用果酒制作果醋

1．菌种　。

2．原理在条件下，醋杆菌将乙醇氧化为醋酸。

3．原料　果酒。

把800mL酒—水混合物倒入甲瓶中→发酵在瓶中（将适量醋化醋杆菌的培养物或醋曲悬液加在200mL酒一水混合物中混匀，调pH至后倒入乙瓶中，使锯末均匀湿透）→将水簇箱通气泵由②（①②③中选）通气，通气不必太快→48h后，用pH试纸检查瓶中流出液的pH，若呈性，则进行下一步→调节甲与乙间的双通活塞、乙与丙③处的螺丝夹，使流出液量为滴/5min→每天用pH检测流出液→

停止实验

醋化醋杆菌有氧乙酸性1

第6课时　泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定

一、泡菜腌制

1．菌种　主要是和。

2．原理在的条件下，微生物利用菜中的和其他营养物质进行发酵，发酵产物有和醇类物质等，其中也有。

3．步骤

→

假丝酵母和乳酸菌无氧有机酸亚硝酸

二、亚硝酸盐的定量测定

1．原理

亚硝酸盐与发生重氮化反应后，其产物与N－1－萘基乙二胺偶联，形成产物。

亚硝酸盐溶液的浓度不同，呈现的颜色深浅不一：

溶液浓度高，颜色深些，浓度低，颜色浅些，可用法予以定量。

2．步骤

（1）样品处理

腌制的泡菜25g及少量泡菜汤打成匀浆，过滤、清洗制取滤液，用溶液调pH至8.0，再加入25mL溶液，产生。

（2）测定

10mL样品溶液＋4.5mL缓冲液＋2.5mL60%溶液

＋5mL定容于25mL容量瓶中，静置后用光程为cm的比色杯

在_nm处测定光密度值（OD值），以10mL水为对照。

（3）标准曲线

取0、0.5、1.0、3.0和5.0mL亚硝酸钠标准溶液处理后测光密度值，以为横坐标，以为纵坐标，绘制标准曲线。

（4）计算

X1＝（m2×

V1）/（m1×

V2），式中X1为样品中亚硝酸盐含量，单位mg/kg；

m1为，单位g；

m2为通过标准曲线得到的亚硝酸盐质量，单位μg；

V1为样品处理液总体积，V2为。

对氨基苯磺酸紫红色光电比色法氢氧化钠硫酸锌白色沉淀氯化铵乙酸显色液1_cm550_nm空白对照亚硝酸钠质量光密度值样品质量测定用样品液体积

第7课时　植物的组织培养

一、植物组织培养1．含义

取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在的条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的和，使之产生，或进而生根发芽。

2．原理　。

4．激素在植物组织培养过程中的作用

（1）培养基中加入的植物激素是和。

（2）两者的决定组织是生根还是生芽。

细胞分裂素与生长素的比例高时，诱导芽的生成；

细胞分裂素与生长素的比例时，愈伤组织继续生长而不分化；

细胞分裂素与生长素的比例时，会趋于生根。

无菌温度和光照愈伤组织植物细胞的全能性生长素和细胞分裂素摩尔浓度比大致相等低

二、菊花的组织培养

1．材料　MS培养基、培养基、培养基、（NAA）、苄基腺嘌呤（BA）、菊花幼苗。

（1）制备外植体

在中，取出一瓶已进行过的菊花培养，在无菌培养皿上用无菌镊子和无菌解剖刀切成几段，每段上至少有张叶片。

（若是自然生长的茎进行组织培养，则可取一段茎在中浸泡10min，再放入溶液中浸泡5min，然后用另一溶液浸泡5min，最后在超净台中用清洗，切段）

（2）接种

在旁，将每段放入1瓶培养基中，使插入培养基内，盖上。

每瓶也可放入2～3段幼茎切段。

（3）生芽培养

在下保持℃的温度培养，每天的光照不少于14.5h。

2～3周后长成健壮的丛状苗。

（4）生根培养

将健壮的在无菌条件下一个个转入培养基中，在上述条件下继续培养。

（5）移栽锻炼

将生根的苗移至草或中，用玻璃罩或塑料布保持以上的湿度，2～3天后打开玻璃罩逐渐降低进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度下为止。

