人教版高中生物选修3知识点总结(改进版)Word文档格式.docx
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（2）最常用的载体是 质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：
λ噬菌体的衍生物、动植物病毒
（二）基因工程的基本操作程序
第一步：
目的基因的获取
1.目的基因是指：
编码蛋白质的结构基因或具有调控作用的因子。
2.目的基因的获取有三种方法：
从基因文库中获取；
PCR扩增目的基因；
人工化学法合成。
原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。
人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法
3.PCR技术扩增目的基因
（1）原理：
DNA复制
（2）过程：
加热至90～95℃DNA解链；
第二步：
冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；
第三步：
加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶（Taq酶）从引物起始互补链的合成。
（3）条件：
模板、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）、引物、脱氧核苷酸、精确的温度控制、能量
基因表达载体的构建
1.目的：
使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
2.组成：
目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因（﹢复制原点）
（1）启动子：
启动目的基因的转录。
是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。
（2）终止子：
终止目的基因的转录。
也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
（3）标记基因的作用：
是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
常用的标记基因是抗生素基因。
将目的基因导入受体细胞_
1.转化的概念：
是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2.常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：
采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法、花粉管通道法。
将目的基因导入动物细胞：
最常用的方法是显微注射技术。
此方法的受体细胞多是受精卵。
将目的基因导入微生物细胞：
Ca2+转化法
注意：
①将目的基因导入受体细胞，目前已开发出来的方法有很多种，每种方法都有利弊，适合于不同的受体细胞。
究竟选用哪种方法，要根据具体情况而定。
②以上介绍的几种方法，在导入受体细胞之前，都必须进行目的基因表达载体的构建，也就是说导入受体细胞的必须是重组DNA分子，而不能直接导入目的基因。
第四步：
目的基因的检测和表达
1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。
2.其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交，即分子杂交技术。
3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交。
4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定，进行抗虫抗病的接种试验观察植物是否出现抗虫抗病性状。
（三）基因工程的应用
（一）植物基因工程硕果累累
1.抗虫转基因植物2.抗病转基因植物
3.抗逆转基因植物
针对盐碱、干旱、低温、涝害等不利环境条件而培育的抗盐碱、耐旱、耐寒、抗涝
4.利用转基因改良植物的品质
主要成果
基因转移方法
转基因高赖氨酸玉米
将富含赖氨酸的蛋白质编码基因导入玉米细胞中表达成功
转基因延熟番茄
将控制番茄果实成熟的基因导入番茄
转基因矮牵牛
将与植物花青素代谢有关的基因导入矮牵牛
转基因烟草苗
将萤火虫的发光基因导入烟草
（二）动物基因工程前景广阔
动物基因工程在动物品种改良、建立生物反应器、器官移植等很多方面显示了广阔的应用前景。
1.用于提高动物生长速度
将外源生长激素基因导入动物体内，在其体内合成大量生长激素
2.用于改善畜产品的品质
3.用转基因动物生产药物
乳腺（房）生物反应器：
用基因工程技术实现动物乳腺生物反应器的操作过程与转基因动物操作过程相同。
为了使目标产品在奶中形成，需要使用乳腺组织中特异表达的启动子，要在编码目的蛋白质的基因序列前加上乳腺组织中特异表达的启动子构建成表达载体。
操作过程大致归纳为：
获取目的基因（例如血清白蛋白基因）→构建基因表达载体（在血清白蛋白基因前加特异表达的启动子）→显微注射导入哺乳动物受精卵中→形成胚胎→将胚胎送入母体动物→发育成转基因动物（只有在产下的雌性个体中，转入的基因才能表达）。
4.用转基因动物作器官移植的供体
（三）基因工程药物（主要是微生物）
基因工程药物种类：
细胞因子、抗体、疫苗、激素等。
用基因工程的方法，使外源基因在工程菌细胞内高效表达。
用DNA重组技术生产的人类蛋白药物种类（部分）
（四）基因治疗
（1）体外基因治疗
（2）体内基因治疗
基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效的手段。
