国内外鸡的人工授精技术概况及操作技术Word下载.docx
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真正开发这项技术是随着我国现代化养禽发展的近20年。
70年代末至80年代初，首先在某些教学、科研单位开展人工授精技术的研究试验，随后在某些育种场和繁殖场开始应用，并获得了很高的受精率。
如1981年大连鸡场，1983年中日友好鸡场，生产上万枚种蛋，受精率均在90％以上。
这些成果，为人工授精技术的优越性作了有力宣传。
80年代中期到90年代初期，我国人工授精技术可以说是大面积推广应用和大发展时期。
有人曾作过估计，就我国蛋用型种鸡来说，目前可能有三分之一左右的种鸡接受人工授精，而肉用型种鸡可能不及六分之一，但这一比例在继续增加。
（二）人工授精的优越性
１．人工授精可以少养公鸡，即可以扩大公母鸡配种比例。
自然交配配种，一只公鸡只能配10～20只母鸡；
人工授精一只公鸡可配30～50只母鸡。
如一只公鸡一次采精获得0．5ml精液，精液品质好、浓度大。
用0.025ml精液给母鸡输精，便可输20只母鸡。
公鸡1周采精3次，可输60只母鸡，若用1：
2稀释，一周便可输120只母鸡，这样便可大大减少公鸡饲养量，节约饲料、鸡舍，降低成本。
２．可以克服公母禽体重相差悬殊，以及不同品种间家禽杂交造成的困难，从而提高受精率。
体重相差悬殊，造成自然交配不完全，特别是火鸡，受精率低，一般只有30％～60％，采用人工授精可提高到80％～90％。
肉鸡母系矮小型化，也存在公母体重相差问题，也可使用人工授精解决配种问题。
３．对腿部受伤或其他外伤的优秀公鸡，无法进行自然交配时，人工授精便可继续发挥该公鸡作用。
４．育种工作（或科学试验），使用宠养鸡人工授精，不用单间配种，是育种工作中一大发展，它记录方便、准确，并可节省垫草。
而且由于母鸡不接触地面，种蛋清洁、卫生，相应地提高孵化率。
５．如能使用冷冻保存的精液，则不受公鸡年龄、时间、地区以及国界的限制。
扩大“基因库”，即使某优秀公鸡死后，仍可继续利用它的精液繁殖后代。
采精与输精技术
（一）采精
１．采精方法采精方法有按摩法、隔截法、台鸡法和电刺激法。
其中以按摩法最适宜于生产中使用，是目前国内外采精的基本方法。
除电刺激法和台禽法仍用于水禽和特种禽类，或作特殊科学试验外，其他方法很少使用。
①按摩采精简便、安全、可靠、采出的精液干净，技术熟练者只需数秒钟，使可采到精液。
按摩采精分腹部按摩，背部按摩，腹背结合按摩三种。
腹背按摩通常由两人操作，一人保定公鸡，一人按摩与收集精液。
Ａ．保定公鸡常用的是保定员用双手各握住公鸡一只腿，自然分开，拇指扣其翅，使公鸡头部向后，类似自然交配姿势；
第二种是用特制的采精台保定，台面垫泡沫塑料再覆盖胶布，易于清洁。
保定员将公鸡置于台上，用右手握注双腿，左手握住两翅基部；
再一种方法是保定员将公鸡从笼内拖出，固定两腿并将公鸡胸部贴于宠门外，前两种方法有利于公鸡性反射，无损于公鸡胸部。
后一种方法虽速度快，但长期采用有害于公鸡健康，影响性反射，特别不宜用于肉用型公鸡。
Ｂ．按摩与收集精液操作者右手的中指与无名指间夹着采精杯，杯口朝外。
左手掌向下，贴于公鸡背部，从翼根轻轻推至尾羽区，按摩数次，引起公鸡性反射后，左手迅速将尾羽拨向背部，并使拇指与食指分开，跨捏于泄殖腔上缘两侧，与此同时，有手呈虎口状紧贴于泄殖腔下缘腹部两侧，轻轻抖动触摩，当公鸡露出交配器时，左手拇指与食指作适当压挤，精液即流出，右手便可将采精杯承接精液。
