五日生化需氧量Word下载.docx

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目前国内外普遍规定于20±

1℃培养5d,分别测定样品培养前后得溶解氧,二者之差即为BOD5值,以氧得毫克/升（mg/L）表示。

对某些地面水及大多数工业废水,因含较多得有机物,需要稀释后再培养测定,以降低其浓度与保证有充足得溶解氧。

稀释得程度应使培养中所消耗得溶解氧大于2mg/L,而剩余溶解氧在1mg/L以上。

为了保证水样稀释后有足够得溶解氧,稀释水通常要通入空气进行曝气（或通入氧气）,以便稀释水中溶解氧接近饱与。

稀释水中还应加入一定量得无机营养盐与缓冲物质（磷酸盐、钙、镁与铁盐等）,以保证微生物生长得需要。

对于不含或少含微生物得工业废水,其中包括酸性废水、碱性废水、高温废水或经过氯化处理得废水,在测定BOD5时应进行接种,以引入能分解废水中有机物得微生物。

当废水中存在着难于被一般生活污水中得微生物以正常速度降解得有机物或含有剧毒物质时,应将驯化后得微生物引入水样中进行接种。

本方法适用于测定BOD5大于或等于2mg/L,最大不超过6000mg/L得水样。

当水样BOD5大于6000mg/L,会因稀释带来一定得误差。

仪器

（1）恒温培养箱（20℃±

1℃）

（2）5—20L细口玻璃瓶

（3）1000—2000ml量筒

（4）玻璃搅棒:

棒得长度应比所用量筒高度长200mm。

在棒得底端固定一个直径比量筒底小、并带有几个小孔得硬橡胶板。

（5）溶解氧瓶:

250ml到300ml之间,带有磨口玻璃塞并具有供水封用得钟形口。

（6）虹吸管,供分取水样与添加稀释水用。

试剂

1．磷酸盐缓冲溶液

将8、5g磷酸二氢钾（KH2PO4）,21、75g磷酸氢二钾（K2HPO4）,33、4g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·

7H2O）与1、7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中,稀释至1000ml。

此溶液得pH应为7、2。

2．硫酸镁溶液

将22、5g七水合硫酸镁（MgSO4·

7H2O）溶于水中,稀释至1000ml。

3．氯化钙溶液

将27、5g无水氯化钙溶于水中,稀释至1000ml。

4．氯化铁溶液

将0、25g六水合氯化铁（FeCl3·

6H2O）溶于水中,稀释至1000ml。

5．盐酸溶液（0、5mol/L）

将40ml盐酸（ρ=1、18g/ml）溶于水中,稀释至1000ml。

6．氢氧化钠溶液（0、5mol/L）

将20g氢氧化钠溶于水中,稀释至1000ml。

7．亚硫酸钠溶液（1/2Na2SO3=0、025mol/L）

将1、575g亚硫酸钠溶于水中,稀释至1000ml。

此溶液不稳定,需每天配制。

8．葡萄糖—谷氨酸标准溶液

将葡萄糖（C6H12O6）与谷氨酸（HOOC—CH2—CH2—CHNH2—COOH）在103℃干燥1h后,各称取150mg溶于水中,移入1000ml容量瓶内并稀释至标线,混合均匀。

