推荐下载关于海蓬子总黄酮提取工艺优化研究Word下载.docx
《推荐下载关于海蓬子总黄酮提取工艺优化研究Word下载.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《推荐下载关于海蓬子总黄酮提取工艺优化研究Word下载.docx（28页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
在欧洲，海蓬子被称为减肥草[2]。
除含有人体必需的氨基
酸、微量元素、维生素外，其中的胡萝卜素含量超过普通蔬菜的40倍[4]，可作为绿色
有机蔬菜、保健食品、保健油等的原料。
栽培海蓬子还有益于改良生态环境，它吸收
与利用海水水产养殖池排污物的营养;
构建生态湿地，为野生禽类提供食物和栖息地等
[5]。
海蓬子在我国江苏、辽宁、河北、山东等省都有生长，多见于盐沼地、盐湖旁及
海滩。
从海蓬子中分离得到槲皮素（quercetin）、槲皮素-3-O--D-葡萄糖苷（quercetin-3-O-
-D-glucoside）、芸香苷（rutin）、异鼠李素-3-O--D-葡萄糖苷（isorhamnetol-3-O--D-
glucoside）等黄酮类物质[6～8]，但还未见提取工艺研究的报道。
为了提高海蓬子中总
黄酮提取工艺的科学性，进一步研究和开发利用海蓬子，特以总黄酮为考察指标，采
用单因素和正交实验法确定最佳的提取条件。
黄酮类化合物多采用水、乙醇、丙酮等
溶剂提取，总黄酮包括黄酮苷及其苷元，黄酮苷易容易水和乙醇，但苷元的水溶性
差，故本研究以乙醇为提取溶剂。
1材料与仪器
新鲜海蓬子由江苏省盐城市绿苑海蓬子开发有限公司提供。
全草淋洗沥干后70℃鼓
风烘干，粉碎过60目筛，密封于阴暗干燥处保存备用。
芦丁（生化试剂）购自中国医药
2
集团上海化学试剂公司，95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯。
UV-
1200紫外可见分光光度计（上海美普达仪器有限公司）、DK-600电热恒温水槽（上海精密
实验设备有限公司）、电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）、FZ102微型植物粉碎机
（天津市泰斯特仪器有限公司）。
2方法
海蓬子总黄酮含量的测定NaNO2-Al（NO3）3比色法[9]。
2.1芦丁标准曲线的绘制[10]用分析天平称取芦丁标准品0.0250g，用30%的乙醇溶
解，定容至100ml，摇匀，得到0.25mg/ml的芦丁标准溶液，备用。
分别准确吸取芦
丁标准溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0ml于25ml的容量瓶中，用30%乙醇补至约
12.5ml，加入5%亚硝酸钠1.0ml，摇匀，放置5min，加入10%硝酸铝溶液1.0ml，
摇匀，放置6min。
加入1.0mol/L氢氧化钠溶液5ml，用30%乙醇定容至刻度，摇
匀，放置10min。
用空白液作参比，用紫外可见分光光度计测定510nm处的吸光度。
所得标准曲线为芦丁浓度Y和吸光值X的关系，所得回归方程为：
Y=11.363X-0.034
2，r=0.9998。
2.2海蓬子总黄酮的提取及测定称取1.00g海蓬子粉末于锥形瓶中，按一定的料液
比，加入一定浓度溶剂在一定温度下提取一定时间。
离心得上清提取液，加入相应的
溶剂定容至100ml。
3
准确吸取定容后的2ml水提取液或乙醇提取液于25ml容量瓶中，用30%乙醇补至
12.5ml。
加入5%亚硝酸钠1.0ml，摇匀，放置5min后加入10%硝酸铝1.0ml，放置
6min后再加入1mol/L氢氧化钠5ml，混匀。
用30%乙醇定容至刻度，10min后以空
白液为参比测定510nm处的吸光度。
样品黄酮得率的计算公式如下：
X（%）=cv22510-3MV1100%
X=样品总黄酮得率（%）;
C=提取液中的总黄酮含量（mg/ml）;
M=海蓬子样品的质量（g）;
V1=测定吸光度所用的样液体积（ml）;
V2=样品定容后的体积（ml）。
3结果
4
3.1提取温度对总黄酮得率的影响称取1.00g样品，加入80ml70%的乙醇，分别在
20，40，60，80，100℃温度下提取60min，考察提取温度对黄酮得率的影响。