按摩采精也可一人操作，即采精员坐在凳上，将公鸡保定于两腿间，公鸡头朝左下侧，此时便可空出两手，照上述按摩方法收集精液，此法简便、速度快，可节省劳动力。
Ｃ．注意事项不粗暴对待公鸡，环境要安静。
不污染精液。
采精按摩时间不宜过久，捏挤动作不应用力过大，否则引起公鸡排粪、尿，透明液增多，或损伤粘膜而出血，从而污染精液，和降低精子的密度和活力（肉用型鸡比蛋用型鸡的透明液更多，采精时尤应注意）。
采到的精液应立刻置于25～30℃水温的保温瓶内，并于采精后30分钟内使用完毕。
②电刺激采精用3.4～10v交流电源，地线一端插入公鸡泄殖腔1.5～2.0cm深，火线末端点触公鸡任何一侧的股骨上端外某一部位，接触1～2秒，间歇4～5秒，如此反复4～5次，翻出泄殖腔，便可用手挤出精液。
２．采精前的准备
①公鸡的选择公鸡经育成期多次选择之后，还应在配种前2～3周内，进行最后一次选择，此时应特别注意选留健康，体重达标，发育良好，腹部柔软，按摩时有肛门外翻、交配器勃起等性反射的公鸡，井结合训练采精，对精液品质检查。
②隔离与训练公鸡在使用前3～4周内，转入单笼饲养，便于熟悉环境和管理人员。
在配种前2～3周内，开始训练公鸡采精，每天1次，或隔天1次，一旦训练成功，则应坚持隔天采精。
公鸡经3～4次训练，大部分公鸡都能采到精液，有些发育良好的公鸡，在采精技术熟练情况下，开始训练当天便可采到精液。
但也有些公鸡虽经多次训练仍不能建立条件反射，这样的公鸡如果属于没达到性成熟川应继续训练，加强饲养管理，反之应淘汰，此类公鸡在正常情况下约淘汰3％～5％。
③预防污染精液：
公鸡开始训练之前，将泄殖腔外周的1cm左右的羽毛剪除。
采精当天，公鸡须于采精前3～4小时绝食，以防排粪、尿。
所有人工授精用具，应清洗、消毒、烘干。
如无烘干设备，清洗干净后，用蒸溜水煮沸消毒，再用生理盐水冲洗2～3次方可使用。
３．采精次数鸡的精液量和精子密度，随射精次数增多而减少，公鸡经连续射精3～4次之后，精液中几乎找不到精子。
据Mcdaniel（1977）以肉用型公鸡及来航公鸡实行不同采精次数试验，肉鸡采精次数是1天1次、l天2次和1周3次，结果是1周采精3次的精液量和精子密度最高；
来航公鸡采精次数是1周1次，l周3次和1周5次，结果是1周采精3次，精液量较高，精子密度比1周采精5次的高，但与1周采精1次的相等。
公鸡经过48小时的性休息之后，精液量和精子密度都能恢复到最好水平；
休息6天后，其精液量与每天采精1次的相等。
为确保获得优质的精液以及完满地完成整个繁殖期的配种任务；
建议采用隔日采精制度。
若配种任务大，也可以在1周之内连续采精3～5天，休息2天，但应注意公鸡的营养状况及体重变化。
使用连续采精最好从公鸡30周龄以后。
（二）输精
１．输精操作输精母鸡必须先进行白痢检疫，凡阳性者一律淘汰，同时还须选择无泄殖腔炎症，中等营养体况的母鸡，产蛋率达70％时，开始输精，更为理想。
输精时两人操作，助手用左手握母鸡的双翅，提起，令母鸡头朝上，肛门朝下，右手掌置于母鸡耻骨下，在腹部<
柔软处施以一定压力，泄殖腔内的输卵管开口便翻出。
输精员便可将输精器，向输精管口正中轻轻插入输精。
笼养母鸡人工工精，不必从笼中取出母鸡，只需助手的左手握住母鸡双腿，稍稍提起，将母鸡胸部靠在笼门口处，右手在腹部施以压力，输卵管开口外露、输精员便可注入精液。