此标准溶液临用前配制。

9．稀释水

在5—20L玻璃瓶内装入一定量得水,控制水温在20℃左右。

然后用无油空气压缩机或薄膜泵,将吸入得空气先后经活性炭吸附管及水洗涤管后,导入稀释水内曝气2—8h,使稀释水中得溶解氧接近于饱与。

停止曝气亦可导入适量纯氧。

瓶口盖以两层经洗涤晾干得纱布,置于20℃培养箱中放置数小时,使水中溶解氧含量达8mg/L左右。

临用前每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸缓冲溶液各1ml,并混合均匀。

稀释水得pH应为7、2,其BOD5应小于0、2mg/L。

10．接种液

可选择以下任一方法,以获得适用得接种液。

（1）城市污水,一般采用生活污水,在室温下放置一昼夜,取上清液供用。

（2）表层土壤浸出液,取100g花园或植物生长土壤,加入1L水,混合并静止10min。

取上清液供用。

（3）用含城市污水得河水或湖水。

（4）污水处理厂得出水。

（5）当分析含有难于降解物质得废水时,在其排污口下游3—8km处取水样作为废水得驯化接种液。

如无此种水源,可取中与或经适当稀释后得废水进行连续曝气,每天加入少量该种废水,同时加入适量表层土壤或生活污水,使能适应该种废水得微生物大量繁殖。

当水中出现大量絮状物,或检查其化学需氧量得降低值出现突变时,表明适用得微生物已进行繁殖,可用做接种液。

一般驯化过程需要3—8d。

11．接种稀释水

分取适量接种液,加于稀释水中,混匀。

每升稀释水中接种液加入量为:

生活污水1—10ml;

或表层土壤浸出液20—30ml;

或河水、湖水10—100ml。

接种稀释水得pH值应为7、2,BOD5值以在0、3—1、0mg/L之间为宜。

接种稀释水配制后应立即使用。

步骤

1．水样得预处理

（1）水样得pH值若超出6、5—7、5范围时,可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节pH近于7,但用量不要超过水样体积得0、5%。

若水样得酸度或碱度很高,可改用高浓度得碱或酸进行中与。

（2）水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时,可使用经驯化得微生物接种液得稀释水进行稀释,或提高稀释倍数以减少毒物得浓度。

（3）含有少量游离氯得水样,一般放置1—2h,游离氯即可消失。

对于游离氯在短时间不能消散得水样,可加入亚硫酸钠溶液,以除去之。

其加入量由下述方法决定。

取已中与好得水样100ml,加入1+1乙酸10ml,10%（m/V）碘化钾溶液1ml,混匀。

以淀粉溶液为指示剂,用亚硫酸钠溶液滴定游离碘。

由亚硫酸钠溶液消耗得体积,计算出水样中应加入亚硫酸钠溶液得量。

（4）从水温较低得水域或富营养化得湖泊中采集得水样,可遇到含有过饱与溶解氧,此时应将水样迅速升温至20℃左右,在不使满瓶得情况下,充分振摇,并时时开塞放气,以赶出过饱与得溶解氧。

从水温较高得水域或废水排放口取得得水样,则应迅速使其冷却至20℃左右,并充分振摇,使与空气中氧分压接近平衡。

2．不经稀释水样得测定

溶解氧含量较高、有机物含量较少得地面水,可不经稀释,而直接以虹吸法,将约20℃得混匀水样转移入两个溶解氧瓶内,转移过程中应注意不使产生气泡。

以同样得操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许,加塞。

瓶内不应有气泡。

其中一瓶随即测定溶解氧,另一瓶得瓶口进行水封后,放入培养箱中,在20±

1℃培养5d。

在培养过程中注意添加封口水。

从开始放入培养箱算起,经过五昼夜后,弃去封口水,测定剩余得溶解氧。

3．需经稀释水样得测定

（1）稀释倍数得确定:

根据实践经验,提出下述计算方法,供稀释时参考。

●地面水,由测得得高锰酸盐指数与一定得系数得乘积,即求得稀释倍数,见下表。

由高锰酸盐指数与一定系数得乘积求得得稀释倍数

高锰酸盐指数（mg/L）

系数

<

5

---

5-10

0、2、0、3

10-20

0、4、0、6

>

20

0、5、0、7、1、0

●工业废水,由重铬酸钾法测得得COD值来确定。

通常需做三个稀释比。

使用稀释水时,由COD值分别乘以系数0、075、0、15、0、225,即获得三个稀释倍数。

使用接种稀释水时,则分别乘以0、075、0、15与0、25三个系数。

注:

CODcr值可在测定COD过程中,加热回流至60min时,用由校核试验得苯二甲酸氢钾溶液按COD测定相同操作步骤制备得标准色列进行估测。

（2）稀释操作:

●一般稀释法

按照选定得稀释比例,用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000ml量筒中,加入需要量得均匀水样,再引入稀释水（或接种稀释水）至800ml,用带胶版得玻棒小心上下搅匀。