（6）定植栽培

转移至土中培养，即可长成植株并开花。

发芽生根萘乙酸超净台无菌培养170%乙醇5%次氯酸钠5%次氯酸钠无菌水

酒精灯生芽茎的一部分封口膜日光灯18～25℃丛状苗生根草炭土或蛭石80%以上降低温度

第1课时　工具酶的发现和基因工程的诞生

1．基因工程的概念

基因工程是狭义的。

广义的遗传工程泛指把一种生物的遗传物质（细胞核、染色体脱氧核糖核酸等）移到另一种生物的中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在中表达。

其核心是构建分子。

3．基因工程的技术保障

限制性核酸内切酶、和的发现与应用，为基因工程的创建提供了技术上的保障。

遗传工程遗传物质细胞受体细胞重组DNA

二、限制性核酸内切酶

限制性核酸内切酶是能够和DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶。

2．来源

主要从生物中分离，如细菌。

3．作用

能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的断开。

如：

某种限制性核酸内切酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切断DNA，

4．作用特点

具有专一性，一般每种限制性核酸内切酶只识别种特定的核苷酸序列。

5．结果

形成末端。

识别和切割原核磷酸二酯键一粘性

三、DNA连接酶

1．概念

DNA连接酶是将具有末端的2个DNA片段连接在一起，形成分子的酶。

2．功能

缝合DNA片段。

在基因工程中，可以将和DNA连接在一起。

3．作用特点

两种来源不同的DNA用的限制性核酸内切酶切割，形成的粘性末端。

DNA连接酶能催化磷酸与脱氧核糖之间的形成，将两DNA末端的缝隙“缝合”起来。

如图：

碱基互补重组DNA外源基因载体相同相同

磷酸二酯键

四、质　粒

（1）概念：

质粒是能够的双链环状分子，它在细菌中以独立于之外的方式存在，是一种特殊的遗传物质。

质粒是基因工程中最常用的载体，可将基因送入细胞。

自主复制DNA拟核外源基因宿主细胞

第2课时　基因工程的原理和技术

1．基本原理

让人们感兴趣的基因（即基因）在宿主细胞中稳定和高效地表达。

2．变异类型。

1．获得目的基因

①如果目的基因的序列是已知的，可用合成目的基因，

或者用（PCR）扩增目的基因。

②如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以从中获取。

2．形成重组DNA分子

（1）一般用限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA（如质粒），形成。

（2）用将目的基因和载体DNA连接在一起，形成重组DNA分子，

目的基因）基因重组化学方法聚合酶链式反应基因文库同一种相同的粘性末端DNA连接酶

3．将重组DNA分子导入受体细胞

（1）常用受体细胞：

、枯草杆菌、和动植物细胞等。

（2）导入方法举例：

用质粒作为载体，宿主细胞应该选择，

用处理大肠杆菌，增加其细胞壁的，使含有目的基因的重组质粒进入大肠杆菌宿主细胞。

4.筛选含有目的基因的受体细胞

（1）筛选原因：

不是所有细胞都接纳了。

（2）筛选方法举例：

若质粒上有四环素的抗性基因，含有这种重组质粒的受体细胞就能够在有的培养基中生长，否则不能生长，这样就筛选到含有重组DNA分子的受体细胞。

具体如下图：

5．目的基因的表达

目的基因在细胞中表达，产生人们需要的功能物质，如人胰岛素原。

1．转基因植物

（1）传统育种方法的不足：

培育新品种所需时间，而且亲本难以杂交。

（3）培育成功的转基因农作物：

抗除草剂的，抗植物病毒的，抗害虫的，耐贮存的等。

2．基因治疗

（1）概念：

基因治疗是向中引入正常功能的，以纠正或补偿基因的缺陷，达到治疗的目的。