输精注意①当给母鸡腹部施以压力时，一定要着力于腹部左侧，因输卵管开口在泄殖腔左侧上方，右侧为直肠开口，如着力相反，便引起母鸡排粪；
②无论使用何种输精器，均须对准输卵管开口中央，轻轻插入，切忌将输精器斜插入输卵管，否则，不但不能输进精液，而已容易损伤输卵管壁；
③助手与输精员密切配合，当输精器插入的一瞬间，助手应立刻解除对母鸡腹部的压力，输精员便有效地将精液全部输入；
①注意不要输入空气或气泡；
⑤防止相互感染，应使一次性的输精器，切实做到一只母鸡换一套输精器，如使用滴管类的输精器，必须每输1只母鸡用消毒绵花擦拭输精器。
２．输精部位和深度不同部位或不同深度输精，对受精率均有影响。
原因是输精部位不同，精子到达受精部位的数量与时间有差异。
如阴道输精（特别是当子宫有硬壳蛋或输卵管内有蛋），精子则先进入子宫阴道的贮精腺内。
子宫或膨大部输精，全部精子（包括死、弱精子）可到达受精部位，而且只需15分钟，因此，刚输入的精子，可与产蛋后所排出的卵及时受精（专见精子在输卵管移行）。
子宫、膨大部输精，多用于研究或冷冻精液。
这两部位输精后，都有较长的持续受精时间，但胚胎早期死亡较多。
膨大部输精，需要外科手术，子宫输精则要通过长达8～10cm的阴道“V”形弯曲，而且又是强的括约肌，所以，从阴道插到子宫输精的技术较难掌握，同时这种方法对输卵管有很大的刺激，容易引起在子宫内的蛋早产，使卵巢和输卵管的机能受到干扰，停产若干时间。
阴道输精，输精器插入1～2cm为阴道始端输精（浅输精），4～5cm为中阴道输精，6～8cm为深阴道输精。
Wentaorih（1975）对火鸡和鸡作2cm和7cm输精，结果火鸡的受精率和受精持续均以前者高，而母鸡则无差异。
Burke（1969）在母鸡产蛋后作中阴道和深阴道输精，前者输精后产的第一枚蛋均为无精蛋，后者则有44％的受精率，子宫有硬壳蛋时输精，中阴道输精的受精率为87％，深阴道为80％。
长期实行深度输精，由于生殖道的生物学机能遭到破坏，使受精率、孵化率下降，甚至产蛋中断。
根据公鸡生殖器官解剖分析，在自然交配中，退化交配器官突入阴道，大约是在1～2cm的始端。
所以在生产中应采用浅阴道输精，更符合自然状态，而且输精速度快，受精率高，由于品种、体型的差异，推荐浅输精，轻型蛋鸡以1～2cm，中型蛋鸡和肉甲型鸡以2～3cm为宜。
但在母鸡产蛋率下降，精液品质较差的情况下，可用中阴道输精。
３．输精量与输精次数输精量与输精次数，取决于精液品质和持续受精时间的长短。
根据精子在输卵管存活时间，及母鸡受精规律的观察，母鸡须在1周之内，输入一定数量的优质精液，才可获得理想受精率。
但由于品种、个体、年龄、季节之间的差异，不能长期以固定剂量、固定间隔时间输精，否则不能持续获得高的受精率。
所以，应按上述因素调整输精量。
精液中的透明液因品种、个体有很大的差异，所以精子密度变化范围也很大。
一般肉用型鸡精液中透明液量大于蛋用型鸡，因此输精量就应有所不同。
由于母鸡年龄增长繁殖生理发生变化（如蛋重增加、蛋壳质量变差），使输卵管内环境改变，精子在改变了的环境中，其存活也发生一定影响；
若以相同剂量的精液给青年母鸡和产蛋末期母鸡输精，一般是前者持续受精的天数比后者长。
因此，对老龄母鸡输入的精子数要比青年母鸡多，而且输精的问隔时间也要缩短。
公鸡的繁殖力下降，常常是在母鸡繁殖力下降同时发生。
精液品质差（精子活力低，畸形率高），受精率、孵化率均不理想，因此，必须以较高的绝对精子数来补偿。