结果
（图1）表明，温度达到80℃时，黄酮的得率最高。
因此最佳提取温度选择为80℃。
3.2提取时间对黄酮得率的影响称取1.00g样品，加入80ml70%的乙醇中，在80℃
下提取，考察提取时间对黄酮得率的影响。
结果（图2）表明，随着提取时间的延长得率
逐渐增加，当乙醇提取时间为180min时，得率达到最高，随着浸提时间的延长，得
率反而下降，因此乙醇提取最佳时间为180min。
3.3固液比对总黄酮得率的影响称取1.00g样品，分别加入20，40，60，80，100
ml的70%乙醇中（固液比分别为1∶20，1∶40，1∶60，1∶80,1∶100），分别在80℃
下提取60min，考察固液比对黄酮得率的影响。
结果（图3）表明，随着固液比的增加，
海蓬子总黄酮的得率逐渐提高。
当乙醇的固液比达到1∶80（g∶ml）时，得率出现峰
值，再提高固液比，得率趋于平缓，因此最佳提取固液比为1∶80。
图3固液比对黄酮得率的影响图4乙醇浓度对黄酮得率的影响
3.4乙醇浓度对黄酮得率的影响称取1.00g样品，分别加入15%，30%，40%，
50%，60%，70%，80%，90%的乙醇溶液60ml，80℃浸提60min，考察乙醇浓度对
黄酮得率的影响。
由结果（图4）可知，黄酮得率随着乙醇浓度的增大而增加，当浓度达
5
到70%时得率最大;
当乙醇浓度继续增加时，得率有较大幅度的下降，故最佳乙醇浓度
为70%。
3.5海蓬子中总黄酮提取条件的优化以乙醇浓度（60%，70%，80%）、提取时间
（120，150，180min）、固液比（1∶80，1∶90，1∶100）为正交因素，在80℃条件下，
海蓬子中总黄酮的得率为指标，设计3因素3水平正交实验。
结果见表1。
表1海蓬
子黄酮乙醇提取法正交实验结果
tips:
感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。
仅供参阅！
大蒜等12种中草药的体外抑菌实验研究
【摘要】目的研究大蒜、辣椒粉、黄柏等12种常见中草药的体外抑菌性能及培养
6
基对中草药抑菌效果的影响。
方法采用药敏纸片扩散法确定各中草药对各病原菌抑菌
性能及最小抑菌浓度（MIC）。
结果辣椒粉对副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有抑制作
用，MIC分别为12.5%，12.5%;
大蒜对副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有抑菌作
用，MIC分别为6.25%，12.5%;
黄柏等常见中草药对各病原菌也都有一定的抑菌效
果。
结论大蒜、辣椒提取物对特定病原菌有抑制作用，黄柏等常见中草药对各种病原
菌均有较强抑菌效果。
培养基显著影响中草药抑菌效果。
【关键词】辣椒;
大蒜;
黄柏;
药敏纸片扩散法;
体外抑菌
Abstract：
ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectofcapsicum,garlicandseveralherbson
pathogens.MethodsTheminimuminhibitingconcentration（MIC）oftheseherbsonchosen
pathogenswasdeterminedbyK-Bprogramm.ResultsCapsicumcouldinhibitS.typhimurium
andS.aureusinvitrowithMIC12.5%and12.5%respectively;
Garlicshowedinhibitory
effectonS.typhimuriumandS.aureuswithMIC6.25%and12.5%respectively;
Otherherbs
hadgreatinhibitoryeffectonchosenpathogens.ConclusionCapsicumandgarliccaninhibit
somepathogensinvitro.TraditionalChineseherbssuchasBarkofChineseCorktreecan
inhibitpathogensgreatly.Mediumaffectsinhibitingeffectgreatly.