总结：
动物基因工程的受体细胞是受精卵或胚胎干细胞，因为只有受精卵或胚胎干细胞接受目的基因后才能发育成具有新性状的动物个体。
植物细胞工程的受体细胞可以是受精卵也可以是其他的体细胞。
（四）蛋白质工程
蛋白质工程的基本原理：
它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构，又称为第二代的基因工程。
基本途径：
从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；
以下按照基因工程的一般步骤进行。
（注意：
目的基因只能用人工合成的方法）
设计中的困难：
如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列
（1）基因工程和蛋白质工程的比较
基因工程
蛋白质工程
相同
均是基因工程，蛋白质工程是第二代基因工程
不同
概念
P1
P27黑体字
目的
获得自然界中已存在的蛋白质
获得自然界中不存在的蛋白质
基本途径
遵循中心法则
先中心法则的逆推，再遵循中心法则
①蛋白质的工程的重点在于对已存在的蛋白质进行分子改造，改造的对象是编码蛋白质的DNA序列。
②对基因进行改造的蛋白质可以遗传下去，而直接改造蛋白质却不能遗传。
专题二细胞工程
（一）植物细胞工程
1.理论基础（原理）：
植物细胞全能性
2.植物组织培养技术
（1）过程：
离体的植物器官、组织或细胞――→愈伤组织――→试管苗――→植物体
（2）用途：
微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。
A.植物繁殖
微型繁殖：
可以高效快速地实现种苗的大量繁殖
作物脱毒：
采用茎尖组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有）
人工种子：
以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经人工薄膜包装得到的种子。
优点：
完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；
方便储藏和运输
B.作物新品种培育
单倍体育种：
a过程：
植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab四种类型）；
对花粉进行花药离体培养（技术是植物组织培养）；
得到单倍体植株；
对其幼苗时期进行秋水仙素处理；
得到了正常的纯合二倍体植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型）。
优点：
明显缩短育种年限
C.突变体利用：
在组织培养中会出现突变体，通过从有用的突变体中选育出新品种（如筛选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体。
植物组织培养过程容易出现突变体）
D.细胞产物的生产：
通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养，从而让它们能够产生大量的细胞产物。
（3）地位：
是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。
3.植物体细胞杂交技术
去除细胞壁获得原生质体—原生质体融合—杂种细胞—杂种细胞的筛选—杂种细胞再生出细胞壁—植物组织培养
（2）诱导融合的方法：
物理法包括离心、振动、电激等。
化学法是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。
（3）意义：
克服了远缘杂交不亲和的障碍。
（4）注意：
①脱分化起点：
离体的植物器官、组织、细胞（花粉）终点：
愈伤组织
再分化起点：
愈伤组织脱分化避光的原因：
有利于产生愈伤组织
再分化需光的原因：
有利于进行细胞分化和有机物的生成
②植物体细胞杂交完成的标志：
形成新的细胞壁（高尔基体）
③植物体细胞杂交的意义：
克服远缘杂交不亲和的障碍
（二）动物细胞工程
1.动物细胞培养
（1）概念：
动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。
（2）动物细胞培养的流程：
取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
（3）细胞贴壁和接触抑制：
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
（4）动物细胞培养需要满足以下条件
①无菌、无毒的环境：
培养液应进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中污染。
此外，应定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：
合成培养基成分：
糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
通常需加入血清、血浆等天然成分。
③温度：
适宜温度：
哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；
pH：
7.2～7.4。
④气体环境：
95%空气＋5%CO2。
O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（5）动物细胞培养技术的应用：
制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。
2.动物体细胞核移植技术和克隆动物
（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。
（2）受体选用去核卵（母）细胞的原因：
