医疗器械产品辐照灭菌剂量验证方案与报告Word下载.docx
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2器具及试剂
2.1器材试管
容量瓶
三角烧瓶
酒精灯
灭菌剪刀、铁子
紫外可见分光光度计
酸度计
生化培养箱
立式圧力蒸汽灭菌器
恒温培养箱
电热恒温干燥箱
电热鼓风干燥箱
电热恒温水浴锅
2.2培养基及试剂：
R流体硫乙醇酸盐培养基
b）改良马丁培养基
c）营养琼脂培养基
2.3稀释液、冲洗液及其制备方法
R质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液
b）0.1%蛋白豚水溶液取蛋白J冻l.Og,加水1000ml,微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±
0.2,分装，灭菌。
c）pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化
钠4.30,蛋白丿冻l.Og,加水1000ml,微温溶解，滤清，分装，灭菌。
二、实验前准备
2.1培养基要求：
用于培养需（厌）气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敬度检查及其他各项要求应符合《中国药典（二部）》附录中《无菌检查法》的规定。
培养基使用按中国药典方生产的符合规定的脱水培养基。
制备后采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基保存在2〜25°
C、避光的环境。
2.2器具灭菌：
与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器内121°
C30min,或置电热干燥箱内160°
C2h。
2.3无菌室要求：
无菌室操作台局部符合洁净度100级单向流空气区域要求。
无菌室在消毒处理完毕后，检查空气中的菌落数，方法如下：
取直径约90mm培养皿数支，无菌操作注入融化的营养琼脂培养基约20mL,在30°
C〜35°
C培养48h证明无菌后，取3只培养皿在无菌室操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好，置30°
C培养48h后取出检查，3只培养皿上生长的菌落数平均不得超过1个。
无菌试验过程中检查空气中的菌落数，方法同上。
在试验开始进行时打开平皿盖，至试验结束盖好照上法培养，符合上述要求。
2.4阳性对照：
选择金黃色葡萄球菌为对照菌，接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，23〜28°
C培养24〜48小时，将上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成
每lml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。
阳性对照试验的菌液制备方法验证试验，加菌量小于lOOcfu,供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。
阳性对照管培养48〜72小时应生长良好。
2.5阴性对照：
取相同稀释液、冲洗液同上法操作，作为阴性对照。
阴性对照不得有菌生长。
客户提供生产的医用产品，每件医用产品均是一个独立的单元产品，其样品份额为1。
具体步骤如下：
1.随机抽取连续三批常规生产的产品，每批10件，共30件做生物负载检测。
另从其中一批随机取5件样品，做回收率实验。
2.当每个批平均生物负载都不超过三批总平均生物负载的2倍时，根据三批的总平均负载的检测结果，选择灭菌保证水平为10-2的灭菌剂量作为验证剂量。
3.对以上三批抽样产品连续生产的110件产品实施验证剂量，实际吸收剂量应在验证剂量的±
3%之内。
4.对用验证剂量辐照过的100件产品做无菌实验，其余的10件产品做无菌试验的验证实验。
5.根据无菌实验的结果，确定验证剂量是否被接受，即确定的验证剂量是否能够满足10-6的灭菌保证水平。
一、回收率测定
取5ml洗脱液洗脱5支产品，分别洗脱四次，然后将样品用营养琼脂做琼脂覆盖，于37°
C培养箱中，培养48±
2h,记录结果并得出修正系数。
二、初始污染菌测定
将随机抽取的30件样品中生物负载进行评佔，编号后，分别用5ml洗脱液洗脱，吸取lml置于9ml稀释液中，振摇均匀后分别取lml样品液于两个平皿中，记录编号为101,102,代表五十倍样，取lml置于9ml稀释液，振摇均匀后分别取lml样品液于两个平皿中，记录编号为1001,1002,代表五百倍样。
依次取第二件样品，至30件样品。
倾注营养琼脂，于37°
2h,记录结果。
三、确定验证剂量
ISO11137：
2006医疗器械灭菌的有效性确认和常规控制的要求中规定，若批次平均生物负载的每一个生物负载数值〈总的平均生物负载*2,则用总的平均生物负载，若一批或更多批次的平均生物负载$总的平均生物负载*2,则用最高批次。
本次试验釆用总平均初始污染菌120（cfu/SIP）确定验证剂量。
查IS011137：