Keywords：
Capsicum;
Garlic;
BarkofChineseCorktree;
K-Bprograme;
Inhibitory
effectinvitro
7
大蒜是人们日常饮食中的重要调味品，具有健胃开食、增进消化的功能，其辛辣成
分大蒜素对多种病原菌及深部感染真菌有抑制作用[1，2]，在禽类及水产养殖方面对养
殖动物能起到防病保健和促进生长的作用[3，4];
此外，大蒜还有良好的抗氧化作用，
可加入食用油延长其保质期[5];
在疾病预防方面，经常进食大蒜可以提高血浆及红细胞
抗氧化性能[6]，并能有效降低血压，预防动脉粥样硬化和心脑血管疾病[7，8];
大蒜还
可以抑制结肠癌细胞的生长[9]，也可通过抑制硝酸盐还原细菌繁殖和亚硝酸盐合成预
防胃癌的发生[10];
除大蒜素外，大蒜还含有大蒜多糖等多种保健成分，可以和银杏叶
制成天然保健饮料[11，12]。
辣椒也是一种重要的日常调味品，有增进食欲和维持消化
道正常菌群平衡的功能;
辣椒碱对大肠杆菌、酵母等多种病原菌有抑制作用[13，14]。
大蒜中大蒜素和辣椒中辣椒碱有抑菌作用，这并不排除大蒜、辣椒中其它抑菌成分的
存在，也不能完全代表它们的抑菌性能。
本实验对辣椒水煎剂和大蒜乙醇制剂的抑菌
性能加以研究，以期完善这两种保健调味品的抑菌性能研究。
黄柏、蒲公英等常见中
草药常用于微生物性传染病的治疗，也可用作防病饲料添加剂，但它们对常见病原菌
的抗菌谱及抗菌浓度尚不明确，限制了它们在中医药和饲料添加剂方面的应用。
在
此，我们探讨了大蒜、辣椒、黄柏等12种药用植物提取物对大肠杆菌、副伤寒沙门氏
菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌等常见病原菌的抗菌谱及最小抑菌浓度（MIC），希望能
为它们的医药用途及生产应用提供科学依据。
1.1菌株和培养基大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌为本实验
室存留;
大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌和枯草杆菌培养基为营养琼脂No.3，金黄色葡萄球
菌培养基为葡萄球菌琼脂110和营养琼脂No.3。
8
1.2仪器垂直流超净工作台，DH3600A型电热恒温培养箱，手提式高压灭菌锅，2D-
85型恒温振荡器，TU-1800型紫外可见分光光度仪，ZD-85型恒温摇床，AB204-S基
础型电子分析天平等。
1.3中草药大蒜和辣椒购自农贸市场，其它中草药购自中药店。
2.1大蒜素提取物的制备将去皮大蒜100g捣碎研细，乙醇浸提，浸提液挥发浓缩至
200ml，获得50%的大蒜浸提物，并用乙醇作二倍系列稀释。
2.2辣椒、黄柏等煎剂类中草药提取物制备中草药粉碎过筛，进行干物质含量（DMC）
测定;
各中草药粉50g（以干物质量计）水煎制剂并浓缩至100ml，提取物浓度为50%，
用水做二倍系列稀释。
2.3药敏纸片抑菌实验[15]以6mm直径滤纸片在各中草药各稀释梯度浸提液中浸泡
并晾干，置于涂有特定菌量的平板分区内，37℃过夜培养后记录各中草药提取物各稀
释梯度对几种病原菌的抑菌情况，记录抑菌圈直径及最小抑菌浓度（MIC），各定性及定
9
量抑菌实验均重复3次。
2.4培养基对中草药抑菌效果的影响金黄色葡萄球菌分别涂布于营养琼脂No.3和葡
萄球菌琼脂110，以药敏纸片法观察各中草药制剂对两种培养基上金黄色葡萄球菌的抑
菌效果。
2.5涂布菌含量的确定涂布菌原液制作10倍稀释梯度系列，以平板涂布法计算涂布
菌液浓度。
3.1涂布菌含量测定以上述方法测定了各病原菌涂布菌液浓度。
大肠杆菌2.8108/ml;
副伤寒沙门氏菌1.1108/ml;
金黄色葡萄球菌4.1108个/ml;
枯草杆菌1.3106个/ml。
3.2大蒜提取物的抑菌结果从表1可以看出，大蒜乙醇提取物对副伤寒沙门氏菌和生
长于葡萄球菌琼脂110上的金黄色葡萄球菌有抑制作用，MIC分别为6.25%和12.5%;
在本研究浓度范围内对大肠杆菌和枯草杆菌无抑菌作用。
表1大蒜提取物对病原菌的
抑菌效果
10
3.3辣椒提取物的抑菌结果表2显示，辣椒浸提物对副伤寒沙门氏菌和生长于葡萄球