卵（母）细胞比较大，容易操作；
细胞质多，营养丰富。
（3）体细胞核移植的大致过程是：
高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养；
同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的卵母细胞，去核（显微操作）；
将供体细胞注入去核卵母细胞；
通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；
将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；
生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛
（4）体细胞核移植技术的应用：
①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育；
②保护濒危物种，增大存活数量；
③生产珍贵的医用蛋白；
④作为异种移植的供体；
⑤用于组织器官的移植等。
（5）体细胞核移植技术存在的问题：
克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。
3.动物细胞融合
（1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。
（3）动物细胞融合的意义：
克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。
（4）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：
细胞工程
植物体细胞杂交
动物细胞融合
理论基础
细胞的全能性、细胞膜的流动性
细胞增殖、细胞膜的流动性
融合前处理
酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果胶酶）
注射特定抗原，免疫处理正常小鼠
诱导手段
物理法:
离心、振动、电激
化学法：
聚乙二醇（PEG）
聚乙二醇
生物法：
灭活的病毒（灭活的仙台病毒）
诱导过程
原生质体的制备（酶解法）
原生质体融合（物、化法）
杂种细胞的筛选和培养
杂种植株的诱导与鉴定
正常小鼠免疫处理
动物细胞的融合（物、化、生法）
杂交瘤细胞的筛选与培养
专一抗体检验阳性细胞培养
单克隆抗体的提纯
用途和意义
克服远缘杂交的不亲和障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围
应用：
白菜-甘蓝等杂种植株
（1）制备单克隆抗体
（2）诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症
4.单克隆抗体
（1）抗体：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。
从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
（2）单克隆抗体的制备过程：
对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白（目的使小鼠产生浆细胞）；
提取B淋巴细胞；
同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；
促使它们细胞融合[注：
融合的结果是有很多不符合要求的；
如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选]；
在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞[特点是能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体]；
然后对它进行克隆化培养和抗体检测[筛选出能够分泌所需抗体的杂交瘤细胞]；
最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体。
（1、3、2、3）
1：
注射特定抗原
3：
在考虑细胞两两融合的情况下，有三种杂交细胞，其中只有一种是杂交瘤细胞。
2：
两次筛选①在选择培养基上筛选出杂交瘤细胞
②利用特定培养基，进行多次抗体检测筛选，筛选出能产生专一抗体的杂交瘤细胞
三次培养：
①在选择培养基上筛选时，即是培养的过程②在进行多次抗体检测之前都需要克隆化培养③筛选好的杂交瘤细胞进行体内或体外大规模培养。
（3）杂交瘤细胞的特点：
既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
（4）单克隆抗体的优点：
特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
原理
应用技术
细胞膜的流动性、细胞全能性
细胞融合、植物组织培养
动物细胞培养
细胞的增殖
动物细胞核移植
细胞核的全能性
动物细胞培养、显微注射、胚胎移植
生产单克隆抗体
细胞膜的流动性、细胞增殖
动物细胞融合、动物细胞培养
（5）单克隆抗体的作用：
作为诊断试剂：
准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
用于治疗疾病和运载药物：
主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。
拓展提升：
1.在植物组织培养过程中，为什么强调要无菌操作？
①污染后产生的杂菌会与培养物争夺养料②杂菌在生长过程中会产生对培养物有害的物质
2.植物组织培养过程中哪一阶段需要光或不需要光？
脱分化：
不需要光再分化：
需要光（叶绿体）、分化培养基
3.为什么选择胡萝卜含有形成层的部分?