搅拌时勿使搅棒得胶版漏出水面,防止产生气泡。

按不经稀释水样得测定相同操作步骤,进行装瓶、测定当天溶解氧与培养5d后得溶解氧。

另取两个溶解氧瓶,用虹吸法装满稀释水（或接种稀释水）作为空白试验。

测定5d前后得溶解氧。

●直接稀释法:

直接稀释法就是在溶解氧瓶内直接稀释。

在已知两个容积相同（其差<

1ml）得溶解氧瓶内,用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水）,再加入根据瓶容积与稀释比例计算出得水样量,然后用稀释水（或接种稀释水）使刚好充满,加塞,勿留气泡于瓶内。

其余操作与上述一般稀释法相同。

BOD5测定中,一般采用叠氮化钠改良法测定溶解氧。

如遇干扰物质,应根据具体情况采用其她方法（详见溶解氧测定方法）。

计算

1.不经稀释直接培养得水样

BOD5（mg/L）=c1-c2

式中,c1--水样在培养前得溶解氧浓度（mg/L）;

c2--水样经5d培养后,剩余溶解氧浓度（mg/L）。

2．经稀释后培养得水样

BOD5（mg/L）=

式中,B1---稀释水（或接种稀释水）在培养前得溶解氧（mg/L）;

B2--稀释水（或接种稀释水）在培养后得溶解氧（mg/L）;

f1--稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占比例;

f2--水样在培养液中所占比例。

f1、f2得计算:

例如培养液得稀释比为3%,即3份水样,97份稀释水,则f1=0、97,f2=0、03。

精密度与准确度

三个实验室分析含5mg/L葡萄糖得统一分发标准液得BOD5值,实验室内相对标准偏差为5、6%;

实验室间相对标准偏差为32%。

三个实验室分析含300mg/L葡萄糖（BOD5为210mg/L）得统一分发标准液得BOD5值,实验室内相对标准偏差为2、1%;

实验室间相对标准偏差为2、1%。

注意事项

（1）水中有机物得生物氧化过程,可分为两个阶段。

第一阶段为有机物中得碳与氢,氧化生成二氧化碳与水,此阶段称为碳化阶段。

完成碳化阶段在20℃大约需要20d左右。

第二阶段为含氮物质及部分氨,氧化为亚硝酸盐及硝酸盐,称为硝化阶段。

完成硝化阶段在20℃时需要约100天。

因此,一般测定水样BOD5时,硝化作用很不显著或根本不发生硝化作用。

但对于生物处理池得出水,因其中含有大量得硝化细菌。

因此,在测定BOD5时也包括了部分含氮化合物得需氧量。

对于这样得水样,如果我们只需要测定有机物降解得需氧量,可以加入硝化抑制剂,抑制硝化过程。

为此目得,可在每升稀释水样中加入1ml浓度为500mg/L得丙烯基硫脲（ATU,C4H8N2S）或一定量固定在氯化钠上得2-氯代-6-三氯甲基吡啶（TCMP,Cl—C5H3N—C—CH3）,使TCMP在稀释样品中得浓度约为0、5mg/L。

（2）玻璃器皿应彻底洗净。

先用洗涤剂浸泡清洗,然后用稀盐酸浸泡,最后依次用自来水、蒸馏水洗净。

（3）在两个或三个稀释比得样品中,凡消耗溶解氧大于2mg/L与剩余溶解氧大于1mg/L时,计算结果时,应取其平均值。

若剩余溶解氧小于1mg/L,甚至为零时,应加大稀释比。

溶解氧消耗量小于2mg/L,有两种可能,一就是稀释倍数过大;

另一种可能就是微生物菌种不适应,活性差,或含毒物质浓度过大。

这时可能出现在几个稀释比中,稀释倍数大得消耗溶解氧反而较多得现象。

（4）为检查稀释水与接种液得质量,以及化验人员得操作水平,可将20ml葡萄糖—谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000ml,按测定BOD5得步骤操作。

测得得BOD5得值应在180-230mg/L之间。

否则应检查接种液、稀释水得质量或操作技术就是否存在问题。

（5）水样稀释倍数超过100倍时,应预先在容量瓶中用水初步稀释后,再取适量进行最后稀释培养。