2006表格得出对应的验证剂量为8.2kGy,该试验剂量下的无菌保证水平SAL为10-2。
四、验证剂量辐照结果
从产品的单个批次中选出110个单元产品的样本，暴露在XXXXX公司的电子加速器传送带上辐照，使辐射剂量落在8.2±
5%kGy范围内。
辐照后进行无菌试验。
五、无菌试验
5.1供试液制备及接种
取样品按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ID1的比例，振摇数次。
收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中。
5.2无菌检验培养温度
硫乙醇酸盐流体培养基，置30〜35°
C培养。
改良马丁培养基，置23〜28°
5.3接种
采用直接接种法
每管培养基的最低用量一一硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml,改良马丁培养基每管装量不少于10mlo
5.4培养、观察
上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，除阳性对照管和阴性对照管培养48〜72小时外，其余管培养14天。
培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
对三批医用产品进行初始污染菌测试后，修正系数为1.08,结果如下：
批号初始污染菌平均数（cfu/件）
总平均数
因此，根据IS011137-2：
2006建立灭菌剂量的规定，选用总平均生物负载为120（cfu/件）来确定验证剂量。
根据以上数据查表得验证剂量为kGy,对以上批次110件，实
测剂量为kGy（见辐照证明书）。
经观察，100件样品经验证剂量辐照后的无菌检查阳性数为零。
依据ISO11137:
2006规定，当SAL二10-6时，医用产品的灭菌剂量为kGyo在随后的常规辐照灭菌过程中，应通过剂量计监测，证明每一个产品的最小吸收剂量能够达到kGy的灭菌剂量，使灭菌保证水平为10-6SALo依据ISO11137:
2006标准，为了确保作为10-6SAL的灭菌剂量持续有效，必须按照规定的周期进行验证剂量审核，通常每三个月进行一次。
1、试验样品不可替代批量产品。
2、当批量产品辐照时的剂量确定，必须随机抽取该批量部分产品作初始污染菌验证。
参考资料
1、
IS011137-1：
2006医疗保健产品的灭菌-一
一-辐照-一
•一第一部分：
医
疗器械灭菌过程的发展、确认和常规控制要求
2、
IS011137-2：
辐照一-
-一第二部分：
建
立灭菌剂量
3、
IS011137-3：
一-第三部分：
剂
量指南
4、IS011737-1：
1995医用器材灭菌——微生物学方法——第1部分:
产品上微生物总数量的测定
5、IS011737-2：
1998医用器材灭菌微生物学方法第2部分:
灭菌过程确认中的无菌试验
初始污染菌检测规范
试验方法：
1、初始污染菌检测按IS011737-2006医疗器械的灭菌-微生物方法笫一部分产品上微生物总数的测定-MRC初始污染菌的测定
2、菌落总数回收率的测定方法同
（一）
回收率测定结果
样品名称：
医用产品
生产企业：
型号规
生产批号：
格：
样品数量：
样本号
洗脱次数
每次洗脱的细菌数（cfu/SIP）
平均菌落数
1
2
3
4
5
琼脂覆盖
全部菌落数
回收率％
平均回收率
修正系数
初始污染菌检测
型号规格：
样品
数量：
批号
需氧菌
（cfu/SIP）
11
21
12
22
13
23
14
24
15
25
6
16
26
7
17
27
8
18
28
9
19
29
10
20
30
SIP平均初
始污染菌
SIP平均
初始污染
菌
校正后批平均初始污染
（*1.08）
校正后批平均初始污染菌（*1.08）
校正后平均
初始污染菌
确定灭菌剂量
每批产品初始污染菌如下：
平均初始污染菌数（cfu/件）
剂量确定:
按照IS011137-2：
2006中关于建立灭菌剂量验证方式1查得120cfu/件的验
证剂量为kGy。
再按要求对20090529A03批次110件医用产品采用kGy
的验证剂量进行辐照处理，经无菌检查，阳性数为零。
这表明，kGy能够满足医用产品10-6的灭菌保证水平。
无菌检查
1、样品接种均应按无菌操作法进行；
2、无菌打开包装用灭菌剪刀、镶子，将产品转移至胰酪腺大豆肉汤中；
3、将置有样品的培养基放30+0.5°
C的培养箱中的培养14天；
观察有无细菌生长；
结果：
无菌试验的验证试验检验结果
生产批号
试验样品
数量
培养基
温度（°
C）
培养天数
阳性数
阴性数
胰胳蛋白陈
大豆肉汤
30±
0.5
结论：
经测试，所有验证试验的结果均为阳性，表明样品中无抑制细菌生长的释出物，说明无菌试验的结果有效。
无菌试验检验结果
100
硫乙醇酸盐流体培养基
改良马丁培养基
23±
经测试，无菌试验结果中，阳性数为0,证明验证剂量被接受，进而说明以KGy的剂量辐照产品能满足10-6的灭菌保证水平。
实验者：
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