因为这部分分裂比较旺盛，容易诱导形成愈伤组织
4.植物体细胞杂交过程中细胞融合完成及杂交完成的标志分别是什么？
融合完成：
产生新的细胞壁杂交完成：
产生杂种植株
5.植物体细胞杂交的原理是什么？
①细胞膜具有一定的流动性②植物细胞的全能性
6.植物体细胞杂交的结果及意义（优点）
结果：
产生杂种植株意义：
7.动物细胞培养的原理及选取的材料是什么？
有丝分裂材料：
动物胚胎、幼龄动物的组织、器官或细胞
8.细胞贴壁对培养瓶的要求是什么？
（细胞接触抑制）
培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒，易于贴附
9.动物细胞培养的条件有哪些？
①无菌、无毒的环境②营养条件（培养基成分）③温度和PH④气体环境（CO2的作用）
10.动物细胞核移植选用的受体细胞及得到动物的名称？
受体细胞：
减数第二次分裂中期的次级卵母细胞动物的名称：
克隆动物
11.动物细胞核移植得到的动物的性状与亲代的性状是否完全一致，为什么？
不完全一致；
因为大部分性状与供体性状相同，一部分性状与受体性状相同（细胞质基因控制的性状）
12.用于核移植的供体细胞为什么都选用传代10代以内的细胞？
10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型，不会发生基因突变。
13.诱导植物体细胞杂交与动物细胞融合方法的区别？
植物：
物理法（离心、振动、电激）化学法（聚乙二醇）
动物：
物理法（离心、振动、电激）化学法（聚乙二醇）生物法（灭活的病毒）
14.细胞融合的优点及应用
克服远缘杂交不亲和的障碍应用：
制备单克隆抗体（最主要的应用）
15.单克隆抗体制备过程用到的技术
动物细胞培养、动物细胞融合（克隆化培养和专一抗体检验阳性）
专题三胚胎工程
（一）动物胚胎发育的基本过程
1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。
经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。
（1）精子的发生：
精原细胞先进行有丝分裂后进行减数分裂；
变形过程中，细胞核为精子头的主要部分，高尔基体发育为顶体，中心体演变为精子的尾，线粒体在尾基部形成线粒体鞘膜，其他物质浓缩为原生质滴直至脱落。
[线粒体为精子运动提供能量]
（2）卵子的发生：
在胎儿时期，卵原细胞进行有丝分裂演变成初级卵母细胞[被卵泡细胞包围]，减数第一分次裂在排卵前后完成，形成次级卵母细胞和第一极体进入输卵管准备受精；
减数第二次分裂是在受精过程中完成的。
（3）受精：
精子获能（在雌性动物生殖道内）；
卵子的准备（排出的卵子要在输卵管中进一步成熟到减数第二次分裂中期才具备受精能力）；
受精阶段（卵子周围的结构由外到内：
放射冠、透明带、卵黄膜）
a.顶体反应：
精子释放顶体酶溶解卵丘细胞之间的物质，穿越放射冠。
b.透明带反应：
顶体酶可将透明带溶出孔道，精子穿入，在精子触及卵黄膜的瞬间阻止后来精子进入透明带的生理反应[它是防止多精子入卵受精的第一道屏障]；
c.卵黄膜的封闭作用：
精子外膜和卵黄膜融合，精子入卵后，卵黄膜会拒绝其他精子再进入卵内的过程[它是防止多精子入卵受精的第二道屏障]；
精子尾部脱落，原有核膜破裂形成雄原核，同时卵子完成减二分裂，形成雌原核[注意：
开始受精标志：
卵子的卵黄膜和透明带间隙中有第二极体出现。
完成受精标志：
雌雄原核融合成合子]。
（4）胚胎发育：
①受精场所是母体的输卵管。
②卵裂期：
特点：
细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。
③桑椹胚：
胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。
（之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞）。
④囊胚：
细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高）。
聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘。
中间的空腔称为囊胚腔[注：
囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化]。
⑤原肠胚：
内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔。
[细胞分化在胚胎期达到最大限度]
（二）胚胎工程的应用
1.体外受精和胚胎的早期培养[体外受精属有性生殖过程]
（1）卵母细胞的采集和培养：
主要方法：
用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。
第二种方法：
从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞；
第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。
采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。
（2）精子的采集和获能：
在体外受精前，要对精子进行获能处理。
（3）受精：
获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。
（4）胚胎的早期培养：
精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。
培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。
当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。
不同动物胚胎移植的时间不同。
（牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在8～16个细胞阶段移植。
）
2.胚胎移植
（1）胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。
其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体称为“受体”。
（供体为优良品种，作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。
地位：
如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎，都必须经过胚胎移植技术才能获得后代，是胚胎工程的最后一道“工序”。
实质：
早期胚胎在相同生理环境下空间位置的转移。
（2）意义：
大大缩短了供体本身的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖能力。
（3）生理学基础：
①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。
这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。
②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。
这就为胚胎的收集提供了可能。
③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。
这为胚胎在受体的存活提供了可能。
④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。
（4）基本程序主要包括：
①对供、受体的选择和处理。
选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。
并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。
②配种或人工授精。
③对胚胎的收集、检查、培养或保存。
配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的
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