VanWenbeke（1979）认为，鸡的精液在2～5℃保存6～24小时，需要输入2亿精子，才能获得高受精率。
冷冻精液需输入0.1ml解冻精液，才能相当于0.03ml新鲜精液的效果。
输精量和输入精子数也不是越多越好，因为贮精腺对精子的容量是有限的。
输入过多的精子不能进入贮精腺内，而滞留在输卵管腔，输卵管腔对于长期滞留的精子则是一个不利的环境。
所以，除输入一定量的精液外，还应正确确定两次输精的最佳时距，才能维持高受精率。
在大规模人工授精中的良好经济效益，是以一定的输精量，既可延长输精间隔时间，而又保持高受精率。
根据我们的实践，建议每次给母鸡输入70＊10（6）～100X10（6）个优质精子；
蛋用型母鸡盛产期，每次输入原精液0.025ml，每5～7天输一次；
产蛋中、末期以0.05ml原精液，每4～5天输一次；
肉用型母鸡每次输入0.03ml原精液，每4～5天输一次，中、末期以0.05～0.06m1，每周输2次，或4天输一次。
如用稀释或保存精液输精，应根据稀释倍数和保存结果调整输精量。
母鸡首次输精应输入2倍的输精量，或每只母鸡连输两天，以确保受精所需精子数，提高受精率。
４．输精时间一天之内，用同样剂量精液在不同时间输精，受精率有明显差异，主要是子宫内有硬壳蛋，以及产蛋使输卵管内环境出现暂时异常，从而影响精子在输卵管中存活与运行。
在一天之内，于光照开始4～5小时母鸡产蛋与排卵最为集中，此时输精受精率一般低于下午输精，而且容易引起母鸡内产卵而造成腹腔炎。
美国Auburn大学（1978）报道，肉用型种鸡于每天21时输精，受精率最高。
Parker（1978）认为午后当母鸡子宫有软壳蛋输精，受精率最高，而子宫有硬壳蛋，在其产出前4小时或产出后、小时输精，均出现低受精率。
1980年北京农业大学的试验，证实，母鸡子宫有硬壳蛋时输精，对受精率有影响，而且硬壳蛋越接近临产时输精，受精率越低，在输精后2小时内，母鸡产蛋（即产蛋前2小时内输精），其一周种蛋的受精率仅为62.3％，输精后4小时以上产蛋，受精率为92.1％。
建议输精时间选择在一天内大部分母鸡产蛋后，或母鸡产蛋前4小时，产蛋后3小时以后输精。
具体时间安排应按当时光照制度而定。
通常在16～17点输精。
精液品质评定有关精液评定近年有许多新技术，如精子活力的各种染色剂，用以鉴别死活精子数。
密度评定除用分光光度计外，使用离心法测定，速度快而准确；
Chaudhuri（1988）研究用无色四唑染料，根据比色测定精子的氧化还原能力，从而估计其受精率，准确率很高。
但目前在生产中更多使用的还是常规评定方法。
精液常规检查项目如下。
（一）外观检查正常精液为乳白色，不透明液体。
混入血液为粉红色；
被粪便污染为黄褐色；
尿酸盐混入时，呈粉白色棉絮状块；
过量的透明液混入，则见有水渍状；
凡受污染的精液，品质均急剧下降，受精率不高。
（二）精液量的检查可用具有刻度的吸管、结核菌素注射器或其他度量器，将精液吸入，然后读数。
（三）活力检查于采精后20～30分钟内进行，取精液及生理盐水各一滴，置于载玻片一端，混匀，放上盖玻片，精液不宜过多，以布满载玻片、盖玻片的空隙，而又不溢出为宜。
在37℃条件，用200～400倍显微镜检查。
按下面三种活动方式估计评定：
直线前进运动，有受精能力，占其中比例多少评为0．1至0．8，0．9级；
圆周运动、摆动两种方式均无受精能力，活力高，密度大的精液，在显微镜下可见精子呈旋涡翻滚状态。
（四）密度检查