菌琼脂110上的金黄色葡萄球菌有抑菌作用，MIC均为12.5%;
对大肠杆菌和枯草杆菌
未发现抑菌作用。
表2辣椒提取物对病原菌的抑菌效果
3.4黄柏等中草药制剂抑菌结果黄柏、连翘等常见中草药的抗菌谱及最小抑菌浓度
（MIC）（见表3），其中黄芪、蒲公英、秦皮、乌梅、黄芩等中草药为对4种病原菌几乎
都有抑菌作用，且抑菌作用较强，尤其是乌梅和秦皮对各种病原菌都有很强的抑菌作
用。
所选中草药中，只有青黛对4种病原菌均不抑制。
表3黄柏等中草药对病原菌的
最小抑菌浓度（MIC）%
3.5培养基对中草药制剂抑制金黄色葡萄球菌效果的影响培养基对中草药抑菌效果有
影响。
从表4可以看出，各类中草药制剂对葡萄球菌琼脂110上的金黄色葡萄球菌抑
菌效果明显好于生长于营养琼脂No.3上的抑菌效果，其中大蒜、辣椒、秦皮、远志制
剂对前者抑菌作用明显，而对后者没有抑菌作用;
大黄、乌梅、黄芩等制剂对前者的抑
菌效果也显著好于后者。
这种抑菌效果的差异可以从金黄色葡萄球菌在两种培养基上
的生长情况来说明，用两种培养基以平板计数法分别测定涂布菌液浓度，接种量完全
相同，通过营养琼脂No.3测得菌液浓度为4.1108个/ml，而用葡萄球菌琼脂110所得
结果为3.1108个/ml，说明营养琼脂No.3更适合金黄色葡萄球菌的生长，因而各类中
草药对其上金黄色葡萄球菌抑菌效果略差一些，这与李仲兴等（2000）的结论一致[16]。
从另一角度也表明，培养基和涂布菌量对药敏纸片法中草药抑菌效果有较大影响。
表4
培养基对中草药抑制金黄色葡萄球菌效果的影响%
11
4讨论
由表1正交实验结果可见，
乙醇浓度对海蓬子总黄酮得率的影响程度最大，提取时间和固液比的影响均不显著，
影响程度大小顺序为：
乙醇浓度提取时间固液比，最佳乙醇提取条件为A2B1C3，
即乙醇浓度70%，提取时间120min，固液比1∶100。
4结论
以乙醇为溶剂提取海蓬子总黄酮，研究了单因素对提取得率的影响，通过正交实验
确定了最佳提取工艺条件为：
乙醇浓度70%，提取时间120min，固液比1∶100，此
时海蓬子总黄酮的得率是2.86%。
乙醇浓度对得率的影响程度最大，提取时间和固液
比的影响均不显著。
【参考文献】
[1]洪立洲,丁海荣,杨智青，等.盐生植物海蓬子的研究进展及前景展望[J].江西农业学
报2008,20（7）:
46.
12
[2]吕忠进,EdwarrdPG.全海水灌溉的作物北美海蓬子（上）[J].世界农业，2001，2：
14.
[3]张爱军，刘发义，沈继红,等.海蓬子种子营养成分分析及制备共轭亚油酸的研究
[J].海洋科学进展,2003,21
（1）:
89.
[4]张美霞，刘兴宽.北美海蓬子引种盐城滩涂后生长条件和营养组成比较[J].食品
科技，2007，32（5）：
104.
[5]魏成金，尹金来，徐阳春.不同氮磷水平对北美海莲子生长和品质的影响[J].南
京农业大学学报，2006，29（4）：
59.
[6]ParkSH,KimKS.IsolationandIdentificationofantioxidantflavonoidsfromSalicornia
herbaceaL[J].JournaloftheKoreanSocietyforAppliedBiologicalChemistry，2004，
47
（1）：
120.
[7]KongCS,KimMM,etal.FlavonoidglycosidesisolatedfromSalicorniaherbaceainhibit
matrixmetalloproteinaseinHT1080cell[J].ToxicologyinVitro,2008,22（7）:
1742.
13
[8]MinJG,LeeDS,KimTJ,etal.ChemicalCompositionofSalicorniaHerbaceaL[J].
JournalFoodScienceandNurtrition，2002，7：
105.
[9]张海悦，王黎兵，郭新力.狭叶荨麻总黄酮的测定[J].食品科技，2007，12：
181.
[10]赵文红,赵翾,白卫东,等.柿叶黄酮化合物提取工艺研究[J].陕西科技大学学
报，2007,25（5）:
54.
医药卫生栏目
14
升级会员 