三、基因工程与生态环境保护

1．利用基因工程技术开发具有生物可的新型塑料，以替代不可降解的化学合成塑料。

2．利用基因工程技术，对能够分解石油的进行了改造，大大提高了其分解石油的能力。

3．利用转基因微生物吸收环境中的、降解有毒化合物和处理工业废水。

大肠杆菌酵母菌大肠杆菌氯化钙通透性

重组DNA四环素宿主细胞较长远缘转基因烟草转基因番茄转基因棉转基因番茄目标细胞

基因降解细菌重金属

第4课时　植物的克隆

1．植物细胞的全能性

（2）原理：

生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套，都有发育成为完整个体所需的全部基因。

（3）在生物体内细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织或器官，这是基因在特定的时间和空间条件下的结果。

2．植物组织培养

（1）一般程序：

配制培养基→获取的植物组织→组织培养，获得→诱导新植株形成。

（2）过程：

离体的植物器官、组织或细胞

愈伤组织

胚状体（或根、芽）→幼苗

成熟植株。

遗传物质选择性表达半固体消毒愈伤组织

二、植物克隆的成就

1．细胞培养

（1）过程：

单个植物细胞经过培养基中成分的诱导，依次发育成细胞团、、心形胚和，最后再生出完整的植株。

（2）细胞培养的诱导方法：

主要通过平衡的植物激素配比进行调控。

例如，适量的激动素和细胞分裂素配比可以诱导的分化；

适量的吲哚乙酸（IAA）及适当减除其他植物激素，则可以诱导。

2．器官培养

在植物器官培养方面，雌性的培养成果显著，例如子房的培养、胚囊的培养均已取得进展。

3．原生质体培养和植物细胞工程

（1）植物原生质体的获得方法：

在0.5～0.6mol/L的溶液环境（较高渗透压）下用混合液处理根尖、叶片愈伤组织或悬浮培养细胞，将消化除去。

获得球形的原生质体。

（2）植物细胞工程的概念和操作过程：

培养植物细胞（包括原生质体），借助基因工程方法，将外源遗传物质（DNA）导入受体细胞（包括原生质体）中，或通过细胞

融合、等将不同来源的遗传物质重新组合，再通过对这些转基因细胞或重组细胞进行培养，获得具有特定性状的新植株。

4．多途径的植物克隆实践

植物克隆技术

应用

大量培养特定细胞系

能产生重要（如某些中药）的细胞的大量克隆和产物的工业化生产

花药（花粉）培养，进行克隆

对烟草、大麦等育种

选择细胞培养产生的表现出遗传变异的新植株

选择具备性状的作物新类型

在培养基中加入不同浓度NaCl或病原体的毒蛋白

诱发和筛选突变体

在培养基中加入不同浓度的赖氨酸类似物

产生突变体，其中赖氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的水平会升高

球形胚胚状体芽生根花器官甘露醇纤维素酶和果胶酶细胞壁显微注射次生代谢产物单倍体有益性状抗盐或抗病抗赖氨酸类似物

第5课时　动物的克隆

1．动物克隆的技术基础

动物克隆的技术基础是。

2．动物细胞培养

（2）原代培养和传代培养

将动物组织通过或方法分散成细胞后进行的初次培养，称为原代培养。

初次培养的细胞生长、繁殖一定时间后，由于空间不足或细胞密度过大导致营养枯竭，影响细胞的生长，因此需要重新用等处理，进行分瓶扩大培养，称为传代培养。

动物的细胞和组织培养。

酶或机械方法单个胰蛋白酶

生长细胞培养原基整个分化

3．动物组织培养

动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或特性。

（2）结果：

由于细胞的运动、变化和培养物的组织成分发生变化，长期的培养结果最终成了简单的。

（3）在广义的组培中还包括器官培养，即器官的、器官的一部分或器官在体外和人工控制的条件下得以保存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及能力。