１．血细胞计数法：
用血细胞计数板来计算精子数较为准确。
先用红细胞吸管，吸取精液至0．5处，再吸入3％的氯化钠溶液至101处，即为稀释200倍。
摇匀，排出吸管前的空气，然后将吸管尖端放在计数板与盖玻片间的边缘。
使吸管的精液流入计算室内。
在显微镜下计数精子（见图515），计5个方格的精子总数。
5个方格应选位于一条对角线上或四个角各取一方格，再加中央一方格。
计算时只数精子头部3/4或全部在方格中的精子（见图5一16）。
最后按下公式，算出每毫升精液的精子数。
例：
5个方格中共计350个精子，即350÷
100＝3．5X10亿／ml。
计算结果1ml精液精子数为35亿。
２．精子密度估测法：
①密的显微镜下，可见整个视野布满精子，精子间距离几乎无空隙。
鸡每毫升精液约有精子40亿以上，鹅6～10亿以上，火鸡80亿以上。
②中等密度在一个视野中，精子之间距离明显。
鸡每毫升精液有20～40亿精子；
鹅3～6亿，火鸡50～80亿。
③稀的精子间有很大空隙。
鸡每毫升精液有精子20亿以下，鹅3亿以下，火鸡50亿以下。
（五）pH值检查使用精密试纸或酸度计，便可测出。
（六）畸形率检查取精液一滴于玻片上，抹片，自然干燥后，用95％酒精固定1～2分冲洗，再用0．5％龙胆紫（或红、蓝墨水）染3分钟，冲洗，干后即在显微镜下检查，数300～500个精子中有多少个畸形精子。
精液稀释与保存
（一）精液稀释
１．精液稀释的目的①鸡精液量少，密度大，稀释后可增加输精母鸡数，提高公鸡的利用率；
②精液经稀释可使精子均匀分布，保证每个输精剂量有足够精子数；
③便于输精操作；
④稀释液主要是给精子提供能量，保障精细胞的渗透平衡和离子平衡，提供缓冲剂，防止pH变化，延长精子寿命有利于保存。
２．稀释液的配制配制稀释液应严格按操作规程。
①化学药剂应为化学纯或分析纯。
使用新鲜的pH呈中性的蒸馏水或离子水；
②一切用具均应彻底洗涤干净、消毒，烘干；
③准确称量各种药物，充分溶解后，过滤、密封消毒（隔水煮沸或蒸气消毒30分钟）加热须缓慢，防止容器破裂及水分丢失；
④按要求调整pH值和渗透压，扩量用的稀释液pH值可在6-8。
7-4,用于保存的稀释液，则应以较低的pH值，渗透压以360～400mosmolkgH2OH20为宜；
⑤短期保存的稀释液中所用醣类，奶类和鸡蛋，除作为营养剂外，还是有防止精子发生“冷休克”作用。
所以应取鲜奶煮沸，去奶皮；
取鲜蛋，消毒蛋壳，抽取纯净卵黄，上两种物质应侍稀释液冷却后加入，⑤加入抗生素等生物制剂，亦应在稀释液冷却后加入。
3．稀释方法与稀释比例采精后应尽快稀释，将精液和稀释液分别装于试管中，井同时放人30℃保温瓶或恒温箱内，使精液和稀释液的温度相等或接近，避免两者温度过大，造成突然降温，影响精子活力。
稀释时稀释液应沿装有精液的试管壁缓慢加入，轻轻转动，使均匀混合。
作高倍稀释应分次进行，防止突然过激改变精子所处的环境。
精液稀释的比例，根据精液品质和稀释液的质量而定。
精液经过适当稀释有利于体外保存，如果室温（18～22℃）保存不超过1小时，稀释比例以l：
1～2为宜。
在0～5℃保存3、8或24～48小时,稀释比例宜l：
3～4。
冷冻精液，稀释比例常在1：
4～5，或更高。
但太高稀释比例，难于保证输入精子数，尤其作阴道输精，输精量若超过0．4m1，输入的精液就可能倒流于泄殖腔内。
4.稀释液配方介绍。
见表5-5
（二）精液保存
1．常温保存新鲜精液常用隔水降温，在18～20℃范围内，保存不超1小时用于输精，可使用简单的无缓冲的稀释液如A液。
目前我国常用的是生理盐水（0．9％氯化钠）或复方生理盐水用者更接近于血浆的电解质成分，稀释效果更好些。
稀释比例为1：
1。
2．低温保存鲜无污染精液经稀释后，在0～5℃条件下短期保存，使精子处于休眠状态，降低代谢率，从而达到保存精子活力和受精能力。
低温保存方法是在适宜的稀释液稀释之后，降温的速度要缓慢。
可以将30℃的稀释精液，先置于30℃水溶中，再放入调到2～5℃的电冰箱中。
如无电冰箱，可将装有稀释精液的试管，包以1cm厚的棉花，再放入塑料袋内或烧杯内。
而后直接放入装有冰块的广口保温瓶中。
这样便可达到逐渐降温的目的。
精液若在0～5℃，保存5～24小时，则应使用缓冲溶液来稀释，稀释比例可按1：
1～2，甚至1：
4～6。
稀释液的pH最宜在6．8～7．1。
据目前报道低温保存所用稀释液如表5-5的D,G的Lake液、C的SexTon液、E的苏联C-2液和H的BPSE液；
输精后收集2～8天的种蛋受精率都超过90％。
低温保存方法还有：
6oTOMO∧AOB（1973）提出的在精液稀释后，保存前使氧饱和的通氧保存法，Wishart（1981）在精液中通空气法；
以及在精液中增加气压等，都能获得较高受精率。
3．精液冷冻保存①鸡冷冻精液的现状和意义鸡的冷冻精液保存技术，自Shaffnerl941年用。
6℃冷冻30秒的精液输精获得第一只小鸡；
1949Potge第一个成功利用防冻剂（甘油），冷冻鸡的精液。
到目前已有40～50年历史，在这期间人们进行了许多研究，如冷冻后精子形态和结构的变化；
防冻剂选择，冷冻速度，冷冻后精液的输精量和输精部位等等，都有许多报道，所以目前鸡的冷冻技术已有很大进展。
但受精率的试验结果却很不一致，故冷冻精液迄今为止还没作为实用性技术广泛应用。
但据报道，前苏联已实际应用鸡的冷冻精液技术。
鸡的冷冻精液如能实际应用，无论是在经济上或育种上都很有意义；
利用冷冻精液可以加快育种进度；
可以防止优秀公鸡因病或意外事故死亡而失去种用价值；
可以 建立巨大的具有优良性状的基因库，以及保存品种资源等。
②鸡精液冷冻程序冷冻程序一般如下:
A。
采精：
精液必须为无粪便、无透明液污染。
B。
稀释：
稀释后降温平衡，也可在稀释液中加防冻剂后，降温，平衡一次进行；
C。
降温：
通常在5℃条件，置放若干时间；
D。
加防冻剂：
不同试验，使用防冻剂量不一致，如甘油一般用4％～10％，DMSO（二甲亚砜）4％～6％，乙烯二醇6％～12％；
E。
平衡：
即加入防冻剂对精液作用时间，一般在5℃条件下15分钟～2小时。
F，冷冻速度：
一是快速细管内冻结法，将稀释好的精液装入塑料细管，封口后在液氮蒸气中预冻，再将细管投入液氮中。
二是颗粒快速冻结法，在于冰上钻孔，将精液滴在冰孔中冻结后，投入液氮保存。
也有用氟板、铜纱网或铝盒、在液氮蒸气上滴冻。
三是两步冻结法，用可控温致冷器冻结，先是以每分钟降温1℃，一直降到-20℃或-30℃为止，然后急剧降温（或在3分钟内降到150℃），再投入液氮保存；
6。
分装：
有细管、安瓿、颗粒；
H。
解冻：
“常在0～5℃左右或30～40℃的水浴中解冻；
L．输精：
常用子宫输精。
阴道输精应先用离心方法除去甘油，阴道输精深度应以3～
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