4．细胞系和细胞株

（1）细胞系：

可的细胞。

原代培养物在首次传代时就成为细胞系，能连续培养下去的细胞系称为细胞系，不能连续培养下去的细胞系

称为细胞系。

二倍体细胞通常为有限细胞系。

连续细胞系被认为是发生转化了的细胞系，大多数具有。

有的连续细胞系是，具有异体致瘤性；

有的连续细胞系获得了不死性，但保留现象，不致癌。

（2）细胞株：

通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的

具有的细胞称为细胞株。

细胞株一般具有恒定的、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。

可以连续多次传代的细胞株称为连续细胞株，可传代次数有限的细胞株称为细胞株。

5．克隆培养法（或细胞克隆）

把一个从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。

由于来源于一个共同的祖细胞，所以称为，也就是克隆。

（3）提高细胞克隆形成率的措施：

选择适宜的培养基、添加（胎牛血清最好）、以细胞支持生长、（胰岛素等）刺激、使用CO2培养箱、调节等。

连续传代连续有限异倍体核型恶性细胞系接触抑制特殊性质染色体组型有限单细胞纯系血清滋养细胞激素pH

二、动物的细胞融合技术及其应用

1．细胞融合与细胞杂交

②原理：

。

③诱导融合的方法

a．物理方法和化学方法：

电激法、等。

b．生物方法：

（如仙台病毒）。

（2）细胞杂交

①概念：

的细胞间的融合就是细胞杂交。

②过程

③应用：

由于细胞杂交中染色体容易丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物（蛋白质）减少的对应关系可以进行。

2．杂交瘤技术和单克隆抗体的制备

①用外界刺激动物，使其发生免疫反应，使产生抗体。

②利用或聚乙二醇等作介导，使经免疫的动物的脾细胞与可以无限传代的融合。

③经过筛选、克隆培养，获得来自单一细胞的既能产生、又能增殖的杂交瘤细胞克隆。

（2）杂交瘤技术制备单克隆抗体的最大优点：

可以从特异抗原成分的抗原混合物中提取单抗。

（3）单抗的运用：

可作为，研究相应抗原蛋白的、细胞学分布及其功能。

细胞膜的流动性聚乙二醇灭活的病毒基因型不同基因定位抗原B淋巴细胞仙台病毒骨髓瘤细胞特异抗体无限增殖比例极少特异探针结构

三、动物的克隆繁殖

1．动物细胞全能性的表现程度

（1）在动物发育过程中，细胞的发育潜能逐渐。

3．动物体细胞克隆

原理和主要技术：

利用的全能性进行，将动物的一个细胞核移入一个已经去掉细胞核的中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。

变窄细胞核核移植卵母细胞

第6课时　从受精卵谈起

1．含义：

成熟的精卵融合成为的过程。

2．过程：

→精子附着于卵膜→精卵质膜融合。

3．同种动物精卵结合的原因之一：

同种动物精子、卵细胞表面有相互识别的。

受精卵精卵识别特异性蛋白

二、胚胎发育的过程

1．胚胎发育的概念

受精卵发育为的过程。

2．胚胎发育的过程

→→原肠胚期→组织、器官的形成→幼体。

（1）卵裂期：

受精卵不断进行即卵裂，卵裂产生的细胞团叫卵裂球，随着卵裂球数目的增多，细胞逐渐。

当卵裂球含有2～8个细胞时，其中的每一个细胞都具有。

（2）囊胚期：

具有囊胚腔、滋养层、内细胞团（如图）。

①囊胚腔：

囊胚中间的空腔，是由于卵裂球的细胞继续分裂，细胞间出现的间隙。

②滋养层

a．存在部位：

外表的一层扁平细胞。